楊勝 王莉麗 朱玉蓉 劉春玲 劉鵬 沈國松

313000湖州市婦幼保健院檢驗科(楊勝、朱玉蓉、劉春玲、劉鵬、沈國松)；313000湖州市大浙北專業(yè)體檢中心(王莉麗)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一種主要存在于人皮膚、黏膜及女性宮頸上皮細(xì)胞交界區(qū)的微小共價雙股環(huán)狀DNA病毒,無包膜,至今已發(fā)現(xiàn)200余種,超過35種可感染人類生殖系統(tǒng)[1]。2012年,子宮頸癌居全球女性最常見惡性腫瘤第4位,新發(fā)病例為528 000例[2]。目前已公認(rèn),HPV長期和持續(xù)感染是宮頸癌的主要誘因,某些高危型HPV反復(fù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件。HPV檢測已成為宮頸癌篩查和預(yù)防的關(guān)鍵問題之一,且HPV亞型分布有年齡、種族和地域性差異[3]。進(jìn)行HPV流行病學(xué)研究,建立地區(qū)性HPV感染流行度及主要型別數(shù)據(jù)庫,對HPV疫苗開發(fā)研究及應(yīng)用選擇有重要指導(dǎo)作用,對預(yù)防HPV感染和防治宮頸癌提供科學(xué)依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2016年12月份至2017年11月份在湖州婦幼保健院體檢中心參加婦科檢查且自愿參加HPV篩查的女性2 830例,平均年齡(41.8±10.4)歲。其中2 631例為單位體檢,199例為個人體檢。因本次研究對象≤25歲組僅45例,故不單獨分組。按年齡分成8組,并計算HPV感染率：≤30歲409例、＜30～≤35歲555例、＜35～≤40歲444例、＜40～≤45歲387例、＜45～≤50歲425例、＜50～≤55歲335例、＜55～≤60歲132例、＞60歲143例。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本處理及保存：無菌一次性宮頸采樣器由江蘇健友醫(yī)療科技有限公司提供；采用窺陰器或陰道擴張器充分暴露宮頸,用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去,將宮頸采樣器伸入宮頸鱗柱上皮交界處,單方向旋轉(zhuǎn)3～5圈采集宮頸脫落細(xì)胞,存入裝有細(xì)胞保存液的洗脫管,密閉,貼條碼送檢,檢驗科接受女性宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本后存入-20℃冰箱保存待測。

1.2.2 人乳頭病毒分型檢測：HPV病毒DNA提取及分型檢測均由江蘇碩世生物科技有限公司提供,采用羅氏熒光定量PCR儀Cobas z480型進(jìn)行PCR擴增及檢測分析。本試劑盒以人乳頭瘤病毒組L1區(qū)為靶區(qū)域,設(shè)計21個亞型特異性引物和探針用以檢測21 種 HPV 亞型(HPV16、18、31、59、66、53、33、58、45、56、52、35、68、51、39、82、26、73 及 6,11 和81)。所有操作按試劑及儀器說明書。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理,感染率等計數(shù)資料數(shù)據(jù)采用百分率(%)表示,兩組間及多組間比較采用χ2檢驗,以P＜0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染率2830例體檢標(biāo)本,HPV陽性269例,HPV總體感染率9.51%；以單一基因感染為主,感染率為8.27%(234/2 830),占所有HPV感染的86.99%(234/269)；雙重感染感染率為1.13%(32/2 830,),占 HPV感染的11.9%(32/269)；三重感染和四重感染分別發(fā)現(xiàn)2例和1例。具體數(shù)據(jù)見表1。單一感染高危型HPV亞型前5位依次為58、16、52、53、66；多重感染高危型亞型前五位依次為 52、16、66、39、58；單一感染與多重感染低危型HPV亞型均以81為主。其中在多重感染中未檢出HPV亞型33、37。詳細(xì)數(shù)據(jù)見圖1。

2.2 HPV不同基因亞型分布本次研究試劑盒檢測21種亞型中,檢測出19種基因亞型,未檢出HPV28和HPV82兩種亞型。因檢測標(biāo)本存在單一基因和多重基因感染,故2 830例實際檢出HPV基因308例次,高危亞型感染率9.11%(258/2 830),占HPV基因總檢出數(shù)的83.77%(258/308),以58、16、52為主,陽性率分別為 1.48%(42/2 830),1.31%(37/2 830),1.10%(31/2 830)。低危亞型感染率1.77%(50/2 830),占HPV基因總檢出數(shù)的16.23%(50/308),以81型為主,陽性感染率為1.27%(36/2 830)。具體數(shù)據(jù)見表2。

表1 2 830例體檢女性HPV感染情況Tab.1 HPV infection in 2 830 women who underwent physical examination

2.3 各年齡組人群HPV感染分布情況本研究8年齡組中,以56～60歲組女性HPV感染率最高(13.64%,18/132),31～35歲組女性HPV感染率最低(7.75%,43/555),兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.57,P=0.033)；單一基因感染率同樣以56～60歲組最高(12.12%,16/132),31～35歲組女性HPV感染率最低(6.31%,435/555),兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.25,P=0.022)?？偢腥韭屎蛦我换蚋腥韭示?1～35歲年齡段最低,56～60歲年齡段最高；以31～35歲開始隨年齡增長而增高,在56～60歲達(dá)峰值,然后開始下降,見圖2。本研究還顯示HPV總感染率不同年齡組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),但HPV高危亞型感染率不同年齡組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=23.66,P=0.001),詳細(xì)數(shù)據(jù)見表3。

表2 269例體檢女性HPV亞型分布情況Tab.2 HPV subtypes’ distribution of 269 women who underwent physical examination

3 討論

圖1 單一感染及多重感染HPV亞型分布Fig.1 Distribution of HPV subtypes of single infection and multiple infection

圖2 各年齡組HPV感染率Fig.2 Infection rate of HPV in different age groups

德國醫(yī)學(xué)科學(xué)家、病毒學(xué)家Harald zur Hausen從1970年起致力于研究HPV與宮頸癌之間的關(guān)系,結(jié)果證明某些類型的HPV就是宮頸癌的病原體,并以此于2008年獲得諾貝爾生理及醫(yī)學(xué)獎。高危型HPV最早被發(fā)現(xiàn)與女性宮頸癌發(fā)病關(guān)系密切,是女性宮頸癌的獨立危險因素[4],華東地區(qū)宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織HPV感染率為90.1%[5],HPV早期篩查、早期干預(yù)對宮頸癌的預(yù)防和治療有著積極的意義；近年來研究表明,HPV感染與女性乳腺癌發(fā)病同樣具有較強的關(guān)聯(lián)性[6],HPV感染致病性廣泛。

表3 HPV不同年齡組的感染情況Tab.3 Infection with HPV in different age groups

研究報道顯示,中國女性宮頸上皮脫落細(xì)胞HPV感染率為13.5% ～45.6%,不同地區(qū)感染率有差異[7]。湖州地區(qū)女性HPV總感染率為9.51%,以單一基因型感染為主,占86.99%,多重感染以二重感染為主。湖州地區(qū)HPV總感染率低于南京地區(qū)HPV的26.8%及溫州地區(qū)的18.66%[8-9],兩地均以單一基因型感染為主與本地區(qū)相同?？赡茉驗楹莸貐^(qū)過去數(shù)10年堅持1年兩次下鄉(xiāng)婦女病普查,提高全社會關(guān)注女性健康、防治女性疾病的意識提高女性健康水平和生活質(zhì)量。不同地域HPV感染率差異與地域經(jīng)濟(jì)條件、標(biāo)本采集、人群分布、生活習(xí)慣及人口流動等因素密切相關(guān)。另一原因為本次研究對象≤25歲組人數(shù)較少,文獻(xiàn)報道≤25歲是女性HPV感染的高峰期。

湖州地區(qū)婦女常見HPV高危亞型為58、16、52型,單一基因感染由高到低依次為 52、16、66、39、58型；文獻(xiàn)報道上海市婦女常見的HPV高危亞型為52、58、16、53、51 和 55 型[10],廣州地區(qū)婦女常見的HPV亞型為52、16、58[11]。HPV亞型分布地域差異,因此HPV分型檢測的推廣意義重大,快速準(zhǔn)確檢測HPV病毒及基因型聯(lián)合女性宮頸癌細(xì)胞學(xué)篩查的二級防御仍然是宮頸癌預(yù)防工作的主要策略。

HPV流行率具有年齡分布特點,Smith[12]報道≤25歲是女性HPV感染的高峰期,隨年齡增長感染率下降；35～50歲婦女感染率有地域性差異；60歲以上婦女感染率存在不同趨勢。適應(yīng)性免疫應(yīng)答缺乏以及性生活活躍對HPV感染敏感是導(dǎo)致30歲以下感染率較高的主要原因,但因年輕婦女機體免疫功能強,大多數(shù)感染呈一過性可自愈,35歲后隨年齡增長逐漸轉(zhuǎn)為持續(xù)性感染,導(dǎo)致感染率呈逐漸上升趨勢；56～60歲組感染率達(dá)最高峰可能原因為絕經(jīng)期后女性內(nèi)分泌激素水平變化較大引起的生理和免疫調(diào)節(jié)紊亂。高危型感染率不同年齡組差異有統(tǒng)計學(xué)意義,高危型HPV持續(xù)性感染與宮頸上皮瘤變(CIN)和宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切,且有地域差異,因此,研究本地區(qū)高危型HPV亞型年齡分布特點對宮頸癌預(yù)防及治療有重要的臨床指導(dǎo)價值。

HPV疫苗的臨床應(yīng)用是人類首次嘗試通過疫苗的接種消滅一種癌癥,具有時代意義。中國食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)2016、2017年分別批準(zhǔn)2價和4價HPV疫苗上市,中國香港9價HPV疫苗也已上市,宮頸癌的一級預(yù)防成為事實,對預(yù)防、控制HPV感染,降低宮頸癌發(fā)病率及死亡率有著重大作用。建立地區(qū)HPV感染流行度及主要型別數(shù)據(jù)庫可指導(dǎo)臨床疫苗選擇應(yīng)用,為研發(fā)適合本地區(qū)人群的HPV疫苗提供科學(xué)依據(jù)。

利益沖突無