豬傳染性胃腸炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine， TGEV)是引起豬腹瀉的重要病原，主要引起兩周齡以內(nèi)仔豬發(fā)生以急性腹瀉、脫水及高死亡率為特征的豬傳染性胃腸炎(TGE)，該病給世界各國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。我國從20世紀50年代起就有豬傳染性胃腸炎的報道，并且一直以來在我國養(yǎng)豬場時有發(fā)生，尤其是冬季和早春寒冷季節(jié)常呈地方性暴發(fā)流行，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成極大的危害。豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea virus，PEDV）是引起一種急性、高度傳染性病毒性腸道疾病，多在寒冷的冬季發(fā)生，臨床上主要以嘔吐、嚴重腹瀉、脫水和高死亡率為特征。該病最早于1971年在英國發(fā)現(xiàn)，隨后在整個歐洲蔓延，1978年比利時分離到病毒。我國于1973年首次出現(xiàn)，1995年開始使用豬流行腹瀉與豬傳染性胃腸炎二聯(lián)滅活疫苗和弱毒疫苗，對該病的控制起到了積極的作用。但2010年10月以來豬流行性腹瀉在我國多個省份暴發(fā)流行，并且表現(xiàn)出新的特征。

本產(chǎn)品前期實驗室研究結(jié)果顯示豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株）具有良好的安全性，為了進一步明確該滅活疫苗在田間應(yīng)用的安全性，課題組開展了本項研究，旨在為豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株）的現(xiàn)地應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.材料

（1）疫苗。豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株），5批中試產(chǎn)品，批號為201701、201702、201703，201704，201705，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備；

（2）檢驗用強毒。豬傳染性胃腸炎病毒（JL株），批號為TGEV-Q-201601，病毒含量107.50TCID50/0.2 ml；豬流行性腹瀉?。℉N-1株），批號：PEDV-Q-201601，病毒含量107.38TCID50/ml，由哈藥集團生物疫苗有限公司制備、鑒定、保存；

（3）試驗動物。3～5日齡仔豬8 400頭；懷孕79～86日母豬800頭，分別由豬場1、豬場2、豬場3提供，常規(guī)飼養(yǎng)管理。

2.方法

（1）仔豬安全性試驗設(shè)計及方法。用5批豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株），批號為201701、201702、201703，201704，201705進行田間安全性試驗，分別在3個規(guī)?；i場進行，采取平行分組設(shè)計和隨機化分組原則，對3～5日齡仔豬進行單劑量接種、單劑量重復(fù)接種和超劑量接種安全試驗。①仔豬一次單劑量接種：經(jīng)頸部肌肉接種3～5日齡仔豬，1.0 ml/頭（1倍使用劑量），共接種3 600頭；②仔豬單劑量重復(fù)接種：經(jīng)頸部肌肉接種3～5日齡仔豬，1.0 ml/頭，14日后以同樣方式再接種1次，共接種500頭；③仔豬一次超劑量接種：經(jīng)頸部肌肉接種3～5日齡仔豬，2.0 ml/頭（2倍使用劑量），共接種500頭。仔豬安全性試驗設(shè)計見表1。

（2） 母豬安全性試驗設(shè)計及方法。用5批豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株），批號為201701、201702、201703，201704，201705進行田間安全性試驗，分別在3個規(guī)?；i場進行，采取平行分組設(shè)計和隨機化分組原則，對妊娠79～86日齡母豬進行單劑量接種、單劑量重復(fù)接種和超劑量接種安全試驗。①母豬一次單劑量接種：經(jīng)頸部肌肉接種妊娠79～86日齡母豬，2.0 ml/頭（1倍使用劑量），共接種500頭；②母豬單劑量重復(fù)接種：經(jīng)頸部肌肉接種妊娠79～86日齡母豬，2.0 ml/頭，14日后以同樣方式再接種1次，共接種300頭；③仔豬一次超劑量接種：經(jīng)頸部肌肉接種妊娠79～86日齡母豬，4.0 ml/頭（2倍使用劑量），共接種300頭。母豬安全性試驗設(shè)計見表2。

表1 仔豬田間安全性試驗設(shè)計

表2 妊娠母豬仔豬田間安全性試驗設(shè)計

（3）安全性評價指標。①臨床狀況：每日系統(tǒng)觀察注射疫苗后臨床狀況，包括精神狀態(tài)、行為活動、糞便、采食、飲水等，與未注射試驗疫苗的空白對照組進行比較，評估試驗疫苗對豬的不良反應(yīng)；②局部與全身反應(yīng)：注射后7日內(nèi)每日觀察注射疫苗豬的全身反應(yīng)（包括過敏反應(yīng)、應(yīng)激反應(yīng)等）及局部不良反應(yīng)（包括紅、腫、硬結(jié)等）、按照附錄中局部和全身反應(yīng)分級標準進行評價，與未注射疫苗的空白對照進行比較，評估試驗疫苗對豬的不良反應(yīng)；③生長性能：注射后28日，從3個豬場試驗疫苗組和空白對照組抽取試驗豬各30頭，稱量體重，對比試驗疫苗組和空白對照豬生產(chǎn)性能差異情況，評估試驗疫苗對豬生長性能的影響；④對懷孕期豬進行跟蹤觀察：至產(chǎn)仔后，記錄母豬注射疫苗后的臨床癥狀，局部與全身反應(yīng)及產(chǎn)仔情況，有無流產(chǎn)、死產(chǎn)和死胎現(xiàn)象；仔豬體重增長情況。

二、結(jié)果

1.對3～5日齡仔豬的安全性。5批中試產(chǎn)品以不同劑量（一次單劑量、單劑量重復(fù)、一次超劑量）接種3～5日齡健康仔豬，3個試驗豬場共計接種8 400頭。在接種后觀察期內(nèi)，仔豬采食、精神、大小便等均正常，體溫亦未見異常變化，接種部位無腫塊形成和炎癥反應(yīng)，表明5批疫苗對仔豬均是安全的。具體見表3。

表3 仔豬田間安全性試驗觀察結(jié)果

2.對妊娠79～86日齡母豬的安全性。5批中試產(chǎn)品以不同劑量（一次單劑量、單劑量重復(fù)、一次超劑量）接種妊娠79～86日齡母豬，3個試驗豬場共計接種800頭，對接種母豬的臨床表現(xiàn)和體溫進行觀察和測定，并統(tǒng)計產(chǎn)仔成績。結(jié)果5批中試產(chǎn)品接種的母豬在整個觀察期間采食、精神、大小便等均正常，體溫亦未見異常變化，接種部位也無腫塊形成和炎癥反應(yīng)。疫苗免疫組和對照組妊娠母豬的生產(chǎn)性能均未見影響，產(chǎn)仔正常，所產(chǎn)仔豬的出生平均體重和1個月平均斷乳體重無差異，說明5批中試產(chǎn)品對妊娠母豬是安全的。具體見表4～6。

表4 妊娠母豬田間安全性試驗觀察結(jié)果

三、討論

該研究應(yīng)用GMP生產(chǎn)線生產(chǎn)的5批豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗（JL株+ HN-1株），進行田間安全性試驗。通過在3個豬場對3～5日齡仔豬進行單劑量接種、單劑量重復(fù)接種和超劑量接種安全試驗。在接種后觀察期內(nèi)，仔豬采食、精神、大小便等均正常，體溫亦未見異常變化，接種部位無腫塊形成和炎癥反應(yīng)，生產(chǎn)性方面與非試驗豬群均無顯著差異，試驗表明本產(chǎn)品對仔豬的安全性良好。

表5 妊娠母豬田間安全性試驗產(chǎn)仔情況結(jié)果

表6 妊娠母豬田間安全性試驗所產(chǎn)仔豬體重記錄（kg）

通過在3個豬場對妊娠79～86日齡母豬進行單劑量接種、單劑量重復(fù)接種和超劑量接種安全試驗。在接種后觀察期內(nèi)，母豬采食、精神、大小便等均正常，體溫亦未見異常變化，接種部位也無腫塊形成和炎癥反應(yīng)，且所有接種母豬的生產(chǎn)性能均未見影響，產(chǎn)仔正常，試驗表明本產(chǎn)品對妊娠母豬的安全性良好。

參考文獻（略）