黨冰怡，胡曉悅，梁宏德*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南鄭州 450046；2.河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院,河南鄭州 450042)

巴貝斯蟲是一類隸屬梨形蟲目、巴貝斯蟲科、巴貝斯蟲屬(Babesia)的寄生于宿主紅細(xì)胞內(nèi)的單細(xì)胞血液原蟲[1]。犬的巴貝斯蟲病由犬源巴貝斯蟲感染引起，主要病原有吉氏巴貝斯蟲(B.gibsoni)、犬巴貝斯蟲(B.canis)和韋氏巴貝斯蟲(B.vogeli)等。自1895年首次報(bào)道獵犬的犬巴貝斯蟲病以來，世界各地均有犬巴貝斯蟲病的報(bào)道。犬類感染巴貝斯蟲后，臨床表現(xiàn)精神沉郁、嗜睡、消瘦、貧血、血紅蛋白尿、黃疸等癥狀，急性感染可導(dǎo)致犬只死亡[2]。犬與人類關(guān)系密切，是人類接觸的主要蜱蟲宿主，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成威脅。本文就犬源巴貝斯蟲的流行病學(xué)和檢測(cè)方法等重點(diǎn)綜述，以期為犬巴貝斯蟲病的防控提供參考。

1 流行病學(xué)

1.1 病原種類

目前已報(bào)道的犬源巴貝斯蟲主要有7種(表1)，根據(jù)其在紅細(xì)胞中的形態(tài)、大小和分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果，將其分為大巴貝斯蟲(2.5 μm～5.0 μm)和小巴貝斯蟲(1.0 μm～2.5 μm)，前者包括犬巴貝斯蟲(B.canis)、韋氏巴貝斯蟲(B.vogeli)和羅氏巴貝斯蟲(B.rossi)，后者包括吉氏巴貝斯蟲(B.gibsoni)、B.conradae、小巴貝斯蟲(B.microti)和犬泰勒原蟲Theileiraannae[3]。

1.2 傳播媒介

犬源巴貝斯蟲的主要傳播媒介是硬蜱，不同犬源巴貝斯蟲的宿主蜱也不相同(表1)。犬巴貝斯蟲病的高發(fā)期與蜱蟲活躍期密切相關(guān)，通常發(fā)于春夏秋三季，其中多發(fā)于夏秋蜱蟲活躍期，有較強(qiáng)的季節(jié)性[3]。

1.3 傳播途徑

犬源巴貝斯蟲傳染犬科宿主的自然途徑為蜱蟲叮咬機(jī)械性傳播，此外也有研究證明輸血[4]，犬-犬直接傳播[5]，胎盤垂直傳播[6]也會(huì)成為犬源巴貝斯蟲的傳播途徑。

1.4 生活史

犬源巴貝斯蟲的生活史包括宿主感染和硬蜱傳播兩大部分。巴貝斯蟲寄生于犬類宿主紅細(xì)胞內(nèi)，硬蜱通過叮咬攜帶病原的犬類而感染。病原進(jìn)入硬蜱體內(nèi)后，侵染蜱蟲的腸道上皮細(xì)胞，反復(fù)進(jìn)行分裂生殖，形成的合子侵入蜱卵母細(xì)胞內(nèi)并保持休眠狀態(tài)。由卵孵化而來的幼蜱蟲中便攜帶了病原。合子在幼蜱體內(nèi)隨血液進(jìn)入唾液腺，發(fā)育形成具有感染能力的子孢子。當(dāng)幼蜱或成蜱叮咬健康犬時(shí)，子孢子便進(jìn)入犬體內(nèi)，并通過進(jìn)入紅細(xì)胞，隨后紅細(xì)胞被蟲體分解[7]，即通過吸食血液完成一個(gè)生活周期。

1.5 流行分布

犬巴貝斯蟲病在世界各地均有發(fā)現(xiàn)和報(bào)道。不同巴貝斯蟲的分布具有地域性，其中犬巴貝斯蟲在亞洲、歐洲、北美洲和大洋洲均有報(bào)道；吉氏巴貝斯蟲和韋氏巴貝斯蟲則呈世界性分布。Hamel D等[8]對(duì)歐洲的羅馬尼亞和匈牙利216只犬進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)犬巴貝斯蟲在羅馬尼亞寵物犬中感染率高達(dá)44.8%。Konishi K等[9]對(duì)日本的1207份犬血液樣品進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)吉氏巴貝斯蟲感染率為10.6%。Criado-Fornelio A等[10-11]在法國的調(diào)查顯示，法國韋氏巴貝斯蟲感染率為0.9%～13.6%。

在我國，犬源巴貝斯蟲分布廣泛。犬巴貝斯蟲和吉氏巴貝斯蟲在江蘇、河南、安徽等16個(gè)省份均有報(bào)道，韋氏巴貝斯蟲則主要分布于廣東、重慶、浙江、江蘇等省市。據(jù)Xu D等[12]報(bào)道，江蘇的犬韋氏巴貝斯蟲感染率高達(dá)11.3%，吉氏巴貝斯蟲感染率為1.5%。王望寶等[13]檢測(cè)了我國32個(gè)不同地區(qū)的警犬血液樣品，結(jié)果顯示感染警犬的均為韋氏巴貝斯蟲，且重慶地區(qū)感染率最高，達(dá)26.67%。

表1 不同犬源巴貝斯蟲的形態(tài)特征和傳播媒介

1.6 感染犬只年齡和品種

犬巴貝斯蟲病發(fā)病率與年齡無顯著相關(guān)性，但不同性別、不同品種的犬發(fā)病率存在差異。姜莉莉等[14]對(duì)遼寧錦州地區(qū)86例犬巴貝斯蟲病病例的分析證明發(fā)病率與年齡無明顯相關(guān)性，各年齡段的犬均可感染發(fā)病。雌性犬對(duì)于羅氏巴貝斯蟲的感染風(fēng)險(xiǎn)低于雄性犬和絕育犬[15]。楊其清[16]對(duì)南京地區(qū)144例犬巴貝斯蟲病病例分析發(fā)現(xiàn)，狼犬發(fā)病率最高，京巴犬次之，雜種犬、博美犬和西施犬發(fā)病率較低。此外，幼齡犬感染犬巴貝斯蟲和韋氏巴貝斯蟲后臨床癥狀較明顯[17-18]。

2 檢測(cè)方法

2.1 常規(guī)血液病原學(xué)檢測(cè)

目前，檢測(cè)犬巴貝斯蟲的方法較多，但血涂片染色鏡檢仍是最常用的檢查方法，也是實(shí)驗(yàn)室和臨床基礎(chǔ)診斷方法。該方法可在顯微鏡下直觀觀察寄居于犬紅細(xì)胞內(nèi)的犬源巴貝斯蟲的基本形態(tài)、大小，并根據(jù)形態(tài)特征初步確定病原種類。犬巴貝斯蟲一般成對(duì)出現(xiàn)，多呈雙梨籽形排列，兩蟲銳角端相連；韋氏巴貝斯蟲多為圓形、卵圓形和梨籽形；羅氏巴貝斯蟲一般成對(duì)出現(xiàn)。吉氏巴貝斯蟲單個(gè)或多個(gè)出現(xiàn)，在紅細(xì)胞內(nèi)的形態(tài)多為圓點(diǎn)狀，少數(shù)呈月牙狀、指環(huán)狀及雙芽形，蟲體長度小于紅細(xì)胞半徑[2](表1)。血涂片檢查雖然簡(jiǎn)單迅速，但要求檢查者對(duì)犬各種巴貝斯蟲形態(tài)特征要充分了解；檢出率較低且難以區(qū)別形態(tài)相近的病原。此外，該方法對(duì)隱性感染犬的病理檢出率較低。

2.2 免疫學(xué)檢測(cè)

常用的免疫學(xué)檢測(cè)方法主要有間接熒光抗體技術(shù)(indirect fluorescent antibody，IFA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(complement fixation test，CFT)、間接血凝試驗(yàn)(indirect heamagglutination assay，IHA)等方法。陳啟軍等[19]用間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence，IIF)鑒定出南京地區(qū)流行的吉氏巴貝斯蟲蟲種與日本吉氏巴貝斯蟲蟲種存在基因差異。巴音查汗等[20]采用ELISA和IFA檢測(cè)犬吉氏巴貝斯蟲病陽性率，結(jié)果一致。IFA和ELISA因其高效性而應(yīng)用較為廣泛，但不同巴貝斯蟲種間存在交叉反應(yīng)。ELISA在臨床診斷中應(yīng)用較少，較常用于研究和流行病學(xué)調(diào)查。同時(shí)，由于病原感染后特異性抗體出現(xiàn)較晚，故免疫學(xué)檢測(cè)方法難以在疾病的早期對(duì)巴貝斯蟲病進(jìn)行診斷。

2.3 分子生物學(xué)檢測(cè)

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和套式PCR(nested PCR)、半套式PCR(seminested PCR)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)和核酸探針法等方法逐漸被應(yīng)用到臨床檢測(cè)中。應(yīng)用PCR技術(shù)鑒定出土耳其3例自然感染的犬巴貝斯蟲病病原為韋氏巴貝斯蟲亞種[21]。Birkenheuer等[22]用Nested PCR檢測(cè)并區(qū)分犬巴貝斯蟲、吉氏巴貝斯蟲、韋氏巴貝斯蟲和羅氏巴貝斯蟲。Wang C等[23]用高分辨定量熒光共振能量轉(zhuǎn)移PCR技術(shù)區(qū)分犬源巴貝斯蟲的種類。Penzhorn B L等[24]用生物探針進(jìn)行特異性檢查，發(fā)現(xiàn)黑背豺是羅氏巴貝斯蟲在非洲的自然宿主。與常規(guī)病原學(xué)檢查和免疫學(xué)方法相比，核酸探針法的最大優(yōu)點(diǎn)是可較準(zhǔn)確地區(qū)分形態(tài)相似的病原，因此多被用于病原的分類鑒定，但該方法需要設(shè)備復(fù)雜且檢出速度慢，僅適用于實(shí)驗(yàn)室病原深入研究，因此較少用于分子流行病學(xué)調(diào)查。PCR方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可用于早期病原診斷和分子流行病學(xué)調(diào)查，但其操作較為繁瑣，不適合臨床實(shí)踐中現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。

3 結(jié)語

綜上所述，前人在犬源巴貝斯蟲的流行病學(xué)和病原檢測(cè)與診斷等方面進(jìn)行了較多的研究并取得了長足進(jìn)展，但不同地域、不同品種犬的巴貝斯蟲病的發(fā)生與流行的復(fù)雜性等，仍需要開展深入細(xì)致的工作；建立敏感性高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速、適于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用的病原檢測(cè)和疾病診斷方法，對(duì)犬源巴貝斯蟲的流行病學(xué)調(diào)查、疾病診斷與防控等具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1] 汪 明.獸醫(yī)寄生蟲學(xué)[M]，北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：386-387.

[2] Solano-Gallego L,Sainz,Roura X,et al.A review of canine babesiosis:the European perspective[J].Parasites Vectors,2016,9(1):336-354.

[3] Huber D,Beck A,Anzulovic ?,et al.Microscopic and molecular analysis ofBabesiacanisin archived and diagnostic specimens reveal the impact of anti-parasitic treatment and postmortem changes on pathogen detection[J].Parasites Vectors,2017,10(1):495-504.

[4] Stegeman J R,Birkenheuer A J,Kruger J M,et al.Transfusion-associatedBabesiagibsoniinfection in a dog[J].J Am Vet Med Association,2003,222 (7):959-963.

[5] Yeagley T J,Reichard M V,Hempstead J E,et al.Detection ofBabesiagibsoniand the canine smallBabesia‘Spanish isolate’in blood samples obtained from dogs confiscated from dogfighting operations[J].J Am Vet Med Asso,2009,235(5):535-539.

[6] Fukumoto S,Suzuki H,Igarashi I,et al.Fatal experimental transplacentalBabesiagibsoniinfections in dogs[J].Int J Parasitol,2005,35 (9):1031-1035.

[7] 董君艷,王力光,婁紅軍.犬吉氏巴貝斯蟲病的胎盤傳播及綜合防制[J].畜牧與獸醫(yī),2001,33 (1):26-27.

[8] Hamel D,Silaghi C,Lescai D,et al.Epidemiological aspects on vector-borne infections in stray and pet dogs from Romania and Hungary with focus onBabesiaspp[J].Parasitol Res,2012,110(4):1537-1545.

[9] Konishi K,Sakata Y,Miyazaki N,et al.Epidemiological survey ofBabesiagibsoniinfection in dogs in Japan by enzyme-linked immunosorbent assay usingB.gibsonithrombospondin-related adhesive protein antigen[J].Vet Parasitol,2008,155(3):204-208.

[10] Criado-Fornelio A,Buling A,Pingret J L,et al.Hemoprotozoa of domestic animals in France:prevalence and molecular characterization[J].Vet Parasitol,2009,159(1):73-76.

[11] René-Martellet M,Moro C V,Chêne J,et al.Update on epidemiology of canine babesiosis in Southern France[J].BMC Vet Res,2015,11(1):223-234.

[12] Xu D,Zhang J,Shi Z,et al.Molecular detection of vector-borne agents in dogs from ten provinces of China[J].Parasites Vectors,2015,8(1):501-508.

[13] 王望寶,劉占斌,包喜軍,等.我國部分地區(qū)警犬蜱流行病學(xué)調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志,2013,49 (2):17-20.

[14] 姜莉莉,樊兆斌,李慶國,等.錦州地區(qū)寵物犬巴貝斯蟲病流行情況調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2011,(19):110-112.

[15] Mellanby R J,Handel I G,Clements D N,et al.Breed and sex risk factors for canine babesiosis in South Africa[J].J Vet Inter Med,2011,25 (5):1186-1189.

[16] 楊其清.犬吉氏巴貝斯蟲重組表達(dá)抗原檢測(cè)技術(shù)的建立及其在流行病學(xué)調(diào)查上的應(yīng)用[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

[17] Solano-Gallego L,Baneth G.Babesiosis in dogs and cats expanding parasitological and clinical spectra[J].Vet Parasitol,2011,181 (1):48-60.

[18] Solano-Gallego L,Trotta M,Carli E,et al.BabesiacaniscanisandBabesiacanisvogeliclinicopathological findings and DNA detection by means of PCR-RFLP in blood from Italian dogs suspected of tick-borne disease[J].Vet Parasitol,2008,157 (3):211-221.

[19] 陳啟軍,曹桂榮,李德昌,等.南京地區(qū)犬的巴貝斯蟲病病原形態(tài)學(xué)觀察及免疫熒光鑒定[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),1993(1):17-20.

[20] 巴音查汗,米曉云,福本新屋,等.克隆表達(dá)的犬吉氏巴貝斯蟲重組GST-P130kDa用于血清學(xué)診斷[J].中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào),2005,13 (4):9-12.

[21] G Lanber A,Gorenflot A,Schetters T P M,et al.First molecular diagnosis ofBabesiavogeliin domestic dogs from Turkey[J].Vet Parasitol,2006,139 (1-3):224-230.

[22] Birkenheuer A J,Levy M G,Breitschwerdt E B.Development and evaluation of a seminested PCR for detection and differentiation ofBabesiagibsoni(Asian genotype) andB.canisDNA in canine blood samples[J].J Clin Microbiol,2003,41 (9):4172-4177.

[23] Wang C,Ahluwalia S K,Li Y,et al.Frequency and therapy monitoring of canineBabesiaspp.infection by high-resolution melting curve quantitative FRET-PCR[J].Vet Parasitol,2010,168 (1-2):11-18.

[24] Penzhorn B L,Vorster I,Harrison-White R F,et al.Black-backed jackals (Canismesomelas) are natural hosts ofBabesiarossi,the virulent causative agent of canine babesiosis in sub-Saharan Africa[J].Parasites Vectors,2017,10(1):124-130.