彭小東，李紅洲，陳大鵬，王 歡，常 茜，張 建

(1.貴州省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，貴陽(yáng)550013；2.貴州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴陽(yáng)550008；3.貴州師范大學(xué)，貴陽(yáng)550025)

刺梨（Rosa roxburghiiTratt）是一種具有很高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的水果，富含各種維生素、氨基酸、多糖及微量元素，更有“維C之王”的稱號(hào)，每100 g刺梨中維生素C的含量高達(dá)2200～2500 mg[1]。刺梨發(fā)酵型果酒的酒精度普遍較低，保留了刺梨中的維生素、氨基酸和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)元素[2]，比以糧食酒為原料的蒸餾酒有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[3-4]，具有調(diào)節(jié)人體新陳代謝、促進(jìn)血液循環(huán)、控制體內(nèi)膽固醇水平、抗衰老等醫(yī)療保健作用[5-6]。測(cè)定刺梨果酒中的維生素C含量可以為刺梨果酒的開發(fā)利用提供參考?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.86—2016中維生素C的測(cè)定方法有：高效液相色譜法、熒光法、2，6-二氯靛酚滴定法[7]。其中高效液相色譜法具有高效、穩(wěn)定、適用廣等特點(diǎn)，本研究通過(guò)對(duì)高效液相色譜法測(cè)定刺梨果酒中維生素C含量，為刺梨果酒的維生素C提供科學(xué)的檢測(cè)參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

試樣：某酒類公司生產(chǎn)的刺梨果酒。

試劑：維生素C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：Dr Ehrenstorfer GmbH 公司，CAS：50-81-7；草酸、鹽酸、磷酸、偏磷酸、磷酸二氫鉀均為分析純。

儀器設(shè)備：Aglient 1260 II高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器），美國(guó)安捷倫公司；混勻振蕩器，Heidolph公司；SB25-12DTD超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；移液器，德國(guó)普蘭德公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 液相色譜條件

色譜柱，Poroshell 120 EC-C18柱(100mm×4.6mm×2.7 μm，美國(guó)安捷倫公司)；流動(dòng)相，0.5% 的磷酸二氫鉀溶液，pH2.0～3.0；流速，1 mL/min；進(jìn)樣量，10 μL；柱溫，35 ℃；紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取維生素C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.0 g（精確至0.1 mg）于10 mL容量瓶中，超純水溶解并定容，得100 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液，用超純水逐級(jí)進(jìn)行梯度稀釋，獲得2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2.3 樣品前處理

準(zhǔn)確移取1 mL的刺梨果酒樣品于50 mL的容量瓶中，用提取試劑定容至刻度，超聲振蕩提取10 min，過(guò)0.22 μm的水系膜，待上機(jī)。

1.2.4 計(jì)算公式

維生素C含量的計(jì)算，見式（1）：

式（1）中：X為樣品中維生素C的含量，mg/L；C為標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的樣品維生素C的濃度，μg/mL；C0為空白的維生素C的濃度，μg/mL；V為定容體積，mL；v為取樣體積，mL；d為稀釋倍數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性方程

維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，由圖1可知，維生素C在0.5～20 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好，回歸方程：Y=31.74429X-1.52931，相關(guān)系數(shù)r=0.9994。

圖1 維生素C的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 方法的精密度及檢出限

精密度：對(duì)同一濃度的維生素C標(biāo)液連續(xù)6次進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)峰面積計(jì)算其精密度，結(jié)果見表1。

由表1數(shù)據(jù)可知，6次重復(fù)測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.73%，保留時(shí)間穩(wěn)定（圖2），均在1.652 min，表明該方法的重現(xiàn)性良好。

檢出限：以3倍信噪比（S/N）的計(jì)算檢出限，在取樣量為1 mL時(shí)，維生素C的方法檢出限為0.99 mg/L。

2.3 不同提取試劑對(duì)刺梨果酒中維生素C含量測(cè)定的影響

分別以2%的草酸、鹽酸、磷酸、偏磷酸作為提取試劑，對(duì)刺梨果酒中的維生素C含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)其進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)量為100 μg/mL，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 維生素C測(cè)定方法的精密度

表2 不同提取試劑對(duì)刺梨果酒中維生素C含量測(cè)定的影響

圖2 10 μg/mL維生素C標(biāo)準(zhǔn)溶液疊加色譜圖（n=6）

如表2所示，草酸和偏磷酸作為提取試劑時(shí)，測(cè)得刺梨果酒中維生素C結(jié)果較為一致，且較之其他兩種提取試劑的測(cè)定數(shù)據(jù)要高，鹽酸次之，磷酸最低，RSD為0.33%～1.20%，表明不同提取試劑對(duì)刺梨果酒中維生素C測(cè)定結(jié)果有影響。

4種提取試劑的加標(biāo)回收率在96.7%～104.8%之間，回收率良好，數(shù)值相近。

2.4 不同提取濃度對(duì)刺梨果酒中維生素C含量測(cè)定的影響

實(shí)驗(yàn)采用不同濃度梯度（0.5%、1%、5%、8%、10%）的提取劑，考察其對(duì)刺梨果酒中維生素C含量測(cè)定的影響，結(jié)果見表3。

如表3所示，從提取劑的濃度來(lái)看，草酸、偏磷酸均在8%時(shí)，測(cè)定結(jié)果最大，分別為78.4%和79.1%，鹽酸在1%時(shí)最大，三者差異不大。磷酸則隨濃度的升高，測(cè)定結(jié)果不斷升高，在8%、10%濃度時(shí)達(dá)到最高，但較之其他幾種提取試劑的測(cè)定結(jié)果有很大差異，只有提取效果最好組（8%的偏磷酸）的76.5%，其RSD值較之其他幾種提取試劑也較大，表明磷酸提取效果不好。

表3 不同濃度的提取劑對(duì)維生素C測(cè)定結(jié)果的影響

3 結(jié)論

采用超聲振蕩提取，高效液相色譜，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，測(cè)定刺梨果酒中的維生素C含量。結(jié)果表明：該方法線性良好（r=0.9994），重現(xiàn)性較佳（RSD=0.73%），回收率高（96.7%～104.8%）；草酸、偏磷酸提取劑均在8%的濃度下提取效果最佳，鹽酸在1%的濃度時(shí)效果最好，三者的提取最佳值相近；磷酸提取效果不好，提取最高值只有效果最好組（8%的偏磷酸）的76.5%，且提取濃度要求高；因此，結(jié)合提取效果及經(jīng)濟(jì)效益（提取濃度）考慮，可選用1%的鹽酸作為提取劑。該方法操作簡(jiǎn)單、快捷、重現(xiàn)性好、回收率高，適用于刺梨果酒中維生素C的檢測(cè)。

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[7]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì).食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中抗壞血酸的測(cè)定：GB 5009.86—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2017.