山雞傳染性法氏囊病免疫與效價(jià)評(píng)估

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(1.上海欣灝珍禽育種有限公司，上海 奉賢 201403； 2.上海市奉賢區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 奉賢 201400)

0 引言

雞傳染性法氏囊病(IBD)是一種以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和囊內(nèi)淋巴細(xì)胞嚴(yán)重受損為特征的急性、接觸性傳染病，其病原體為傳染性法氏囊病毒(IBDV)。法氏囊是禽類特有的免疫器官，又稱腔上囊，其在70～80日齡時(shí)的體積最大，以后逐漸消退，至性成熟時(shí)完全消失，因此IBD主要發(fā)生于雞的早期生長(zhǎng)階段。

IBD是目前養(yǎng)禽業(yè)中最重要的疫病之一，其對(duì)所有品種的雞均可感染，且發(fā)病率可達(dá)100%，但死亡率較低，為5%～15%；由于IBD可引起雞的法氏囊炎癥而造成機(jī)體免疫抑制，使病雞馬立克氏病和新城疫等疫苗免疫的反應(yīng)能力下降以及對(duì)球蟲病和大腸桿菌等細(xì)菌性疾病更易感，對(duì)雞群造成更大損失。

對(duì)IBD的預(yù)防，目前各山雞養(yǎng)殖場(chǎng)主要是采用蛋種雞的免疫程序來對(duì)種山雞實(shí)施免疫，但在生產(chǎn)實(shí)踐中常會(huì)出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象。為此，筆者選擇了一家大型山雞育種公司的一批種山雞(雛苗)，開展了一輪山雞全周期(一個(gè)世代、56周)IBD疫苗免疫和課題效價(jià)評(píng)估的的試驗(yàn)，并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果提出了山雞專用的免疫程序?，F(xiàn)將試驗(yàn)情況匯總?cè)缦隆?/p>

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)山雞

選擇某大型山雞養(yǎng)殖場(chǎng)2016年7月2日出雛的祖代1日齡種山雞雛苗1萬羽；該批雛苗的入孵種蛋為43周齡健康種山雞所產(chǎn)；孵化過程嚴(yán)格按照種蛋孵化流程操作。記錄顯示，該批入孵種蛋的親本母山雞在整個(gè)飼養(yǎng)期已分別于19日齡和26日齡采用IBD活疫苗(B87株)進(jìn)行了2次飲水免疫，并于125日齡時(shí)實(shí)施了IBD滅活疫苗的免疫。

1.1.2 免疫疫苗

(1)IBD滅活疫苗:IBD基因工程亞單位疫苗；生產(chǎn)商：青島易幫生物工程有限公司；批號(hào)：160041405；有效期：2017.06.30。

(2)IBD活疫苗:IBD活疫苗(B87株)；生產(chǎn)商：青島易幫生物工程有限公司；批號(hào)：160161101；有效期：2018.05.19。

1.1.3 檢測(cè)試劑

IBD病毒抗體檢測(cè)試劑盒；供應(yīng)商：北京愛得士元亨生物科技有限公司；批號(hào)：WM083。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)山雞飼養(yǎng)

本試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)山雞的整個(gè)飼養(yǎng)期進(jìn)行IBD抗體的全程跟蹤監(jiān)測(cè)。該批試驗(yàn)山雞的全飼養(yǎng)期為56周，分為育雛期、保育期、育雛期和種用期4個(gè)階段。其中：0～35日齡為育雛期，采用4層疊層式立體育雛籠飼養(yǎng)，育雛舍采用智能內(nèi)環(huán)境自動(dòng)控制系統(tǒng)；36～55日齡為保育期，采用內(nèi)環(huán)境水供暖自動(dòng)加熱系統(tǒng)和雙層階梯式保育籠飼養(yǎng)。

育成期分為育成前期和育成后期2個(gè)階段，其中： 56～120日齡為育成前期，采用暗光照地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng)；121日齡～開產(chǎn)(190～195日齡)為育成后期，又稱為產(chǎn)蛋準(zhǔn)備期；采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。試驗(yàn)山雞從開產(chǎn)～56周齡淘汰為種用期，采用3層疊層單雞單籠式種山雞籠飼養(yǎng)。

1.2.2 試驗(yàn)山雞免疫

對(duì)試驗(yàn)山雞全周期實(shí)施以下IBD疫苗的免疫，詳見表1。

表1 試驗(yàn)山雞IBD免疫程序表

1.2.3 采樣與樣品處理

(1)親本母山雞采樣:在留取種蛋(43周齡)時(shí)隨機(jī)采取20羽試驗(yàn)山雞親本母山雞的血液樣品。

(2)育雛期采樣:隨機(jī)抽取20羽0日齡雛山雞血液樣品；以后每隔10天隨機(jī)抽取20羽雛山雞采取血樣，共采集0日齡、10日齡、20日齡、30日齡等四個(gè)批次、80份血樣；由于雛山雞體型偏小，此期采血可取心臟采血法或直接頸動(dòng)脈放血采樣。

(3)育成期及后續(xù)樣品采集:育成期60日齡時(shí)隨機(jī)采取20份血樣，以后每隔30 d在試驗(yàn)山雞群中隨機(jī)采取20份血樣，共采集60日齡、90日齡、120日齡、150日齡、180日齡、210日齡、240日齡、270日齡、300日齡和330日齡等10個(gè)批次、200份血樣。

(4)樣品處理與保存:整個(gè)試驗(yàn)共采集試驗(yàn)山雞14個(gè)批次、280份血液樣品和43周齡親本母山雞1個(gè)批次、20份血液樣品，總數(shù)為15個(gè)批次、300份血液樣品；每個(gè)批次樣品在采集后立即分離血清，標(biāo)記后冷凍保存；至全部15個(gè)批次血樣全部采集完成后集中檢測(cè)。

1.2.4 樣品檢測(cè)

(1)檢測(cè)方法：采用ELISA方法對(duì)300份試驗(yàn)樣品同時(shí)進(jìn)行抗體檢測(cè)。

(2)判定標(biāo)準(zhǔn)：陰、陽對(duì)照成立確定試驗(yàn)有效，樣品OD值>臨界值判為陽性，否則判為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

2.1.1 親本母山雞一個(gè)批次血樣IBD抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

20份43周親本母山雞血樣的IBD抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果，IBD抗體95%合格，平均OD值0.17(臨界值0.0819、標(biāo)陽OD均值0.232)。親本母山雞樣品IBD抗體檢測(cè)OD值分布情況見表2。

表2 樣品檢測(cè)結(jié)果匯總表

2.1.2 試驗(yàn)山雞IBD抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

(1)試驗(yàn)山雞各批次血樣ELISA檢測(cè)IBD免疫抗體的OD均值見表3，其全階段免疫抗體變動(dòng)情況見圖1。

表3 試驗(yàn)山雞IBD抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果匯總表

圖1 試驗(yàn)山雞IBD免疫抗體變動(dòng)曲線圖

(2)試驗(yàn)山雞IBD抗體檢測(cè)陽性合格結(jié)果:14個(gè)批次的試驗(yàn)山雞血樣ELISA檢測(cè)IBD免疫抗體陽性合格率見表4，不同階段陽性合格率變化情況見圖2。

表4 試驗(yàn)山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率結(jié)果匯總表

圖2 試驗(yàn)山雞各批次樣品IBD抗體陽性合格率變化曲線圖

2.2 分析

2.2.1 親本母山雞IBD母源抗體情況

從表2可以看到，親本母山雞IBD免疫抗體總體良好，基本呈正態(tài)分布，唯一1份不合格樣品的OD值也與臨界值較接近，大部分樣品OD值界于臨界值與全部樣品均值之間，另有3份樣品的OD值超過了檢測(cè)試驗(yàn)標(biāo)陽OD值。

2.2.2 試驗(yàn)山雞IBD抗體情況

結(jié)合試驗(yàn)山雞的生長(zhǎng)階段，分析表3可以發(fā)現(xiàn)，在全部14個(gè)批次280份檢測(cè)結(jié)果中，120日齡以前的7個(gè)批次樣品的OD值小于臨界值。其中：0日齡20份樣品的OD值為0.06，陽性合格率僅為15%，提示IBD母源抗體的遺傳性較差，親本母山雞較高的母源抗體末能較好地傳給子代，后續(xù)6個(gè)批次樣品的OD均值也基本在這一水平波動(dòng)；期間雖經(jīng)IBD中等毒力弱毒疫苗于19日齡和26日齡二次飲水免疫，但I(xiàn)BD免疫抗體末獲提高，說明弱毒疫苗飲水免疫的效果較差；125日齡采用IBD滅活疫苗肌注免疫后，免疫抗體OD均值快速上升，150日齡批次樣品檢測(cè)結(jié)果達(dá)到0.136,180日齡批次繼續(xù)上升至0.185，但抗體上升期較短，在210日齡時(shí)已快速下降至0.122，240日齡時(shí)的OD均值已消退到0.095，接近OD臨界值，說明IBD滅活苗肌注免疫有較好的免疫作用，但抗體有效維持期僅約4個(gè)月。其后，3個(gè)批次樣品的OD均值又出現(xiàn)了一輪強(qiáng)勁反彈，但期間末進(jìn)行任何相關(guān)的免疫措施，提示試驗(yàn)雞群在此階段可能感染了IBD病毒。

2.2.3 試驗(yàn)山雞IBD抗體陽性合格情況

分析表4和圖2，可見試驗(yàn)雞群IBD免疫抗體陽性合格率有2個(gè)明顯的變化區(qū)間，一個(gè)是在120日齡以前的低水平區(qū)間，另一個(gè)是在150日齡后的高水平區(qū)間，而125日齡的免疫是二個(gè)區(qū)間的拐點(diǎn)。

在低水平區(qū)間7個(gè)批次樣品中，陽性合格率最高的僅為25%，最低為0。雖然二次飲水免疫也未見效，抗體檢測(cè)OD均值無明顯提高；在高水平區(qū)間，又可分為2個(gè)高峰階段，第一個(gè)高峰段是125日齡免疫后，抗體快速上升并維持3個(gè)月后的消退階段，此階段抗體陽性合格率最高值達(dá)到了80%；第二個(gè)高峰段是本次試驗(yàn)的最后3個(gè)批次樣品，在滅活疫苗抗體逐步消退至臨界值后，可能是受到IBD野毒感染，試驗(yàn)雞群的抗體陽性合格率出現(xiàn)了一波強(qiáng)勢(shì)反彈，高峰值達(dá)到了90%，這一變動(dòng)現(xiàn)象與IBD抗體OD均值的變動(dòng)情況相符。

3 討論

(1)試驗(yàn)結(jié)果顯示，親本母山雞擁有較高的IBD母源抗體，但試驗(yàn)山雞未能通過種蛋垂直獲得這些較高的IBD母源抗體，而且在2次使用D78中毒活疫苗進(jìn)行飲水免疫后，未能有效提升試驗(yàn)山雞早期免疫抗體；但青年種山雞在上籠后使用滅活苗進(jìn)行肌注免疫后，可使IBD免疫抗體快速提升至較高水平，且可有效維持3個(gè)月以上，說明2次中等毒力活疫苗的飲水免疫，雖然未能有效提高早期免疫抗體水平，但仍起到了較好的基礎(chǔ)免疫作用，為滅活疫苗的免疫起到一定的協(xié)同作用。

(2)相關(guān)資料顯示，免疫接種IBD疫苗是預(yù)防本病的一種有效措施。目前在我國(guó)批準(zhǔn)使用的疫苗主要有弱毒苗、滅活苗和進(jìn)口的中等毒力活疫苗(D78)。臨床上低毒力株弱毒疫苗主要用于無母源抗體或低母源抗體的雞群，一般在出殼后用滴鼻、點(diǎn)眼+肌注的方式超前免疫1次，2～3周時(shí)用中毒活疫苗加強(qiáng)1次；中毒活疫苗主要是供有母源抗體的雞群使用；滅活疫苗主要是供種雞群使用。

(3)結(jié)合本次試驗(yàn)結(jié)果，建議山雞IBD的免疫程序見表5。

表5 種山雞IBD免疫程序

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