王小永 趙麗娜

【摘 要】目的：為了解當(dāng)前中藥制劑中的非法添加化學(xué)降壓藥物的現(xiàn)象，通過(guò)HPLC進(jìn)行定性檢測(cè)中藥制劑可能存在有非法添加的10種化學(xué)降壓藥物。方法：應(yīng)用Agilent Extend-C18柱（250 mm*4.6 mm，5 μm），0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動(dòng)相B，梯度洗脫，230 nm檢測(cè)波長(zhǎng)，30℃柱溫，1.0 mL·min?1流速。結(jié)果：10種化學(xué)降壓藥物均具分離度、線(xiàn)性與檢測(cè)的靈敏度。檢測(cè)限0.01～13 ng，5針連續(xù)進(jìn)樣的色譜圖中，各組分保留的時(shí)間RSD <0.1%。結(jié)論：HPLC檢測(cè)中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物簡(jiǎn)便且靈敏，同時(shí)重復(fù)性佳，可作為對(duì)降壓類(lèi)藥物鑒別的有效方法進(jìn)行推廣。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；中藥制劑；化學(xué)降壓藥物；非法添加

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2018）05--02

近年以來(lái)，純中藥的制劑及各類(lèi)的保健品中，非法進(jìn)行化學(xué)藥物添加的案例越多越多[1]。降壓類(lèi)的中藥制劑當(dāng)中，添加了西藥成分的現(xiàn)象在這些案件中相對(duì)突出，這種不法行為為人們健康帶來(lái)極其嚴(yán)重的威脅[2]。本研究通過(guò)對(duì)中藥的制劑中是否存在非法添加了化學(xué)降壓藥進(jìn)行初步的篩查，選擇10種降壓藥物，應(yīng)用梯度洗脫法對(duì)化學(xué)降壓藥進(jìn)行分離的操作，結(jié)果顯示了該方法靈敏、簡(jiǎn)便且重復(fù)性好，具體操作如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1200），配液相四元泵、紫外光可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、控溫自動(dòng)進(jìn)樣器；高速離心機(jī)（TGL 16G）；電子天平（Mettler AE200）；超聲波發(fā)生器（SB5200）。

1.2 降壓藥的對(duì)照品

氫氯噻嗪片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44023235，用量規(guī)格：25 mg，三才石岐制藥股份有限公司）、吲達(dá)怕胺片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44020885，用量規(guī)格：2.5 mg，廣東安諾藥業(yè)股份有限公司）、氯沙坦鉀片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20070264，用量規(guī)格：50 mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、厄貝沙坦片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20030016，用量規(guī)格：150 mg，浙江華海藥業(yè)股份有限公司）、硝苯地平片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H44023986，用量規(guī)格：10 mg，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司）、酒石酸美托洛爾片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H32025390，用量規(guī)格：25 mg，阿斯利康制藥有限公司）、鹽酸特拉唑嗪片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20023659，用量規(guī)格：2 mg，上海雅培制藥有限公司）、替米沙坦片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H20061185，用量規(guī)格：40 mg，蘇州東瑞制藥有限公司）、鹽酸地爾硫片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H10880015，用量規(guī)格：30 mg，上海信誼萬(wàn)象藥業(yè)股份有限公司）、尼群地平片：（國(guó)藥準(zhǔn)字H13022629，用量規(guī)格：10 mg，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司）、

均為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)，含量按標(biāo)示的含量100%進(jìn)行折算。

1.3 試劑 分析純?cè)噭ù姿徜@）、純化水、色譜純?yōu)榧状寂c乙腈（Tedia，美國(guó)）。

1.4 樣品 采用珍菊降壓片（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20053333，規(guī)格：0.25 g，含鹽酸可樂(lè)定0.03 mg、氫氯噻嗪5 mg蘆丁20 mg，雷允上藥業(yè)有限公司）為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。

2 方法

2.1 高效液相色譜條件設(shè)置 應(yīng)用C18色譜柱（250 mm*4.6 mm，5 μm），0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動(dòng)相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動(dòng)相B，梯度洗脫，230 nm檢測(cè)波長(zhǎng)，30℃柱溫，1.0 mL·min?1流速，進(jìn)樣量控制2 μL。

2.2 制備對(duì)照液 將10種獲得的對(duì)照藥研磨成粉，依次精密的稱(chēng)取相當(dāng)各對(duì)照的化合物10mg量，置于同一帶塞的錐形瓶，精準(zhǔn)加入20 mL甲醇，進(jìn)行10min超聲后靜置，并進(jìn)行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得對(duì)照液以備用。

2.3 制備樣品液 將珍菊降壓片研磨成細(xì)粉狀，進(jìn)行精準(zhǔn)稱(chēng)定后置帶塞的錐形瓶當(dāng)中，加入20 mL甲醇，進(jìn)行10min超聲后靜置，并進(jìn)行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得制備樣品液。

3 結(jié)果

3.1 降壓藥峰面積線(xiàn)性結(jié)果

制備得對(duì)照液注入高效液相色譜儀當(dāng)中進(jìn)行分析[3]。依據(jù)高效液相色譜條件設(shè)置，10種降壓藥化合物均得到很好的分離。對(duì)照液進(jìn)行適量10倍稀釋?zhuān)锤咝б合嗌V條件下依次進(jìn)樣分析（2～10μL每2μL梯度進(jìn)樣）。將10種降壓藥的進(jìn)樣量峰面積線(xiàn)性回歸顯示，R=0.9994～0.9999，藥物該流動(dòng)相系統(tǒng)穩(wěn)定，線(xiàn)性均呈現(xiàn)良好。

3.2 檢測(cè)限

精密量取適量對(duì)照液，加甲醇逐級(jí)稀釋至不同濃度，按高效液相色譜條件設(shè)置進(jìn)行測(cè)定，顯示在高效的液相色譜圖當(dāng)中，各物質(zhì)的色譜峰信噪比（S/N）=10，研究的10種降壓藥物檢測(cè)限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測(cè)的靈敏性高。

討論

應(yīng)用梯度洗脫程序，以甲醇、乙腈及緩沖鹽作為流動(dòng)相。此系統(tǒng)可對(duì)10種降壓藥進(jìn)行同時(shí)的分離。并采用不同色譜柱，各藥物分離結(jié)果各不同。在應(yīng)用Agilent TC-C18柱分析HPLC的圖譜中觀(guān)察到了9個(gè)特征峰，其中，替米沙坦特征峰在圖譜中消失，因此Agilent TC-C18靈敏度低。而應(yīng)用Agilent Extend-C18柱進(jìn)行分析時(shí)，則10種藥的分離均良好，可選擇Agilent Extend-C18柱進(jìn)行處理分析。另外，研究的10種降壓藥物檢測(cè)限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測(cè)的靈敏性高。

總而言之，HPLC檢測(cè)中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物簡(jiǎn)便且靈敏，同時(shí)重復(fù)性佳，可作為對(duì)降壓類(lèi)藥物鑒別的有效方法進(jìn)行推廣。

參考文獻(xiàn)

鞏麗萍，田晨穎，郭常川，等.超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜快速篩查及定量分析中成藥或保健品中非法添加的24種消炎止痛類(lèi)化學(xué)成分[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2015，50（24）：2154-2159.

林偉杰，梁祈，詹若挺.止咳平喘類(lèi)中成藥中9種非法添加化學(xué)成分的定性定量檢驗(yàn)方法研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，34（3）：418-423.

沈于蘭，申蘭慧，蘇嘉焱.HPLC法同時(shí)測(cè)定止咳平喘類(lèi)中成藥中非法添加的9種化學(xué)成分[J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2016，17（1）：37-40.