保存年限對艾比湖鹵蟲孵化及壽命的影響

高夢嬋 孟克巴雅爾 劉偉 張穎 劉青

摘 要：新疆艾比湖鹵蟲是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的重要餌料。對2013—2016年不同保存年限的艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化特性及平均壽命進(jìn)行測定，結(jié)果表明，2015年的孵化率最高為（49.7±6.5）%，2013年的孵化產(chǎn)量最高為（228.3±27.3）mg/g；2014—2016年3年的孵化速度同步性都在5～6h，2013年最差為7h；不同保存年限對艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化率、孵化產(chǎn)量及孵化速度影響差異顯著（P<0.05），其中2014年及2016年受含水量和孵化時(shí)間影響較大，造成了2年的顯著性差異，但仍可看出適當(dāng)?shù)谋４鏁r(shí)間可以提高艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化速度。4年間的艾比湖鹵蟲平均壽命在（85.6～90.9）d，差異不顯著（P>0.05），2013年的平均壽命最高為90.9d，說明適當(dāng)時(shí)間的冷凍保存有助于提高艾比湖鹵蟲的平均壽命。

關(guān)鍵詞：艾比湖鹵蟲；保存年限；孵化特性；平均壽命

中圖分類號(hào) S963.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2018）10-0101-04

Effects of Storage Years on Hatching and Lifespan of Artemia in Aibi Lake

Gao Mengchan1et al.

（1Liaoning Provincial Key Laboratory for Hydrobiolcgy，Dlian Ocean University，Dalian 116023，China）

Abstract：Artemia in Aibi lake in Xinjiang is an important feed for aquaculture.In this experiment，we measered hatching characteristics and average life of Artemia resting eggs in Aibi lake of different ages from 2013—2016.The experimental results showed that the highest hatching rate in 2015 was （49.7±6.5）%.The highest hatch production in 2013 was（228.3±27.3）mg/g.The synchronicity of the hatching speed for the three-year period from 2014—2016 was all 5～6h，and the worst in 2013 was 7h.The effects of different storage years on hatching rate，hatching yield and hatching speed of resting eggs of Artemia in Aibi lake were significantly different（P<0.05）.The significant difference between the two years was caused by the large impact of water content and incubation time in 20l4 and 2016.However，it can still be seen that proper storage time can increase the hatching rate of resting eggs of Artemia in Aibi lake.The average lifespan of Artemia in Aibi lake in the four years ranged from（85.6～90.9）d，with no significant difference（P<0.05）.The average lifespan in 2013 was the highest at 90.9d.Explain that cryopreservation at an appropriate time can help increase the average lifespan of Artemia in Aibi lake.

Key words：Artemia in Aibi lake；Storage years；Hatching characteristics；Average lifespan

鹵蟲（Artemia）又名鹽水豐年蟲，隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、鰓足亞綱、無甲目、鹽水豐年蟲科、鹵蟲屬[1]。分布極廣，遍布熱帶、亞熱帶、溫帶的大約500多個(gè)自然鹽湖和人工鹽池中[2]。其休眠卵好保存、易流通，隨用隨孵，而且幼蟲營養(yǎng)豐富[3]。

自1933年Sea1e將鹵蟲無節(jié)幼體用于魚苗的開口餌料以來[4]，鹵蟲的應(yīng)用就開始陸續(xù)的擴(kuò)大了起來。鹵蟲卵已成功地應(yīng)用于幾十種海水魚（如鲆鰈類）、蝦和河蟹育苗中，其年需求量也從剛開始的幾噸到目前的幾千噸[5-6]。且鹵蟲成蟲也是一種重要的水產(chǎn)餌料，其蛋白質(zhì)含量高達(dá)60%，富含必需氨基酸、類胡蘿卜素、魚蝦味覺誘引劑等[7]。自20世紀(jì)70年代以來，人們主要是通過從自然界中尋找更多的自然鹵蟲資源，來滿足水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對鹵蟲休眠卵越來越大的需求。但是自然界中鹵蟲休眠卵的產(chǎn)量受環(huán)境條件的影響非常大，最終自然產(chǎn)量也很不穩(wěn)定[8]。例，如鹵蟲卵的主產(chǎn)地之一的美國大鹽湖曾經(jīng)在1994年、1998年受到氣候條件的影響，鹵蟲休眠卵的產(chǎn)量急劇的下降，造成了世界鹵蟲市場的鹵蟲休眠卵價(jià)格一直很高，對全球的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重沖擊[9]。為了解決只依靠自然資源的困境，自20世紀(jì)80年代以來，各國的鹵蟲研究人員一直沒有停止過對鹵蟲人工增養(yǎng)殖方面的研究和探索[10]，經(jīng)過多年的實(shí)踐，根據(jù)不同的地理、氣候等條件形成了一些獨(dú)特的模式。

新疆艾比湖湖區(qū)平均氣溫7.7℃，最高氣溫43℃，最低氣溫-33℃。艾比湖日照時(shí)數(shù)在2800h左右，遠(yuǎn)大于內(nèi)地的1900h，年降水量低于100mm。鹽度14‰～21‰，艾比湖面積大，因?yàn)榈靥庯L(fēng)口及湖區(qū)深淺不一，湖泊鹽度分布并不均勻，也會(huì)隨季節(jié)、河流入水量的變化而變化[11]。據(jù)調(diào)查，艾比湖的鹵蟲資源量在全國100多個(gè)鹽湖中名列榜首，蟲體的年存量在4000t左右，純凈干燥卵的年存量在200～400t。2007年我國鹵蟲干燥卵市場需求量約為2000t，而實(shí)際產(chǎn)量約為1000t，其中艾比湖鹵蟲卵產(chǎn)量400t，接近全國鹵蟲產(chǎn)量的50%。不難發(fā)現(xiàn)，鹵蟲卵的市場在我國仍處于供不應(yīng)求的狀態(tài)，其中艾比湖鹵蟲支撐了全國鹵蟲產(chǎn)業(yè)的“半邊天”。足以見得，艾比湖鹵蟲在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的重要性。

目前對于鹵蟲卵質(zhì)量鑒別與孵化技術(shù)[12-13]，其中包括孵化率、含水率、雜質(zhì)率等一系列相關(guān)指標(biāo)的測定、孵化用水的酸堿度、鹽度、溫度、充氣程度、光照度、孵化時(shí)間等影響因子的控制[14-15]，以及對鹵蟲的發(fā)育與蛻皮階段的了解和研究已經(jīng)相當(dāng)成熟[16-18]，那么最基礎(chǔ)的鹵蟲卵的保存顯得尤為重要。一些研究表明，對干卵一般低溫貯存即可。經(jīng)過清洗、脫水、晾干等步驟處理的鹵蟲卵，貯存數(shù)年，孵化率仍可保持很高的水平[19]。但現(xiàn)在市場上仍出現(xiàn)不同質(zhì)量不同、年限導(dǎo)致鹵蟲卵的品質(zhì)參差不齊問題，因此對于鹵蟲卵更優(yōu)儲(chǔ)存條件的探究，以及符合條件長期保存下的不同年限的鹵蟲卵，其中孵化質(zhì)量跟壽命的具體差異[20-24]的探究也受到關(guān)注。為進(jìn)一步保護(hù)和利用鹵蟲休眠卵資源，本實(shí)驗(yàn)探究艾比湖鹵蟲卵保存的年限長短對其孵化質(zhì)量及壽命的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 大連海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)室所冷凍保存的2013—2016年艾比湖加工生產(chǎn)的鹵蟲休眠卵；高溫滅菌冷卻到室溫的黑石礁自然海水，并調(diào)節(jié)鹽度為20‰；魯哥氏碘液；福爾馬林固定液；500mL燒杯；50mL燒杯；光照培養(yǎng)箱：恒溫水槽等孵化所需的試劑和器材。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 2013—2016年4個(gè)年限的艾比湖鹵蟲卵，每個(gè)年限做3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，控制溫度為28℃、鹽度為20‰的條件下進(jìn)行孵化。分別測定艾比湖鹵蟲的3個(gè)孵化指標(biāo)：

1.2.1 孵化率 使用燒杯法，在解剖鏡下隨機(jī)挑選浸濕的100枚鹵蟲卵，放入盛有海水的100mL燒杯中，28℃恒溫下孵化24h。取出后用福爾馬林溶液固定，靜置30min后記無節(jié)幼體數(shù)。

1.2.2 孵化產(chǎn)量 用天平稱量1g鹵蟲卵放入盛有海水的2000mL燒杯中并充氣，28℃恒溫條件下孵化48h，將孵化后的卵殼和未孵化的卵挑出只剩下無節(jié)幼體，將無節(jié)幼體用福爾馬林溶液固定，靜置30min后用200目篩絹網(wǎng)在漏斗中過濾，用水邊沖洗邊吸取。將過濾好的無節(jié)幼體在105℃烘干箱下進(jìn)行烘干稱重，直到干燥后連續(xù)2次稱重差值小于0.002g。

1.2.3 孵化速度 用天平稱取250mg的鹵蟲休眠卵放入盛有海水的100mL量杯中，連續(xù)光照，水溫控制在28℃，使鹵蟲卵懸浮在海水中，從底部連續(xù)充氣孵化。由于海水蒸發(fā)，12h后加水至100mL，并用移液槍取4個(gè)樣，每個(gè)樣品為0.25mL，加魯哥氏碘液將無節(jié)幼體殺死固定，然后計(jì)數(shù)無節(jié)幼體只數(shù)，繼續(xù)每隔1h取樣一次，按照上面重復(fù)計(jì)數(shù)，直到連續(xù)3次取樣均能得到穩(wěn)定相近的無節(jié)幼體只數(shù)結(jié)束。在取樣過程中每隔3h補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分。由每次取樣計(jì)數(shù)的無節(jié)幼體只數(shù)可計(jì)算出此時(shí)此刻的孵化效率。以最高孵化效率的值作為100%，計(jì)算出每次取樣與最高孵化效率的百分比值，作出百分比值隨時(shí)間的變化圖，從圖中找出10%的蟲卵孵化所需時(shí)間T10，50%蟲卵孵化所需的時(shí)間T50，90%蟲卵孵化所需時(shí)間T90，計(jì)算孵化同步性（TS=T90-T10）。

2013—2016年4個(gè)年限的艾比湖鹵蟲無節(jié)幼體，每個(gè)年限做50組平行實(shí)驗(yàn)，每只無節(jié)幼體放入50mL燒杯中，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，控制溫度為28℃、鹽度為20‰、光照維持在2000lx、光周期121：12D。每天分3次向水中投喂1%的鹽藻粉與復(fù)合蝦苗粉混合水溶液，投喂的時(shí)間為上午7：30，中午1：30，下午7：30。每天測定水溫、吸污，調(diào)節(jié)鹽度，2d換1次水，每次換水量為總水量的1/4。記錄每只鹵蟲的死亡時(shí)間。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示方法為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±S.D.），本文中試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析都是采用生物統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS19.0版本進(jìn)行單因素（ANOVA）方差分析，用Duncan's方法對組間差異進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同保存年限對艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化率影響 孵化率是衡量鹵蟲卵孵化性能最常用的指標(biāo)。由表1可知，2013、2014、2015、2016年的平均孵化率分別是（49±2）%、（12.7±2.1）%、（49.7±6.5）%、（2.3±1.2）%，2015年最高，2016年最低。不同保存年限的多重比較表明，2013年和2015年的孵化率差異不顯著（P>0.05），2014年的孵化率與各年限都表現(xiàn)顯著差異（P<0.05），2016年的孵化率與各年限差異顯著（P<0.05）。

2013年和2015年孵化率相較于2014年和2016年高，接近50%的孵化率，2016年最低平均值只有2.3%左右，但這個(gè)孵化率是以24h孵化時(shí)長結(jié)束，對于24h以后孵化率如何并未作出解釋。鯨魚湖鹵蟲卵的孵化率在65%～90%，20℃時(shí)其孵化率達(dá)到90%。尕海鹵蟲卵的孵化率波動(dòng)在10%～75%。本實(shí)驗(yàn)中2016年艾比湖鹵蟲卵的孵化率過低，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對2013—2016年的艾比湖鹵蟲卵的含水率進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，2016年>2014年>2013年>2015年，說明含水率高可能是艾比湖鹵蟲休眠卵孵化率嚴(yán)重下降的主要因素。

一般孵化率越高，孵化出的無節(jié)幼體數(shù)也越多，但孵化率指標(biāo)不能反映產(chǎn)品中水分及雜質(zhì)含量的多少。單純以孵化率指標(biāo)并不能客觀反映鹵蟲卵產(chǎn)品的質(zhì)量。本次實(shí)驗(yàn)選擇20‰鹽度測孵化率，是考慮到鹵蟲卵孵化時(shí)必須吸水，相對高鹽度而言，低鹽度的影響較小，低鹽度能使其很好的吸水，只是吸水后水中離子含量不能進(jìn)一步滿足鹵蟲孵化[25]。

2.2 不同保存年限對艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化產(chǎn)量的影響 孵化產(chǎn)量為每1g卵能夠孵化出的無節(jié)幼體的總干重，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，2013—2016年的平均孵化產(chǎn)量為（228.3±27.3）mg/g、（197.7±5.5）mg/g、（245.9±9.6）mg/g、17.6±1.9mg/g，2013年最高，2016年最低。不同保存年限的多重比較表明，2013年和2014年的孵化產(chǎn)量差異不顯著（P>0.05），2013年和2015年的孵化產(chǎn)量差異不顯著（P>0.05），2016年的孵化產(chǎn)量與各年限都差異顯著（P<0.05）。

本實(shí)驗(yàn)排除了無節(jié)幼體大小對其的影響。孵化產(chǎn)量可以直接反映休眠卵水分、雜質(zhì)含量，表現(xiàn)出鹵蟲卵的孵化質(zhì)量。2013、2015年的孵化產(chǎn)量位居第一位、第二位，同孵化率結(jié)果一致，2014年的孵化產(chǎn)量與這兩年相差不大，接近于200mg/L。但2015、2013年的孵化率卻分別是2014年的4倍，這說明2014年的艾比湖鹵蟲卵有很大一部分是在24～48h間孵化出來的。

在整個(gè)孵化過程中，所得實(shí)驗(yàn)材料不同保存年限的艾比湖鹵蟲卵品質(zhì)不盡相同，如2013、2015年的艾比湖鹵蟲卵很干爽，觸摸感像細(xì)沙一般，而2014、2016年含水量相對較多，尤其是2016年的艾比湖鹵蟲卵都已經(jīng)連成塊狀，卵的品質(zhì)明顯下滑，這也是2016年艾比湖鹵蟲卵的孵化率、孵化產(chǎn)量指標(biāo)明顯低于其他3年的原因?？赡苁鞘墚?dāng)年采收加工艾比湖鹵蟲休眠卵工藝、采收季節(jié)等影響。

2.3 不同保存年限對艾比湖鹵蟲休眠卵的孵化速度的影響 在其他指標(biāo)相同條件下，孵化速度越快，孵化同步性越好，得到的無節(jié)幼體的能值也越高，卵的應(yīng)用價(jià)值也越好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4、表5。由表4、表5可知，2014、2015、2016年都艾比湖鹵蟲卵的孵化同步性都在5～6h，而相對久的2013年孵化同步性為7h左右。2013年和2015年所保存的艾比湖鹵蟲卵，無論是孵化率、孵化效率和孵化產(chǎn)量，相較于2014年和2016年都高出很多。但2013年的孵化速率同步性比其他3個(gè)年份都慢，因此保存年限過久會(huì)降低鹵蟲休眠卵的孵化同步性，孵化蘇醒時(shí)間越長。2014—2016年3年見得孵化速率同步性接近，卻仍舊呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，相對久遠(yuǎn)的2014年時(shí)間反而最短，可以推斷合適的冷凍時(shí)間可提高休眠卵孵化速率。有研究表明，適當(dāng)?shù)睦鋬鰰r(shí)間對輪蟲休眠卵的萌發(fā)有促進(jìn)作用[26]，同本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

2.4 不同保存年限對艾比湖鹵蟲的壽命的影響 對2013—2016年每個(gè)年限的50只艾比湖鹵蟲壽命的記錄，共計(jì)200只個(gè)體，得到每年艾比湖鹵蟲的平均壽命如圖1所示。由圖1可知，2013—2016年間艾比湖鹵蟲的平均壽命分別為90.9d、90.8d、85.6d、86.2d，其中2013、2014年較高接近91d，2015、2016年略低接近86d。經(jīng)差異性分析，4年彼此間差異均不顯著（P>0.05）。

有研究表明，查干淖爾鹵蟲的平均壽命為96d[27]，王六壕湖鹵蟲的平均壽命為87d[28]，本實(shí)驗(yàn)中的艾比湖鹵蟲卵的平均壽命為89d，與前兩者接近。從本實(shí)驗(yàn)可以看出，冷凍時(shí)間略長的艾比湖鹵蟲壽命會(huì)略高于冷凍時(shí)間略短的，但并不會(huì)高出很多。說明適當(dāng)?shù)睦鋬鰰r(shí)間可能會(huì)增長艾比湖鹵蟲的平均壽命。

3 結(jié)論

由本次實(shí)驗(yàn)可知，艾比湖鹵蟲卵長達(dá)4年的冷凍儲(chǔ)存對其孵化率及孵化產(chǎn)量無明顯影響，但適當(dāng)?shù)谋４鏁r(shí)間可以提高艾比湖鹵蟲卵的孵化速度（不超過3年）。同時(shí)，保存了3～4年的艾比湖鹵蟲平均壽命高于近2年，說明適當(dāng)時(shí)間的冷凍保存有助于提高艾比湖鹵蟲的平均壽命及養(yǎng)殖效益。

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