許　騰，陸建偉，亢守亭，郭穎媛，初漢平

(1.菏澤學(xué)院 藥學(xué)院,山東 菏澤 274015; 2.菏澤市牡丹區(qū)畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)局，山東 菏澤 274000)

近年來，隨著牡丹產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展，牡丹籽已開發(fā)成為一種新型油料作物。研究發(fā)現(xiàn)，油用牡丹籽營養(yǎng)全面，含有17種脂肪酸，其中飽和脂肪酸占14.33%，不飽和脂肪酸占83.05%，亞麻酸、亞油酸、油酸等含量豐富[1]。我國牡丹種植面積逐年擴大，山東省菏澤市被稱為“牡丹之都”，是目前世界面積最大、種植品種最多的牡丹產(chǎn)業(yè)基地，僅油用牡丹種植面積已達3.07萬hm2[2]，現(xiàn)有油用牡丹全部達產(chǎn)后，年產(chǎn)牡丹籽10萬t，企業(yè)加工提取牡丹籽油后，可生產(chǎn)牡丹籽餅粕6萬t。牡丹籽餅粕中蛋白質(zhì)含量高達26%以上，不飽和脂肪酸，亞麻酸、維生素E等含量豐富，可以加工利用作為食品或藥品，也可以作為非常規(guī)飼料替代部分蛋白飼料飼喂畜禽。近幾年，科技工作者對棉籽餅、菜籽餅、葵花籽餅等作為蛋白質(zhì)飼料飼喂動物研究較多[3-10]，而對牡丹籽餅飼喂畜禽的應(yīng)用研究極少，目前能查到的文獻僅有對牡丹籽餅的化學(xué)成分的分析[11]，尚未見報道牡丹籽餅在畜禽上的應(yīng)用，鑒于此，本研究采用牡丹籽餅替代日糧中不同比例的豆粕,研究其對生長肥育豬血液生化指標、抗氧化指標和免疫指標的影響，為進一步研究牡丹籽餅作為生長肥育豬的飼料提供科學(xué)依據(jù)，促進養(yǎng)豬生產(chǎn)的發(fā)展。

1　材料和方法

1.1　材料

1.1.1試驗材料牡丹籽餅由菏澤瑞璞牡丹產(chǎn)業(yè)科技發(fā)展有限公司提供；采血工具:10 mL注射器若干、采血管、抗凝劑；測量工具:玻璃器具，水浴鍋，紫外可見光分光光度計；試劑：95%無水乙醇，95%冰醋酸，雙蒸水，總抗氧化能力(T-AOC)測定試劑盒、過氧化氫酶(CAT)測試試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)測試盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測試盒、丙二醛(MDA)測試盒(以上試劑盒均從南京建成生物研究所采購)，其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.2試驗動物試驗于菏澤市牡丹區(qū)永興豬場進行，供試動物為平均體質(zhì)量50 kg的三元雜交(杜×長×大)的生長肥育豬。

1.2　方法

1.2.1試驗設(shè)計采用單因子完全隨機試驗設(shè)計,將40頭體質(zhì)量50 kg左右的生長肥育豬隨機分成4組,Ⅰ組為對照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組為試驗組，在基礎(chǔ)日糧中添加2%、5%、8%的牡丹籽餅來代替部分豆粕，各組日糧營養(yǎng)水平一致。預(yù)試期10 d，正試期35 d。試驗開始與結(jié)束后從禁食12 h的每組中隨機選擇4頭生長肥育豬，對其進行前腔靜脈采血10 mL，分裝2個潔凈采血管中，分別作血清分離(3 000～4 000 r/min，離心10～15 min)和抗凝處理，置于-20 ℃的環(huán)境保存，血樣送于菏澤市牡丹醫(yī)院化驗室、菏澤學(xué)院藥學(xué)院生理實驗室，進行血液生化指標、免疫指標、抗氧化指標的檢測。

1.2.2試驗日糧設(shè)計與飼養(yǎng)管理利用當?shù)刂饕暳显希瑓⒄?NRC(2014)飼養(yǎng)標準設(shè)計飼料配方，其日糧組成和營養(yǎng)水平見表1。對各組豬只采用舍飼飼養(yǎng)，自然采光，自然通風(fēng)，人工喂料，每天定時喂料2次(上午、下午各1次)，自由飲水，飲水要清潔干凈；在預(yù)試期要逐漸更換試驗日糧，避免引起豬的應(yīng)激，及時做好試驗豬只的驅(qū)蟲與防疫工作，試驗豬豬舍每周消毒1次，防止疾病的發(fā)生。

1.2.3測定項目

1.2.3.1血液生化指標檢測指標包括：總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白球比(A/G)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)。

表1　日糧組成及營養(yǎng)水平

注：預(yù)混料為每千克日糧提供維生素A 6 500 IU、維生素D22 000 IU、維生素E 25 mg、維生素K32.0 mg、維生素B12.0 mg、維生素B24.0 mg、維生素B62.0 mg、維生素B120.04 mg、煙酸20.0 mg、泛酸15.0 mg、生物素0.1 mg、鐵100 mg、鋅100 mg、銅21.0 mg、錳75.0 mg、碘0.75 mg、硒0.3 mg、鈣5.1 g、磷0.6 g；消化能、粗蛋白、粗纖維、鈣、磷均為計算值。

1.2.3.2抗氧化指標檢測指標包括：血清中總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、過氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量。操作方法均按南京建成生物研究所提供的試劑盒說明書進行操作。

1.2.3.3免疫指標檢測指標包括：免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)。

1.2.4數(shù)據(jù)處理試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2007進行統(tǒng)計，SPSS 16.0進行單因素方差分析，Duncan氏法進行多重比較，結(jié)果以平均值±標準差表示。

2　結(jié)果與分析

2.1　牡丹籽餅對生長肥育豬生化指標的影響

牡丹籽餅對生長肥育豬血液生化指標的影響見表2，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3個試驗組與對照組Ⅰ相比，TP含量分別提高了0.88%(P>0.05)、1.03%(P>0.05)、7.66%(P<0.05)；ALB的含量分別提高了5.16%(P>0.05)、2.31%(P>0.05)、12.62%(P<0.05)；TG含量分別極顯著降低了42.86%、61.90%、73.33%；CHO、GLO、A/G值各組間變化不大 (P>0.05)，但CHO含量隨著牡丹籽餅添加量的提高，有逐漸降低的趨勢。試驗表明，添加不同比例牡丹籽餅日糧能夠提高TP、ALB的含量，降低血清CHO、TG的含量，Ⅲ、Ⅳ組效果較好，Ⅳ組尤為明顯。

2.2　牡丹籽餅對生長肥育豬抗氧化指標的影響

牡丹籽餅對生長肥育豬的抗氧化指標的影響變化見表3。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3個試驗組與對照組Ⅰ相比，T-AOC活性分別極顯著提高了29.92%、38.99%、60.17%,T-SOD活性分別極顯著提高了6.19%、11.70%、13.17%；GSH-PX活性分別極顯著提高了1.69%、3.76%、4.61%；MDA的含量分別極顯著降低了11.63%、24.17%、26.74%；T-SOD活性、GSH-PX活性、MDA含量，Ⅲ、Ⅳ組與Ⅱ組比較，差異極顯著(P<0.01)，但Ⅲ、Ⅳ組之間差異不顯著(P>0.05)。說明Ⅲ、Ⅳ組的牡丹籽餅日糧可以顯著提高生長肥育豬血清中的T-AOC、T-SOD、GSH-PX活性，降低血清中MDA的含量，具有顯著的抗氧化能力。

表2　牡丹籽餅對生長肥育豬生化指標的影響

注：同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，肩標不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01),下同。

表3　牡丹籽餅對生長肥育豬抗氧化指標的影響

2.3　牡丹籽餅對生長肥育豬免疫指標的影響

由4表可知，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3個試驗組與對照組Ⅰ相比，血清IgA含量分別顯著提高了45%、60%、45%；IgG含量分別極顯著降低了8.44%、7.73%、14.16%；IgM含量試驗Ⅱ組降低了12.37%(P<0.05)，Ⅲ、Ⅳ組提高了4.12%(P>0.05)、2.06%(P>0.05)。說明添加牡丹籽餅對各試驗組的生長肥育豬免疫指標產(chǎn)生了不同的影響，Ⅱ組提高了IgA含量，降低了IgM、IgG含量；Ⅲ、Ⅳ組提高了IgA、IgM含量，降低了IgG含量。

表4　牡丹籽餅對生長肥育豬免疫指標的影響

3　結(jié)論與討論

3.1　牡丹籽餅對生長肥育豬的蛋白質(zhì)、脂肪代謝的影響

在蛋白質(zhì)代謝方面，血清總蛋白含量的高低，反映機體蛋白質(zhì)合成代謝的強弱，r-球蛋白與動物的營養(yǎng)狀況和免疫程度有關(guān)，白蛋白則反映了機體蛋白質(zhì)營養(yǎng)狀況的重要指標[12]。本試驗TP、GLO、ALB、A/G值均在正常范圍內(nèi)，說明牡丹籽餅代替部分豆粕并不影響體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝，且隨著添加量的增加有逐漸升高的趨勢；研究發(fā)現(xiàn)血清中ALB的含量越高，A/G值越大就越有利于蛋白質(zhì)的沉積[13]，本試驗中，Ⅳ組ALB的含量明顯高于其他組，具有明顯的促進蛋白質(zhì)沉積的優(yōu)勢。

在脂肪代謝方面，血清總膽固醇的含量、甘油三酯含量是衡量動物體內(nèi)脂肪代謝的重要指標。本試驗發(fā)現(xiàn)，各試驗組CHO、TG的含量均在正常范圍內(nèi)，添加牡丹籽餅對生長肥育豬的脂肪代謝沒有不良影響，隨著牡丹籽餅添加量的提高，CHO、TG的含量逐漸減少，這是因為牡丹籽餅中含有5.59%的殘油率，其中不飽和脂肪酸含量達90.74%，α-亞麻酸39.47%，亞油酸27.16%，油酸24.11%，亞麻酸、亞油酸等必需脂肪酸攝入人體后可轉(zhuǎn)變?yōu)镋PA(Eicosapntemacnioc acid)和DHA(Docosahexaenoic acid)而發(fā)揮降血脂和血壓的作用[1,14]，亞油酸、油酸具有降低血液中膽固醇含量，減少膽固醇在血管壁的沉積，防止血栓形成、擴張血管等作用[15-16]，王蕓[17]針對高脂模型大鼠研究結(jié)果也顯示牡丹籽油具有明顯降血脂的作用。這也說明牡丹籽餅添加量越多，對動物具有明顯的降低CHO和TG的作用，本試驗中牡丹籽餅添加量較高的Ⅲ、Ⅳ組在降低CHO和TG方面，表現(xiàn)尤為突出。

3.2　牡丹籽餅對生長肥育豬的抗氧化性能的影響

抗氧化性能是機體健康指標之一，其強弱代表機體清除自由基能力的大小。T-AOC是機體清除活性氧、自由基能力的綜合指標，其高低反應(yīng)機體抗氧化酶的綜合活力的強弱；T-SOD是機體內(nèi)清除自由基的重要抗氧化酶之一，其高低可間接反映機體清除自由基能力的強弱[18]；MDA是動物體內(nèi)多元不飽和脂質(zhì)氧化的終產(chǎn)物之一，其濃度的高低可以反映體內(nèi)不飽和脂質(zhì)的過氧化程度，間接地反映出機體脂質(zhì)過氧化的程度[19]。本試驗發(fā)現(xiàn)，只要添加牡丹籽餅的各試驗組都有提高豬體抗氧化性能的能力，試驗Ⅲ、Ⅳ組可以明顯提高生長肥育豬體內(nèi)的T-AOC、T-SOD、GSH-PX活力，降低血清中MDA的含量。其原因可能是牡丹籽餅殘油中的大量不飽和脂肪酸，特別是α-亞麻酸具有降血脂、抗血栓、抗炎和抗氧化等藥理作用[20-21],牡丹籽油還含有大量的VE(含量高達32 mg/100 g)和角鯊烯等，它們也是重要的天然抗氧化劑，具有提高體內(nèi)SOD活性，提高機體免疫和抗氧化功能[22]；這也與劉叢彬等[23]在大鼠體內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn)牡丹籽油具有明顯的抗氧化作用的研究結(jié)果一致。

3.3　牡丹籽餅對生長肥育豬的免疫性能的影響

IgA是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等部位的黏膜固有層中的漿細胞所產(chǎn)生的，它對機體呼吸道、消化道等局部黏膜免疫起著相當重要的作用，本試驗中各試驗組都比對照組的IgA含量提高，說明添加牡丹籽餅的日糧對生長肥育豬的機體黏膜免疫的屏障作用表現(xiàn)較強。IgM 是動物機體初次體液免疫反應(yīng)最早產(chǎn)生的免疫球蛋白，在抗感染免疫的早期起著十分重要的作用，具有抗菌、抗病毒、中和毒素等免疫活性，本試驗Ⅲ、Ⅳ組含量較高，免疫活性較好，試驗Ⅱ組含量低于對照組，其原因不明，尚待研究。IgG 是動物自然感染和人工主動免疫后，機體所產(chǎn)生的主要抗體，具有抗菌，抗病毒，抗毒素等免疫學(xué)活性的作用[24]；本次試驗中，牡丹籽餅添加量越高其活性越低，究其原因是因為日糧添加牡丹籽餅后引起的，還是試驗期間試驗豬只感染細菌或病毒造成的，尚需要進一步研究與探討。

在試驗中還發(fā)現(xiàn)，牡丹籽餅中粗纖維含量達到29.41%，適口性較差，在生長肥育豬飼糧中添加量不能過高。彭儀生等[25]、楊玉芬等[26-27]研究認為，對于生長肥育豬日糧中粗纖維的含量以不超過6%比較適宜。本次試驗日糧添加牡丹籽餅含量達到8%時，CF(粗纖維)為4.65%，如果添加量達到12%時，CF為5.76%。所以在生產(chǎn)實踐中，建議生長肥育豬的日糧牡丹籽餅最大添加量不應(yīng)超過12%。

綜合本次試驗結(jié)果，認為添加5%以上的牡丹籽餅代替豆粕飼喂生長肥育豬，可以提高血清TP、ALB的含量，并能明顯地降低血清CHO、TG的含量，促進蛋白合成、降低血脂；同時可以顯著提高生長肥育豬血清中的T-AOC、T-SOD、GSH-PX活力，降低血清中MDA的含量，并使生長肥育豬血清中IgA、IgM的含量有所提高，具有顯著的抗氧化能力和一定的免疫提高能力。