田麗麗 白中建 李惠霞 李敏權(quán)

摘要：從豌豆病株和健株的毛根、根、莖、枝、豆莢主脈、果實(shí)中分別分離獲得的根腐病病原菌有尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌和鏈格孢菌。3種病原菌在豌豆病株和健株上均有分布，病株的病原菌分布明顯高于健株，且鐮刀菌為優(yōu)勢(shì)種群，占樣品總數(shù)的55.6%，是導(dǎo)致豌豆根腐病的主要病原。豌豆根腐病病原菌的分布集中于根莖部，在病株的莖分枝、豆莢主脈及果實(shí)等部位則主要分布著鏈格孢菌，表明鐮刀菌根腐病主要以土壤帶菌傳播為主。

關(guān)鍵詞：豌豆根腐病；鐮刀菌；分布

中圖分類號(hào)：S436.24 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-1463（2018）02-0030-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2018.02.008

Fungi and Oomycota Isolated from Diseased Root，Basal Plate，

and Scale of Lilium davidii var. willmottiae

BAI Bin 1*， 2， 3， HE Suqin 4， 5， YU Anfen1， 2， 3， JING Zhuoqiong 4， 5， LI Ruiqin 1， 2， 3， XU Rui 1， 2， 3，LIU Lilong 1， 2， 3

（1. Institute of Animal Husbandry，Pasture and Green Agriculture， Gansu Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou Gansu 730070，China；2. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology，Gansu Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou Gansu 730070，China；3. Laboratory of Quality & Safety Risk Assessment for Agro-products （Lanzhou），Ministry of Agriculture，Lanzhou Gansu 730070，China；4. Institute of Plant Protection，Gansu Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou Gansu 730070，China；5. Scientific Observing and Experimental Station of Crop Pests in Tianshui，Ministry of Agriculture，Tianshui Gansu 741200，China）

Abstract：In order to investigate the related fungi and Oomycota corresponding to brown rot of Lanzhou lily， disease samples were collected from main planting locations of Lanzhou lily in Gansu in the fall of 2013.Fungi and Oomycota were isolated from 522 tissue pieces of diseased roots， basal plates， and scales by normal fungus tissue isolation method. A total of 574 strains of fungi and Oomycota were isolated， with an isolation rate of fungi and Oomycota of 109.96%. As a result of morphological identification， 6 genera were obtained， of which isolation frequency of Ilyonectria，F(xiàn)usarium and Rhizoctonia amounted to 46.86%，32.23% and 17.07% respectively， as the dominant population in the total isolated fungi. The proportion of the 3 dominant bacteria groups is obviously different because of the separation site and the sampling plot.

Key words：Lanzhou lily；Brown rot disease；Isolation rate；Isolation frequency；Dominant population

豌豆根腐病是由鐮刀菌引起的一種土傳病害，是豌豆（Pisumsativum L.）生產(chǎn)上的一種毀滅性病害，世界各國豌豆產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生[1 - 2 ]。近年來，該病害在我國豌豆主產(chǎn)區(qū)甘肅中部干旱地區(qū)的定西中部以及蘭州市榆中縣等地發(fā)生日益嚴(yán)重，致使豌豆產(chǎn)量遭受到嚴(yán)重的損失。國內(nèi)對(duì)于豌豆根腐病的報(bào)道已有很多，比如李敏權(quán)[3 ]研究了甘肅省豌豆根腐病發(fā)生規(guī)律；李乾坤等[4 ]研究了甘肅中部干旱山區(qū)豌豆根腐病綜合防治；孫順娣等[5 ]、孫文姬等[6 ]、伍克俊等[7 ]報(bào)道，甘肅省中部干旱地區(qū)豌豆根腐病的病原為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schlecht.）和茄病鐮刀菌（Fusarium solani（Mart）Sacc.）。關(guān)于豌豆病原菌在其寄主體內(nèi)的分布情況，國內(nèi)未見報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料來源

豌豆植株來自甘肅省定西市安定區(qū)李家堡，分別采集了豌豆成熟期的健康植株和病害植株帶回室內(nèi)供分離。

1.2 培養(yǎng)基

采用PDA固體培養(yǎng)基分離培養(yǎng)病原菌，采用PSA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)鐮刀菌并進(jìn)行單孢分離。

1.3 病原菌的分離培養(yǎng)

用自來水將新鮮植物組織表面沖洗干凈，晾干后將植株的毛根、根、莖、莖分枝、豆莢主脈分別取下，切成2 cm左右的小段。果實(shí)不切，從豆莢中剝出。先用75%的酒精漂洗1 ～ 2 min，然后用無菌水沖洗3 ～ 4次，再用0.01%升汞浸泡 1 min，無菌水沖洗 3 ～ 4次，在超凈工作臺(tái)下將毛根、根、莖、莖分枝、豆莢主脈從橫截面切成小片，接種到PDA固體培養(yǎng)基上，置于28 ℃溫箱中培養(yǎng)4 d，觀察病原菌的生長情況。各植物組織切面長出菌絲后挑取邊緣部分移至新的固體培養(yǎng)基上，經(jīng)純化后得到豌豆根腐病病原菌。

1.4 病原菌的純培養(yǎng)

觀察培養(yǎng)皿中的菌落，對(duì)形態(tài)不同的菌落轉(zhuǎn)皿再進(jìn)行分離，對(duì)分離得到的菌進(jìn)行歸類整理，對(duì)初步鑒定為鐮刀菌的菌株再進(jìn)行單孢分離。單孢分離方法為：用撥針挑取少許菌絲放在無菌水中稀釋，用玻璃棒攪勻，隨機(jī)蘸取水滴在顯微鏡下觀察，至每個(gè)水滴中只有1個(gè)孢子時(shí)，用玻璃棒蘸取少許水接種于培養(yǎng)基上，在25 ℃的溫箱中培養(yǎng)。

1.5 病原菌的鑒定

對(duì)分離出的真菌進(jìn)行純培養(yǎng)和單孢分離后，經(jīng)過在顯微鏡下對(duì)菌落形態(tài)特征的觀察，確定病原菌的類型。其中鐮刀菌根據(jù)Booth.C[8 ]分類系統(tǒng)進(jìn)行鑒定，其他分離的真菌根據(jù)張中義[9 ]、陸家云[10 ]等提供的系統(tǒng)和標(biāo)準(zhǔn)鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 豌豆根腐病癥狀

據(jù)田間調(diào)查，豌豆根腐病病株主、側(cè)根及根莖部均受害，導(dǎo)致整個(gè)根系變褐、變黑以至腐爛，有的為黑腐，有的為黃褐色水漬狀腐爛，地上部分癥狀較輕。有的植株突然萎蔫或猝倒，有的耐病品種地上部分癥狀不明顯。在病田中，有的呈中心發(fā)病，逐漸向周圍擴(kuò)展；有的病株呈零星分布。發(fā)病輕者可開花結(jié)莢，但結(jié)莢數(shù)明顯減少，籽粒秕瘦；重者開花后全株枯死，導(dǎo)致絕收。

2.2 豌豆根腐病病原菌種類及組成

對(duì)分離出的病原菌進(jìn)行純培養(yǎng)后的結(jié)果見表1。

尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schlecht.）在PSA培養(yǎng)基上菌絲平鋪或厚密，正面蒼白色或帶紫藍(lán)色，背面米黃色、紫色或藍(lán)紫色，菌落中央常有淡黃褐色菌絲，生長茂盛并呈棉絮狀。小型分生孢子數(shù)量多，卵圓形或腎形，假頭狀著生在產(chǎn)孢細(xì)胞上，大?。?.0 ～ 12.6） μm×（2.5 ～ 3.6） μm。大型分生孢子美麗型，月牙形，稍彎，逐漸向兩端比較均勻的變尖?；愀黠@，1 ～ 6隔，大小為（10.0 ～ 60.0） μm×（2.5 ～ 6.0） μm，多數(shù)3隔，大小為（23.0 ～ 56.6） μm×（3.0 ～ 5.0） μm。

茄病鐮刀菌[Fusariumsolani（Mart.）Sacc.]在PSA培養(yǎng)基上菌絲稀薄或較旺，疏松或較密，正面灰白色或帶藍(lán)綠色，背面奶油色、藍(lán)綠色或棕色至棕葡萄酒色，生長期茸毛狀至絮狀，生長后期有藍(lán)綠色環(huán)狀輪紋。小型分生孢子數(shù)量多，卵形、腎形，壁較厚，大?。?.0 ～ 16.0） μm×（2.5 ～ 4.0） μm。大型分生孢子較胖，馬特型，即孢子最寬處在中線上部，兩端較鈍，頂胞稍尖，基胞有圓形足跟，壁較厚，2 ～ 8隔，大小為（10.0 ～ 74.3） μm×（3.0 ～ 7.0） μm。

3種病原菌在豌豆病株和健株上均有分布，在病株上的分布明顯多于健株，且鐮刀菌為優(yōu)勢(shì)種群，分離菌數(shù)占樣品總數(shù)的55.6%，是導(dǎo)致豌豆根腐病的主要病原菌，這個(gè)結(jié)果與前人一致，鏈格孢菌（Alternaria alternata）為非鐮刀菌主要病原菌，其分離頻率較高的原因一方面可能是因?yàn)橥愣贡旧韼Ь硪环矫婵赡苁窃谠囼?yàn)過程有感染。

2.3 豌豆植株不同部位病原菌的分布

144株病原菌株，來自病株、健株各72株。病株各部位帶菌率明顯高于健株。病原菌在豌豆的毛根、根、莖、莖分枝、豆莢主脈、果實(shí)中的分布無論在數(shù)量上和種群組成上都有很大的差異。毛根、根、莖、莖分枝、豆莢主脈、果實(shí)的病原菌分布情況分別見表2 ～ 7。

從表2 ～ 7中可以看出，豌豆根腐病病原菌的分布集中于根莖部。在病株上，尖孢鐮刀菌有16株分布在毛根、根、莖處，占帶菌總數(shù)的80%；茄病鐮刀菌也有16株分布于這些部位，占帶菌總數(shù)的80%。在健株上，8株尖孢鐮刀菌全部分布于根莖部。在病株的莖分枝、豆莢主脈及果實(shí)等部位則主要分布著鏈格孢菌。這表明豌豆鐮刀菌根腐病主要以土壤帶菌傳播為主，結(jié)果與李敏權(quán)[3 ]的報(bào)道是一致的。

3 小結(jié)與討論

對(duì)分離出的真菌進(jìn)行純培養(yǎng)和單孢分離后，鑒定出了3種豌豆根腐病病原菌，分別為尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌和非鐮刀菌的鏈格孢菌。3種病原菌在豌豆病株和健株上均有分布，病株上的病原菌分布明顯多于健株。鐮刀菌為優(yōu)勢(shì)種群，分離菌數(shù)占樣品總數(shù)的55.6%，是導(dǎo)致豌豆根腐病的主要病原菌。豌豆根腐病病原菌的分布集中于根莖部。在病株上，尖孢鐮刀菌有16株分布在毛根、根、莖處，占帶菌總數(shù)的80%；在茄病鐮刀菌也有16株分布于這些部位，占帶菌總數(shù)的80%。在健株上，8株尖孢鐮刀菌全部分布于根莖部。在病株的莖分枝、豆莢主脈及果實(shí)等部位則主要分布著鏈格孢菌。表明豌豆鐮刀菌根腐病主要以土壤帶菌傳播為主。

豌豆根腐病病原菌在寄主植物的毛根、根、莖、莖分枝、豆莢主脈及果實(shí)等部位的分布和優(yōu)勢(shì)種群方面均有著很大差異。同種植物不同部位病原菌種群分布差異的原因，可能是由于病原菌生存微環(huán)境如通氣狀況、土壤肥力、酶和其他化學(xué)成分的不同而適合不同的病原菌類群侵入、生長[11 - 13 ]，其機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉小娟，侯思雯，楊曉明，等. 甘肅高寒陰濕區(qū)豌豆根腐鐮刀菌種群及致病性研究[J]. 作物雜志，2012（2）：39-41.

[2] 楊曉明，任瑞玉. 國內(nèi)外豌豆生產(chǎn)和育種研究進(jìn)展[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2005（8）：3-5.

[3] 李敏權(quán). 甘肅省豌豆根腐病發(fā)生規(guī)律研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，30（增刊）：168～ 172.

[4] 李乾坤，孫順娣，李敏權(quán)，等. 甘肅中部干旱山區(qū)豌豆根腐病綜合防治研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1990，25（2）：158-164.

[5] 孫順娣，李乾坤，李敏權(quán)，等. 豌豆根腐病病原的初步研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，22（3）：63-68.

[6] 孫文姬，丁之銓，籍秀琴. 豌豆根腐病的病原菌鑒定[J]. 植物保護(hù)，1995（3）：35-36.

[7] 伍克俊，謝正團(tuán)，李秀君，等. 甘肅中部地區(qū)豌豆根腐病病原研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，27（3）：225-231.

[8] BOOTH C. The genus Fusarium[M]. Surrey：Commonwealth Mycological Institute， 1971.

[9] 張中義. 植物病原真菌學(xué)[M]. 成都：四川科技出版社，1988.

[10] 陸家云. 植物病原真菌學(xué)[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[11] 刁治民. 青海豌豆根腐病病原菌種類及致病性的研究[J]. 微生物學(xué)雜志，1996（16）：31-34.

[12] 宋 剛，徐玉明. 豌豆品種抗根腐病鑒定初報(bào)[J]. 雜糧作物，2001，21（4）：40-41.

[13] 彭小偉，楊麗源，周 斌，等. 植物黃花夾竹桃內(nèi)生真菌多樣性研究[J]. 云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，25（增刊）：28-31.

（本文責(zé)編：陳 珩）