宮內(nèi)慢性缺氧對(duì)子代大鼠心肌內(nèi)皮素—1和去甲腎上腺素表達(dá)的影響

徐潔歡 李耀軍 夏小艷

摘要 目的：探討產(chǎn)前宮內(nèi)慢性缺氧對(duì)予代大鼠心肌內(nèi)皮素-1、去甲腎上腺素表達(dá)的影響。方法：將30只SD懷孕大鼠隨機(jī)分為早孕期缺氧組、中孕期缺氧組、晚孕期缺氧組、整個(gè)孕期缺氧組和對(duì)照組，各6只。檢測子代大鼠心肌ET-1、NE的表達(dá)。結(jié)果：與對(duì)照組比較，缺氧組3個(gè)月齡和6個(gè)月齡子鼠ET-1表達(dá)均升高（P<0.01），缺氧組6個(gè)月齡子鼠NE表達(dá)升高（P<0.01）。結(jié)論：產(chǎn)前宮內(nèi)慢性缺氧可引起子代大鼠心肌ET-1、NE表達(dá)升高，其中妊娠早中期缺氧雄性子鼠受的影響最大。

關(guān)鍵詞 宮內(nèi)缺氧；內(nèi)皮素-1；去甲腎上腺素；心?。蝗焉?；大鼠

足夠的氧供是胎兒正常生長發(fā)育及耐受分娩的必要條件，涉及母體、胎盤和胎兒自身，任何環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙，均可導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)缺氧[1，2]。本課題主要研究宮內(nèi)慢性缺氧對(duì)子代大鼠心肌內(nèi)皮素-l和去甲腎上腺素表達(dá)的影響，通過免疫組化加HE染色方法檢測子代大鼠心肌內(nèi)皮素一l、去甲腎上腺素的表達(dá)，探討產(chǎn)前慢性缺氧是否影響子代大鼠成年期慢性高血壓、冠心病等疾病的發(fā)生。

資料與方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)SD雄性大鼠30只（4個(gè)月齡大鼠，體重330一450g），雌性SD大鼠30只（2個(gè)月齡大鼠，體重200一280g），無交配史，大鼠飼養(yǎng)于屏障獨(dú)立通風(fēng)籠盒（IVC）動(dòng)物房中。

雄、雌大鼠自由交配，托盤陰栓檢查法確定妊娠[3]，發(fā)現(xiàn)陰栓當(dāng)天為孕Od。SD大鼠孕鼠隨機(jī)均分為4個(gè)宮內(nèi)慢性缺氧組（I組）和正常對(duì)照組（D組）。其中各缺氧組分別于孕1～ 21 d，l～7 d，8～14 d，15～21d缺氧（I1、I2、I3、I4組），出生子代大鼠分別于1個(gè)月齡、3個(gè)月齡、6個(gè)月齡每組隨機(jī)各取雌、雄子鼠5只作為研究對(duì)象（雌鼠為H。、雄鼠為H，）。

方法：30只雌性SD大鼠（260g）與30只雄性SD大鼠（430g）隨機(jī)交配，見陰栓記為孕0 d；然后于缺氧組進(jìn)行不同孕期缺氧（缺氧濃度10%土2%，根據(jù)孕期每天定點(diǎn)缺氧5 h），參考應(yīng)紅安等建立的慢性宮內(nèi)缺氧模型建立本研究大鼠缺氧模型。對(duì)照組放入缺氧箱，但不予缺氧。每組出生子代大鼠分別于1個(gè)月齡、3個(gè)月齡、6個(gè)月齡每組隨機(jī)各取雌、雄子鼠5只，用免疫組化加HE染色方法檢測子代大鼠心肌內(nèi)皮素-1（ET-1）、去甲腎上腺素（NE）表達(dá)。 觀察指標(biāo)：取子代大鼠心肌組織石蠟包埋連續(xù)切片4張，采用放射免疫法和HE染色法，ET-1試劑盒由美國Proteintech公司提供，NE試劑盒由英國Abcam公司提供，分別按ET-1試劑盒及NE試劑盒說明書進(jìn)行操作；ET-1、NE各免疫組化染色l張，用PBS代替一抗的空白對(duì)照l張，另一張行HE染色。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以（-±s）表示，采用t檢驗(yàn)及方差分析進(jìn)行比較，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果

不同時(shí)間缺氧組與對(duì)照組1個(gè)月齡子代大鼠的心肌ET-1免疫組化加HE染色表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；不同時(shí)間缺氧組3個(gè)月齡、6個(gè)月齡子代大鼠（除妊娠晚期缺氧組）心肌ET-1免疫組化加HE染色表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且雄鼠高于雌鼠，妊娠早期和中期缺氧升高最為顯著。

不同時(shí)間缺氧組1個(gè)月齡、3個(gè)月齡子代大鼠的心肌NE免疫組化加HE染色表達(dá)與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；不同時(shí)間缺氧組與對(duì)照組6個(gè)月齡子代大鼠心肌ET-1免疫組化加HE染色表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義fP<0.01）。

討論

ET-1有豐富的生物學(xué)活性，包括強(qiáng)效的調(diào)節(jié)血管收縮、參與血管重塑、血管生成和細(xì)胞外基質(zhì)合成，在心血管系統(tǒng)組織中含量尤為豐富，在生理和病理過程中發(fā)揮著重要作用。去甲腎上腺素預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌具有保護(hù)作用，其機(jī)理是微量的去甲腎上腺素誘導(dǎo)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)物質(zhì)產(chǎn)生或使保護(hù)機(jī)制加強(qiáng)。

本課題通過免疫組化加HE染色檢測ET-1、NE的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，缺氧組3個(gè)月齡和6個(gè)月齡子鼠ET-1表達(dá)均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.Ol），以早孕期缺氧組和中孕期缺氧組的雄性子代升高最為顯著。與對(duì)照組比較，缺氧組6個(gè)月齡子鼠NE表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.Ol），以中孕期缺氧組的雄性子代升高最為顯著。因此，產(chǎn)前宮內(nèi)慢性缺氧可引起子代大鼠心肌ET-1、NE表達(dá)升高，與子代成年后易患高血壓、冠心病等心臟疾病有一定關(guān)聯(lián)。

參考文獻(xiàn)

[1]徐潔歡，李耀軍，葉楓，等，產(chǎn)前慢性缺氧對(duì)子代大鼠各器官組織影響的研究進(jìn)展[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2017，14（19）：189-190.

[2]李彥清，邵龍江，李森.大鼠陰栓的實(shí)驗(yàn)觀察和孕鼠模型鑒定方法的比較[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2002，12（1）：17-20.

[3]應(yīng)紅安，洪衛(wèi)文，童鴻，等.產(chǎn)前慢性缺氧對(duì)子代大鼠血壓的影響[J].嶺南心血管病雜志，2012，18（3）：298-302.