劉婷 王傳堂 唐月異 胡東青 王秀貞 吳琪 孫全喜 王志偉 宋國(guó)生 石程仁 殷冬梅

摘要：采集42份自然風(fēng)干花生種子近紅外光譜，并進(jìn)行維生素E含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）測(cè)定，利用偏最小二乘法（Modified PLS）構(gòu)建了多粒自然風(fēng)干花生種子維生素E含量的近紅外定量分析模型。經(jīng)優(yōu)化及內(nèi)部交叉檢驗(yàn)，確定最佳光譜預(yù)處理方法為“一階導(dǎo)數(shù)+多元散射矯正”，維生素E含量譜區(qū)范圍為6 094.3～7 506.0、4 242.8～5 454.0 cm-1，維數(shù)為8，模型的決定系數(shù)（R2）為88.34，交叉檢驗(yàn)根均方差（RMSECV）為0.423。利用該模型對(duì)6份花生野生種樣品的維生素E含量進(jìn)行預(yù)測(cè)，t測(cè)驗(yàn)結(jié)果顯示預(yù)測(cè)值與真實(shí)值間差異不顯著?？梢?，所建近紅外光譜模型可以很好地預(yù)測(cè)自然風(fēng)干花生種子中維生素E的含量。

關(guān)鍵詞：花生；自然風(fēng)干種子；維生素E含量；近紅外定量分析

中圖分類號(hào)：S565.201文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）06-0163-04

Abstract To build a near infrared spectroscopy （NIRS） model for predicting vitamin E content in sun-dried peanut seeds， spectral data of 42 peanut seed samples were collected and the vitamin E content of each sample was determined by reverse phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC）. Then a NIR calibration model for vitamin E content was established by partial least squares method （modified PLS）. Through optimizing and internal cross validation， the optimal spectrum pretreatment method was the first derivative plus multiplicative scattering correction. The spectrum range， rank， determination coefficient （R2） and root-mean-squares error of cross-validation （RMSECV） for vitamin E were 6 094.3～7 506.0 cm-1 and 4 242.8～5 454.0 cm-1， 8， 88.34 and 0.423， respectively. The model was used to predict the vitamin E content of 6 samples of wild peanut species， and the t test results showed that the difference between the predicted value and true value was not significant. Therefore， the constructed near-infrared spectroscopy model could predict the content of vitamin E in sun-dried peanut seeds very well.

Keywords Peanut； Sun-dried seed； Vitamin E content； Near infrared spectroscopy （NIRS）

花生是世界上主要的經(jīng)濟(jì)作物，是優(yōu)質(zhì)食用植物油和高消化率蛋白質(zhì)的重要來源[1]?；ㄉ泻斜容^豐富的維生素E[2，3]。維生素E是一種天然的抗氧化劑，是機(jī)體重要的脂溶性維生素，具有增強(qiáng)免疫力、延緩衰老、降低心血管疾病和癌癥發(fā)病率的功效[4，5]。維生素E的傳統(tǒng)測(cè)定方法包括熒光光譜法、高效液相色譜法、蔽塞法、氣相色譜法等，成本高、費(fèi)時(shí)間、有一定破壞性?；ㄉ呔S生素E育種迄今未能開展，原因就在于缺乏成本低廉、速度快、穩(wěn)定可靠的選擇鑒定技術(shù)。

近紅外檢測(cè)技術(shù)具有成本低、無損、速度快等優(yōu)點(diǎn)，已在棉籽、油菜、玉米、大豆、芝麻等多種農(nóng)作物的品質(zhì)分析中應(yīng)用[6-13]，在花生上也已成功建立了能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)脂肪酸、脂肪、蛋白、水分、蔗糖等含量的近紅外模型[14-18]，但有關(guān)花生維生素E含量預(yù)測(cè)的近紅外模型迄今未見報(bào)道。本研究利用自然風(fēng)干花生種子，采集其近紅外光譜，并通過RP-HPLC法測(cè)定其維生素E含量，目的在于構(gòu)建花生維生素E多粒近紅外模型，為花生高維生素E育種提供選擇手段。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

構(gòu)建維生素E模型所用的試驗(yàn)材料系來自國(guó)內(nèi)外的42 份花生品種（系），如表1所示。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 光譜采集 所用光譜數(shù)據(jù)均在德國(guó)布魯克光譜儀器公司生產(chǎn)的Matrix-Ⅰ型傅立葉變換近紅外光譜儀上采集。掃描譜區(qū)范圍為4 000～12 000 cm-1，掃描次數(shù)64次，分辨率為8 cm-1。開機(jī)預(yù)熱30 min后檢測(cè)樣品。采集光譜所用花生種子為自然日光干燥的樣品，每份材料約30～50粒，重復(fù)掃描3次。

1.2.2 維生素E含量測(cè)定 按GB 5009.82—2016中的反相高效液相色譜法[19]進(jìn)行測(cè)定。

1.2.3 模型構(gòu)建與優(yōu)化 光譜處理和模型構(gòu)建采用Matrix-Ⅰ型近紅外光譜儀自帶的OPUS 5.5軟件，用NIR選項(xiàng)自動(dòng)尋優(yōu)，選擇最佳光譜預(yù)處理辦法、最佳譜區(qū)、維數(shù)；采用內(nèi)部交叉檢驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，并剔除奇異點(diǎn)（outlier）。通過比較樣品預(yù)測(cè)值與化學(xué)值的決定系數(shù)（R2）和交叉驗(yàn)證根均方差（RMSECV）衡量模型質(zhì)量，篩選最佳模型。

對(duì)所建模型進(jìn)行外部驗(yàn)證，即：隨機(jī)挑選驗(yàn)證樣品，利用DPS 14.50數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)樣品的預(yù)測(cè)值和化學(xué)值進(jìn)行配對(duì)t測(cè)驗(yàn)，根據(jù)分析結(jié)果判斷模型的可靠性。

2 結(jié)果與分析

2.1 近紅外光譜的采集

采集的花生自然風(fēng)干多粒種子的近紅外光譜如圖1所示，符合預(yù)期。

2.2 花生籽仁中維生素E含量的化學(xué)分析

采用HPLC法測(cè)定42份花生籽粒樣品中的維生素E含量，樣品化學(xué)值相關(guān)參數(shù)見表2。維生素E含量均值為10.97 mg/100g，最大、最小值分別為17.10、8.21 mg/100g。表明建模花生樣品維生素E含量變幅尚可，可用于近紅外光譜模型構(gòu)建。

2.3 近紅外模型建立

經(jīng)自動(dòng)優(yōu)化，確定花生種子維生素E含量的最佳光譜預(yù)處理方法為“一階導(dǎo)數(shù)+多元散射矯正”，譜區(qū)范圍為6 094.3～7 506.0、4 242.8～5 454.0 cm-1，維數(shù)為8，模型的R2為88.34，RMSECV為0.423（圖2）。

2.4 模型預(yù)測(cè)效果驗(yàn)證

另取6份外部花生樣品（均為野生種），檢驗(yàn)?zāi)Ｐ皖A(yù)測(cè)效果，結(jié)果（表3）顯示，維生素E含量偏差為-0.76～0.59 mg/100g。對(duì)預(yù)測(cè)值與化學(xué)值進(jìn)行成對(duì)數(shù)據(jù)t測(cè)驗(yàn)，兩組數(shù)據(jù)均值差為0.101，自由度為5，t值為0.545

3 結(jié)論

維生素E抗氧化性強(qiáng)，有益人體健康[20]。有人曾將蘭娜型品種制取的花生油穩(wěn)定性強(qiáng)與其含有較多的維生素E聯(lián)系起來[21]。因此，提高花生種子中維生素E含量，不僅與人體健康息息相關(guān)，而且可能會(huì)有助于延長(zhǎng)花生制品的貨架期。

本研究采用反相高效液相色譜法測(cè)定花生種子中維生素E含量，與正相高效液相色譜法相比，其具有保留時(shí)間恒定、平衡快、色譜柱性能穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)。所構(gòu)建的自然風(fēng)干花生種子維生素E含量近紅外模型的R2較高，RMSECV較小，預(yù)測(cè)效果較好，為培育高維生素E花生品種提供了新的選擇手段。下一步將用于篩選本項(xiàng)目組化學(xué)誘變后代、種間雜交后代群體以及國(guó)內(nèi)外種質(zhì)，并利用經(jīng)色譜法確認(rèn)的維生素E含量更高的材料進(jìn)一步優(yōu)化補(bǔ)充模型，拓寬模型的適用范圍。

參 考 文 獻(xiàn)：

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