高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中的鹽酸克倫特羅

（蚌埠產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，安徽 蚌埠 233000）

鹽酸克倫特羅（CL）又稱“瘦肉精”，屬于β-興奮劑[1]，具有舒張支氣管、改善通氣，舒張和松弛子宮平滑肌的作用，被用作促生長(zhǎng)飼料添加劑[2]。但不法分子為了追求經(jīng)濟(jì)效益，將其應(yīng)用到了動(dòng)物身上，發(fā)生了一系列人類“瘦肉精”中毒事件?！妒称分锌赡苓`法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單（第四批）》（整頓辦函〔2010〕50號(hào)）將CL列入違法添加的非食用物質(zhì)[3]。因此，尋找一種有效的CL檢測(cè)方法具有重要意義。

目前，用于檢測(cè)CL的方法主要有生物傳感技術(shù)、高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用（GC/MS）等[4-5]。生物傳感技術(shù)僅可用于檢測(cè)尿液、血清和水溶液中的CL殘留，檢測(cè)范圍有限且靈敏度不高。HPLC耗時(shí)長(zhǎng)，普通的紫外檢測(cè)器對(duì)低濃度CL檢測(cè)的假陽(yáng)性率高、靈敏度低[6]。GC/MS法需要經(jīng)過一系列分離純化，操作麻煩[7]。本文介紹了液相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)CL，具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，且適用于大批量樣品的測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和設(shè)備

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（Agilent 1290+6460），電子天平，旋渦混合器，離心機(jī)，氮吹儀，pH計(jì)，超聲波發(fā)生器。

1.2 試劑和材料

甲醇，液相色譜純；乙腈，液相色譜純；0.2 mol/L乙酸銨緩沖溶液，15.47 g乙酸銨溶解于1 L水中，用適量乙酸調(diào)節(jié)pH至5.2；甲酸水溶液，2%；氨水甲醇溶液，5%；高氯酸，分析純；乙酸乙酯；飽和氫氧化鈉溶液；MCX陽(yáng)離子交換柱（60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL甲醇和3 mL水活化）；鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100 μg/mL）；同位素內(nèi)標(biāo)物，鹽酸克倫特羅-D9；同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液；同位素內(nèi)標(biāo)工作液，將上述同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液用甲醇進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm），流速0.3 mL/min，進(jìn)樣量5 μL；柱溫為30 ℃。流動(dòng)相：A=水；B=乙腈。梯度淋洗，見表1。

表1 梯度淋洗表

1.4 質(zhì)譜條件

干燥器流速，12 L/min；霧化氣，22.68 kg；脫溶劑氣溫度，350 ℃；電離方式，ESI+；碰撞氣，高純氮?dú)?；其他質(zhì)譜參數(shù)，見表2。

表2 鹽酸克倫特羅主要參考質(zhì)譜參數(shù)表

1.5 樣品制備

1.5.1 樣品提取

稱取2 g左右豬肉樣品于50 mL離心管中，加50 μL 400 μg/L的內(nèi)標(biāo)工作液和10 mL乙酸銨緩沖溶液于待測(cè)樣品中，加蓋用旋渦混合器混勻，超聲20 min，離心8 min（10 000 r/min）。倒出所有上清液于另一個(gè)50 mL離心管中，加460 μL高氯酸，漩渦混勻后放置10 min，加入飽和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH在9.5左右，加15 mL乙酸乙酯，漩渦混勻后離心5 min（6 000 r/min）。

轉(zhuǎn)移全部有機(jī)相，在50 ℃水浴下用氮?dú)鈱⑵浯蹈?。?%甲酸水溶液，旋渦混合均勻，使殘?jiān)浞秩芙夂髠溆谩?/p>

1.5.2 樣品凈化

將陽(yáng)離子交換柱連接到真空過柱裝置。將上述殘?jiān)芤荷现?，依次? mL 2%甲酸水溶液、3 mL甲醇洗滌柱子并徹底抽干。最后用4 mL 5%氨水甲醇溶液洗脫柱子上的待測(cè)成分。洗脫液在50 ℃水浴下氮?dú)獯蹈伞?/p>

準(zhǔn)確加入2 mL 10%乙腈水溶液，旋渦混勻，過濾膜供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

流動(dòng)相比例對(duì)峰形有顯著影響。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，選擇用水和乙腈作為流動(dòng)相，并選擇梯度淋洗，當(dāng)水與乙腈的比為95∶5時(shí)出峰不穩(wěn)定且峰形不好，當(dāng)選擇這個(gè)實(shí)驗(yàn)中的梯度淋洗后，出峰時(shí)間穩(wěn)定，且避免了雜質(zhì)峰的干擾。在最佳色譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖、質(zhì)譜圖分別如圖1、2所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜圖

溶劑的選擇對(duì)峰形的影響也比較顯著。當(dāng)選擇甲醇或乙腈作為溶劑時(shí)，峰形雜亂、響應(yīng)值低，甚至在低濃度時(shí)不出峰。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，選擇10%乙腈水溶液作為溶劑，峰形穩(wěn)定且靈敏度高。

2.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)鹽酸克倫特羅分析性能

在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，鹽酸克倫特羅的信號(hào)強(qiáng)度隨著濃度的增大而增大，如圖3（a）所示。以鹽酸克倫特羅的含量和組分色譜峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從圖3（b）可以看出，鹽酸克倫特羅的色譜峰面積跟其濃度的大小成正比例關(guān)系。在1～20 ng/mL，色譜峰面積（y）與鹽酸克倫特羅濃度（x）呈線性關(guān)系，檢出限為0.33 ng/mL（信噪比為3）。線性回歸方程y=1.114x-0.012，相關(guān)系數(shù)為0.999 5。由此可見，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)鹽酸克倫特羅具有良好的分析性能。

圖3 （a） 不同濃度的鹽酸克倫特羅色譜圖

圖3 鹽酸克倫特羅分析性能圖

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)中，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬肉中的鹽酸克倫特羅，檢測(cè)限為0.33 ng/mL。該方法靈敏度高、選擇性好。