江一靜 林志誠(chéng) 鄭美 游詠梅 薛偕華 夏敏 詹增土

摘要目的：觀察針刺曲池穴及足三里穴對(duì)MCAO模型大鼠行為學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及TGFβ1（transforming growth factorβ1）的影響，探析針刺的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。方法：將60只健康成年的Sprague Dawley大鼠（SD鼠）常規(guī)馴養(yǎng)3 d后隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和針刺組，各20只。模型組及針刺組大鼠接受線栓法進(jìn)行腦缺血模型制備，假手術(shù)組大鼠僅接受皮膚切開(kāi)及血管剝離術(shù)，假手術(shù)組及模型組術(shù)后回籠繼續(xù)飼養(yǎng)，每日模擬捉拿、穴位點(diǎn)觸一次。針刺組接受針刺曲池穴及足三里穴，1次/d，30 min/次，連續(xù)干預(yù)7 d。治療前后記錄大鼠catwalk系統(tǒng)動(dòng)靜態(tài)指標(biāo)的變化，TTC染色觀察大鼠腦梗死體積的變化，透射電鏡觀察大鼠腦組織超微結(jié)構(gòu)的變化，Western blot檢測(cè)各組大鼠腦組織TGFβ1濃度的差異。結(jié)果：1）Catwalk系統(tǒng)參數(shù)分析：造模組大鼠步行速度明顯慢于假手術(shù)組，步行時(shí)間明顯較針刺組長(zhǎng)，其中針刺組優(yōu)于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；2）TTC及其圖像軟件分析：造模組大鼠存在明顯腦梗死區(qū)域，針刺組腦梗死體積小于模型組（P<005）；3）透射電鏡：假手術(shù)組大鼠腦組織神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，模型組神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)受破壞，包括細(xì)胞膜不完整、細(xì)胞核腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少等，與模型組比較，針刺組大鼠腦組織具有較為完整的細(xì)胞膜及細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，線粒體空泡病變現(xiàn)象亦有明顯改善。4）Western blot：假手術(shù)大鼠腦組織的TGFβ1濃度明顯高于2組造模大鼠，經(jīng)過(guò)針刺干預(yù)后2組造模大鼠腦組織TGFβ1均高于假手術(shù)組，其中針刺組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)論：針刺曲池穴及足三里穴可通過(guò)上調(diào)TGFβ1濃度實(shí)現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞增殖及結(jié)構(gòu)修復(fù)，從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞腦缺血損傷；曲池穴；足三里穴；針刺；超微結(jié)構(gòu)；TGFβ1

Effects of Acupuncture at Quchi （LI 11） and Zusanli （ST 36） on the Behavior，

Ultrastructure and Protein TGFβ1 in the Cerebral Ischemia Rats

（Jiang Yijing1，2，Lin Zhicheng1，Zheng Mei1，You Yongmei1，Xue Xiehua1，Xia Min1，Zhan Zengtu1，2

（1 Rehabilitation Hospital affiliated to Fujiang University of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)uzhou，350001，China；

2 Rehabilitation Technology Key Laboratory in Fujian Province，fuzhou 350003，China）

AbstractObjective：To observe the effects of acupuncture at Quchi （LI 11） and Zusanli （ST 36） on the behavior， ultrastructure and protein TGFβ1 （transforming growth factor beta 1） in the MCAO model rats， and to explore and analyze the neuroprotective mechanism of acupuncture. Methods：After 3 days′ conventional domestication， 60 healthy adult Sprague Dawley （SD） rats were randomly divided into the control group， model group and acupuncture group， with 20 in each group. The rats in the both model group and acupuncture group accepted middle cerebral artery occlusion method for cerebral ischemia model preparation， and rats of control group received only the skin incision and vascular decollement. The postoperative control group and model group continue feeding in the cages， simulation captured once daily. Acupuncture group received acupuncture at LI 11 and ST 36， 1 time/day， 30 min/time， continuous intervention for 7 days. Rats′ dynamic and static index changes in the catwalk system before and after treatment were recorded. TTC staining was used to observe rat infarction volume changes. The ultrastructure changes of the rats were observed by transmission electron microscope （TEM）. The concentration differences of TGFβ1 were detected by Western blot in the groups of rats. Results：1） The Catwalk system parameter analysis：the walking speed of rats in the model groups was significantly slower than the control group， and the walking time longer than the acupuncture group. The acupuncture group was better than the model group， and the differences were with statistically significance （P<005）； 2） The TTC and image software analysis：the rats of molding groups had obvious cerebral infarction area， and the cerebral infarction volume of acupuncture group was less than the model group （P<005）； 3） Transmission electron microscopy （TEM） ：the neurons structure in the rats of control group was basically normal， and destroyed in the model group， including the incomplete cytomembrane， cell nucleus swelled， endoplasmic reticulum decreased. Compared with model group， the rats of acupuncture group had a relatively complete cytomembrane and nucleus structure， and mitochondria vacuoles had also improved significantly. 4） Western blot：after intervention， TGFβ1 in the brain of the two molding groups was higher than that in control group. The acupuncture group was higher than the control group， and the differences were with statistically significance （P<005）. Conclusion：Acupuncture at Quchi （LI 11） and Zusanli （ST 36） can achieve neurocyte proliferation and structure repair by upregulating the concentration of TGFβ1， so as to play a role of neuroprotection.

Key WordsCerebral ischemia injury； Quchi （LI 11）； Zusanli （ST 36）； Acupuncture； Ultrastructure； TGFβ1

中圖分類號(hào)：R24532+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.05.040

缺血性腦卒中具有高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率的特點(diǎn)，是臨床難治類疾病之一，多數(shù)患者遺留明顯的神經(jīng)功能缺損而嚴(yán)重影響生命質(zhì)量[13]。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究證實(shí)缺血性腦卒中后大腦存在缺血半暗帶，此部位存在半休眠狀態(tài)的神經(jīng)元細(xì)胞，在一定干預(yù)措施下促進(jìn)這部分細(xì)胞的增殖及結(jié)構(gòu)修復(fù)有可能使疾病獲得恢復(fù)[47]。TGFβ1是TGFβ家族重要成員，廣泛參與細(xì)胞增殖、凋亡、遷移過(guò)程，對(duì)機(jī)體的胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、器官形成等生理病理環(huán)節(jié)均有重要調(diào)控作用。

大量的臨床資料顯示針刺在改善腦卒中后肢體功能障礙方面具有無(wú)法替代的地位，但其作用機(jī)制尚未完全闡明，基于此我們?cè)O(shè)想：針刺改善缺血性腦卒中后神經(jīng)功能是否與增加或修復(fù)缺血半暗帶的神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量及結(jié)構(gòu)有關(guān)？而此過(guò)程是否借助TGFβ1進(jìn)行橋接？查閱大量文獻(xiàn)尚未發(fā)現(xiàn)此方面的研究，由此本團(tuán)隊(duì)以大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型大鼠為研究對(duì)象，觀察針刺對(duì)腦缺血后神經(jīng)功能的改善效果，并更進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。

1材料與方法

11材料

111動(dòng)物選購(gòu)60只清潔級(jí)的健康雄性SD大鼠，鼠齡25～4個(gè)月，平均鼠齡（2±03）個(gè)月。所有大鼠均購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（SLAC），許可證號(hào)：SCXX（滬）20070005。動(dòng)物飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（許可證號(hào)：SYXK（閩）2005004）。各組大鼠均分組飼養(yǎng)，5只/籠，飼養(yǎng)條件：溫度（23±1）°C，濕度（50±1）%，以12/12 h為光暗周期。各組大鼠馴養(yǎng)至體重為（290±10）g時(shí)進(jìn)行造模及干預(yù)。

112試劑與儀器顯微剪刀、顯微鑷、動(dòng)脈血管夾（均購(gòu)自上海醫(yī)療器械有限公司），諾達(dá)思動(dòng)物步態(tài)分析系統(tǒng)（Catwalk XT）10（購(gòu)自荷蘭Noldus公司），華佗牌不銹鋼針刺針（購(gòu)自中國(guó)蘇州醫(yī)療用品有限公司），10%水合氯醛、4%多聚甲醛溶液、液氮、2，3，5氯化三苯四唑（均購(gòu)自凱福達(dá)化工有效公司），PMSF、電泳膠配液、BCA蛋白定量試劑盒、超敏ECL化學(xué)發(fā)光液（均購(gòu)自碧云天生物有限公司），actin、TGFβ1抗體（購(gòu)自美國(guó)CST公司）。

12方法

121分組與模型制備將上述60只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和針刺組，各20只。本研究經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物管理制度和使用委員會(huì)批準(zhǔn)而進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物的處理均嚴(yán)格按照國(guó)際道德準(zhǔn)則和國(guó)家健康指南關(guān)于維護(hù)和使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物先關(guān)條例進(jìn)行。3組大鼠在體重、鼠齡等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005），具有可比性。參照改良的Zea Longa[8]線栓法進(jìn)行MCAO模型的制備，用10%的水合氯醛以03 mL/kg的比例對(duì)各組大鼠進(jìn)行麻醉，待大鼠充分麻醉后固定于手術(shù)板上，將大鼠頸部皮毛剔除干凈后與頸部正中位置做一長(zhǎng)約3 cm的豎型切口，將左側(cè)的頸總動(dòng)脈充分暴露，逐步分離走神經(jīng)、頸外動(dòng)脈及頸內(nèi)動(dòng)脈，將頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)端充分結(jié)扎后利用動(dòng)脈夾將頸內(nèi)動(dòng)脈夾閉，于分叉口處做一小切口，事先用指甲油將魚(yú)線一端涂抹成光滑球面晾干后從上述小切口插入頸內(nèi)動(dòng)脈中，插入長(zhǎng)度約20 mm，用縫合線將頸總動(dòng)脈及魚(yú)線栓緊，縫合皮膚并消毒。假手術(shù)組大鼠僅接受皮膚切開(kāi)及血管剝離術(shù)，術(shù)后縫合皮膚并消毒。

122干預(yù)方法3組大鼠術(shù)后均回籠飼養(yǎng)，假手術(shù)組及模型組造模成功后每日捉拿，并用針具點(diǎn)觸穴位，1次/d，連續(xù)進(jìn)行7 d。針刺組大鼠針刺曲池穴及足三里穴，取穴位置參照參照李忠仁主編[9]的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，針刺深度為曲池為6 mm，足三里為8 mm，行針1次/10 min，留針30 min，1次/d，連續(xù)治療7 d。

123檢測(cè)指標(biāo)與方法

1231行為學(xué)檢測(cè)采用Catwalk步行系統(tǒng)對(duì)各組大鼠的步行能力進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)前所有大鼠均在暗室環(huán)境中接受為期3 d的適應(yīng)性訓(xùn)練，以大鼠順利通過(guò)整個(gè)玻璃板為1次，至少訓(xùn)練6次/d，不少于10步/次。大鼠步行足底接觸玻璃平面時(shí)會(huì)發(fā)生熒光反射，高速攝像機(jī)抓取熒光信號(hào)，傳輸至計(jì)算機(jī)產(chǎn)生相關(guān)數(shù)據(jù)，每只大鼠適應(yīng)性訓(xùn)練時(shí)的步行參數(shù)作為基線。本研究記錄各組大鼠的步行時(shí)間、步行速度及各肢體的平均壓強(qiáng)。

1232腦梗死體積的計(jì)算各組大鼠中隨機(jī)抓取3只大鼠進(jìn)行斷頭取腦，將腦組織進(jìn)行TTC染色以檢測(cè)造模是否成功。用10%的水合氯醛以03 mL/kg的比例對(duì)各組大鼠進(jìn)行麻醉后冰上取腦，將新鮮腦組織快速置于-80 ℃冰箱進(jìn)行保存，20 min后取出腦組織用刀片均勻切成5薄片，每片厚約2 mm，將5薄片避光條件下置于2%2，3，5氯化三苯四唑液體中染色，染色過(guò)程中不時(shí)用毛筆翻動(dòng)腦片以確保其與2，3，5氯化三苯四唑液體充分接觸，染色結(jié)束后梗死的腦組織呈現(xiàn)白色，而未梗死的區(qū)域呈現(xiàn)紅色，隨后將腦組織置于PH值為74的4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液中固定，固定后將腦片整齊排列于可顯示刻度的標(biāo)尺上，用高清數(shù)碼相機(jī)拍攝后錄入軟件，并利用ImageProPlus圖像分析處理系統(tǒng)（Motic Med 60 System）計(jì)算每個(gè)腦片的梗死體積，隨后將5個(gè)腦片的最終結(jié)果相加即得最終的腦梗死體積。

1233透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)各組大鼠中隨機(jī)選取3只進(jìn)行麻醉，隨后于腹主動(dòng)脈注入4%的多聚甲醛進(jìn)行腦組織灌流固定，冰上取出缺血半暗度組織，將其修剪成大小1 mm3左右的組織，預(yù)固定于25%戊二醛磷酸緩沖液中再靜置24 h，隨后取出組織用01 mol/L的磷酸緩沖液漂洗3次，10 min/次，取出組織后于4 ℃條件下進(jìn)行常規(guī)脫水，包埋，隨后將包埋的組織塊置于60 ℃烘干箱中聚合2 d后修切成厚度1 μm的半薄切片，再用超薄刀片將其切成60 mm薄片，干燥后置于透射電子顯微鏡下觀察標(biāo)本的超微結(jié)構(gòu)。

1234蛋白印跡法測(cè)定蛋白水平變化從各組大鼠中隨機(jī)選取3只脫頸處死后，剪取相對(duì)應(yīng)缺血半暗帶組織100 mg置于離心管中，根據(jù)不同組織重量家里相應(yīng)的裂解液，放置于4 ℃進(jìn)行勻漿處理后設(shè)置15 000 r/min轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，用移液槍抽吸上清液，使用BCA試劑盒對(duì)25 μL上清液進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定，同時(shí)計(jì)算上樣量。完成上述步驟后以4：1的比例往上清液中樣緩沖液，將混合液置于100 ℃金屬浴鍋中進(jìn)行蛋白變性7 min。根據(jù)碧云天BCA試劑盒說(shuō)明書(shū)配制膠體（6%濃縮膠，12%分離膠），將事先計(jì)算好每組上樣量將標(biāo)本加入膠體中60 V進(jìn)行電145 min后將膠體上的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜中，再用麗春紅進(jìn)行PVDF膜染色觀察蛋白是否順利轉(zhuǎn)印至PVDF膜中。用TBST將脫脂奶粉配制成5%濃度，將轉(zhuǎn)印后目的蛋白的PVDF膜進(jìn)行封閉2 h，隨后用PBS沖洗，置于顯影儀器中，滴入ECL顯影液，反應(yīng)60 s后進(jìn)行條帶掃描，得出OD值。

13統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 200統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行研究數(shù)據(jù)的分析。所得數(shù)據(jù)都用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（±s）表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)或兩樣本秩和檢驗(yàn)；組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)或配對(duì)秩和檢驗(yàn)，以P<005為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

21針刺對(duì)各組大鼠行為學(xué)的影響造模組大鼠步行速度明顯慢于假手術(shù)組，步行時(shí)間明顯較針刺組長(zhǎng)，其中針刺組優(yōu)于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)表1。

22針刺可明顯縮小腦梗死體積對(duì)3組造模大鼠腦組織進(jìn)行TTC染色，結(jié)果顯示假手術(shù)組大鼠腦片全呈紅色，而造模組大鼠出現(xiàn)不同程度的白色梗死區(qū)域，針刺組腦梗死區(qū)域小于模型組（P<005）。見(jiàn)圖1、圖2。

23針刺可明顯改善腦組織的超微結(jié)構(gòu)假手術(shù)組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整，可見(jiàn)完整且飽滿的細(xì)胞核，個(gè)細(xì)胞器完整。模型組大鼠細(xì)胞結(jié)構(gòu)收到明顯破壞，細(xì)胞膜破裂，膜內(nèi)物質(zhì)流失，各細(xì)胞器散亂溶解辨識(shí)不清。與模型組比較，針刺組大鼠腦組織具有較為完整的細(xì)胞膜及細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，線粒體空泡病變現(xiàn)象亦有明顯改善。見(jiàn)圖3。

23針刺可明顯下調(diào)腦組織TGFβ1的濃度假手術(shù)大鼠腦組織的TGFβ1濃度明顯高于2組造模大鼠，經(jīng)過(guò)針刺干預(yù)后2組造模大鼠腦組織TGFβ1均高于假手術(shù)組，其中針刺組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。見(jiàn)圖4、圖5。

3討論

古籍尚無(wú)腦缺血的病名記載，其屬于“中風(fēng)”范疇，機(jī)體氣血逆亂后由此產(chǎn)生的風(fēng)、火、痰、瘀等病理產(chǎn)物壅堵腦脈，引起神機(jī)受損，產(chǎn)生以半身不遂為主癥的臨床疾病。對(duì)于本病的治療古代醫(yī)賢早有認(rèn)識(shí)，《素問(wèn)痿論篇》中寫(xiě)到：“治痿獨(dú)取陽(yáng)明”，認(rèn)為陽(yáng)明經(jīng)多氣多血，是后天精微化生的源頭，刺激陽(yáng)明經(jīng)穴可調(diào)節(jié)五臟六腑，潤(rùn)澤全身宗筋以約束骨骼。本團(tuán)隊(duì)對(duì)歷代古籍及現(xiàn)代臨床報(bào)道進(jìn)行總結(jié)，結(jié)果顯示治療中風(fēng)偏癱的常用穴位共99個(gè)，其中曲池穴及足三里穴是使用頻率最高的二穴。從穴位特點(diǎn)不難看出，曲池穴及足三里穴均為陽(yáng)明經(jīng)主穴，與“治痿獨(dú)取陽(yáng)明”理念一致。曲池穴屬手陽(yáng)明大腸經(jīng)合穴，此穴因聚合手三里穴氣化而來(lái)的物質(zhì)而成為大腸經(jīng)經(jīng)氣最旺盛的穴位，現(xiàn)代解剖學(xué)顯示橈側(cè)腕長(zhǎng)伸肌起始于曲池穴，周圍分布包括前臂側(cè)皮神經(jīng)、橈神經(jīng)在內(nèi)的諸多神經(jīng)組織。足三里穴乃足陽(yáng)明胃經(jīng)的下合穴，脾土燥化水濕后將地部物質(zhì)固化于此，天部之精氣亦通過(guò)胃經(jīng)循行上傳，足三里穴有健脾化濕、生發(fā)胃氣之功效。

現(xiàn)代解剖學(xué)顯示足三里穴覆蓋脛骨前肌、趾長(zhǎng)伸肌、脛骨后肌三大肌肉，同時(shí)分布以腓深神經(jīng)等諸多神經(jīng)，刺激足三里穴可促進(jìn)相關(guān)的神經(jīng)肌肉運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。正如張義[10]研究所示：利用現(xiàn)代數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)對(duì)針灸治療中風(fēng)偏癱的用穴規(guī)律進(jìn)行總結(jié)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽(yáng)明經(jīng)穴位使用頻次最多，其中曲池穴與足三里穴的配伍最為常見(jiàn)。基于此，我們采用針刺曲池穴、足三里穴作為治療腦缺血后運(yùn)動(dòng)功能障礙有了科學(xué)依據(jù)。MCAO造模后我們發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)明顯偏癱癥狀，在對(duì)腦片進(jìn)行TTC染色后亦證實(shí)腦組織明顯明顯的梗死區(qū)域，這說(shuō)明此次研究的造模是成功的。對(duì)造模大鼠進(jìn)行針刺干預(yù)后針刺組大鼠在Catwalk平板上的運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng)。Catwalk步態(tài)分析系統(tǒng)屬于定量的、可自動(dòng)分析的步態(tài)分析儀器，其可客觀記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)靜態(tài)步態(tài)參數(shù)，既往Catwalk步態(tài)分析系統(tǒng)主要用于關(guān)節(jié)炎等[1117]，隨著運(yùn)用范圍的逐漸擴(kuò)展，其越來(lái)越多用于神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域，更清晰地體現(xiàn)步態(tài)行為改變與腦缺血損傷之間的關(guān)系。本研究對(duì)各組大鼠腦組織的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示假手術(shù)組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞基本正常，而2組造模組大鼠神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)均受到不成程度的破壞，包括細(xì)胞膜不完整、細(xì)胞核腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少等，與模型組比較，針刺組大鼠腦組織具有較為完整的細(xì)胞膜及細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，線粒體空泡病變現(xiàn)象亦有明顯改善，這提示針刺曲池穴及足三里穴地阻止了缺血度腦組織的損害，發(fā)揮了腦保護(hù)效應(yīng)。

對(duì)了探討針刺曲池穴及足三里穴的作用機(jī)制我們檢測(cè)了3組大鼠腦組織TGFβ1蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示2組造模組大鼠腦組織TGFβ1表達(dá)明顯高于假手術(shù)組，經(jīng)過(guò)一階段干預(yù)后針刺組大鼠TGFβ1表達(dá)有所下降。TGFβ1在正常機(jī)體中表達(dá)較少，當(dāng)腦組織受到缺血缺氧破壞時(shí)TGFβ1表達(dá)逐漸增多，腦缺血發(fā)生時(shí)腦組織逐漸無(wú)法耐受缺血而逐漸壞死，從而產(chǎn)生大量的TGFβ1以抵御由此導(dǎo)致的神經(jīng)功能障礙[18]，此外，TGFβ1還可通過(guò)提高機(jī)體的免疫能力，調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)效應(yīng)，減輕腦水腫程度，同時(shí)促進(jìn)微血管的生成而發(fā)揮修復(fù)腦組織的目的，結(jié)果顯示針刺曲池穴及足三里穴可提高TGFβ1濃度，增強(qiáng)機(jī)體的自我保護(hù)能力以抵抗腦缺血帶來(lái)的致命性打擊。

總之，本研究證實(shí)針刺曲池穴及足三里穴可明顯縮小MCAO大鼠的腦梗體積，改善其超微結(jié)構(gòu)，我們認(rèn)為該方法是通過(guò)上調(diào)TGFβ1濃度而實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)目的。

參考文獻(xiàn)

[1]Sato C.An experience note in attending Global Aging Initiative[J].Nihon Ronen Igakkai Zasshi，2013，50（5）：669670.

[2]洪震.腦卒中的流行病學(xué)及其危險(xiǎn)因素[J].中國(guó)卒中雜志，2006，1（8）：559563.

[3]涂雪松.缺血性腦卒中的流行病學(xué)研究[J].中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué)，2016，24（5）：594599.

[4]Matsuoka K，Yasuno F，Taguchi A，et al.Delayed atrophy in posterior cingulate cortex and apathy after stroke[J].Int J Geriatr Psychiatry，2015，30（6）：566572.

[5]Sihvonen AJ，Ripollés P，Leo V，et al.Neural Basis of Acquired Amusia and Its Recovery after Stroke[J].J Neurosci，2016，36（34）：88728881.

[6]Zavaglia M，F(xiàn)orkert ND，Cheng B，et al.Mapping causal functional contributions derived from the clinical assessment of brain damage after stroke[J].Neuroimage Clin，2015，9：8394.

[7]游詠梅，薛偕華，陶靜，等.電針曲池穴及足三里穴對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)細(xì)胞線粒體凋亡途徑的影響[J].中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志，2014，36（10）：745750.

[8]Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：8491.

[9]李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007：242.

[10]羅玲，王靜，任玉蘭，等.古代針灸治療中風(fēng)穴位處方配伍規(guī)律研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，33（4）：14.

[11]Hendriks WT，Eggers R，Ruitenberg MJ，et al.Profound differences in spontaneous longterm functional recovery after defined spinal tract lesions in the rat[J].J Neurotrauma，2006，23（1）：1835.

[12]Salazar DL，Uchida N，Hamers FP，et al.Human neural stem cells differentiate and promote locomotor recovery in an early chronic spinal cord injury NODscid mouse model[J].PLoS One，2010，5（8）：e12272.

[13]Hamers FP，Lankhorst AJ，van Laar TJ，et al.Automated quantitative gait analysis during overground locomotion in the rat：its application to spinal cord contusion and transection injuries[J].J Neurotrauma，2001，18（2）：187201.

[14]Vrinten DH，Hamers FF.‘CatWalk automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat；a comparison with von Frey testing[J].Pain，2003，102（12）：203209.

[15]Gabriel AF，Marcus MA，Honig WM，et al.The CatWalk method：a detailed analysis of behavioral changes after acute inflammatory pain in the rat[J].J Neurosci Methods，2007，163（1）：916.

[16]Bozkurt A，Scheffel J，Brook GA，et al.Aspects of static and dynamic motor function in peripheral nerve regeneration：SSI and CatWalk gait analysis[J].Behav Brain Res，2011，219（1）：5562.

[17]Hoffmann MH，Hopf R，Niederreiter B，et al.Gait changes precede overt arthritis and strongly correlate with symptoms and histopathological events in pristaneinduced arthritis[J].Arthritis Res Ther，2010，12（2）：R41.

[18]陶海泉，王振宇，楊立莊，等.高壓氧治療對(duì)高血壓性腦出血患者血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、血管內(nèi)皮功能及免疫功能的影響[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志，2017，40（4）：391395.

（2017-11-17收稿責(zé)任編輯：王明）（上接第1207頁(yè)）

[10]陳虎，蒲俊松，向仲懷，等.藥桑葚總黃酮的提取工藝及其抗氧化活性分析[J].食品科學(xué)，2014，35（12）：712.

[11]金小越，王智穎，郭世民.維藥阿那其根醇提物及原粉膠囊的急性毒性試驗(yàn)[J].中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2013，13（S3）：3132.

[12]何平，鄒佳峻，費(fèi)士杰.連錢(qián)草水提物抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2014，35（2）：6364.

[13]韋健全，羅瑩，黃健，等.榼藤的鎮(zhèn)痛抗炎及急性毒性的實(shí)驗(yàn)研究[J].華西藥學(xué)雜志，2012，27（4）：461463.

[14]曹婉鑫，唐瑤，陳洋.曲克蘆丁藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2015，21（9）：7375.

[15]Wei JL，F(xiàn)u W，Ding YJ，et al.Progranulin derivative Atsttrin protects against early osteoarthritis in mouse and rat models[J].Arthritis Res Ther，2017，19（1）：280.

[16]Ahmad NS，Waheed A，F(xiàn)arman M，et al.Analgesic and antiinflammatory effects of Pistacia integerrima extracts in mice[J].J Ethnopharmacol，2010，129（2）：2503.

[17]龔新榮，何華瓊，李紅月，等.不同產(chǎn)地黃芩抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11（12）：8283.