李 惠，丁曉爽，田恩圣*

（淄博市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 淄博 255086）

尿促性素（menotropin）為絕經(jīng)婦女尿中提取的促性腺激素，主要含卵泡刺激性素（folliclestimulating hormone，F(xiàn)SH）與黃體生成素（luteinisting hormone， LH），主要通過(guò)補(bǔ)充患者促性腺激素不足以促進(jìn)卵泡成熟，刺激排卵及加快黃體發(fā)育，臨床用于治療不孕不育癥已有40多年歷史[1-3]。研究認(rèn)為尿促性素較大劑量使用易導(dǎo)致多胎妊娠和卵巢過(guò)度刺激綜合征的發(fā)生，主張盡量降低尿促性素的用量[4-5]。因此尿促性素生物效價(jià)的準(zhǔn)確測(cè)定，對(duì)其臨床用藥有重要的指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)室近兩年按《中國(guó)藥典》2015年版多次測(cè)定注射用尿促性素效價(jià)，發(fā)現(xiàn)大鼠解剖時(shí)的終體重可能對(duì)其效價(jià)測(cè)定產(chǎn)生影響。已有文獻(xiàn)指出雌性大鼠初始體重對(duì)尿促性素中卵泡刺激素效價(jià)測(cè)定有影響[6]。但未見大鼠終體重對(duì)尿促性素效價(jià)測(cè)定影響的報(bào)道。本文對(duì)14次尿促性素效價(jià)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，探究大鼠終體重對(duì)尿促性素效價(jià)測(cè)定的影響。

1 儀器、材料與動(dòng)物

1.1 儀器

BT124S型電子天平（賽多利斯）；HCB20002型電子天平（慈溪華徐衡器）

1.2 材料

尿促性素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：150524-201504，規(guī)格：FSH 247 IU/支，LH 202 IU/支）；注射用尿促性素（煙臺(tái)東誠(chéng)北方制藥）；牛血清白蛋白（MP Biomedicals，LLC，批號(hào)：9651J，CAT號(hào)：103703）；氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)）。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，SPF級(jí)，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（魯）20140007。本單位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（魯）20130004。

2 方法

本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1216 FSH生物測(cè)定法和1217 LH生物測(cè)定法進(jìn)行[7]。

2.1 動(dòng)物分組

大鼠初始體重按要求，應(yīng)在36～60 g，且相差不得超過(guò)15 g。本實(shí)驗(yàn)中，為統(tǒng)計(jì)的合理性，減小初始體重對(duì)終體重的影響，選擇初始體重均為37～47 g，相差不超過(guò)10 g大鼠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.2 溶液的配制

FSH溶液按規(guī)定，配制為高劑量組（4 IU/ml），中劑量組（2 IU/ml），低劑量組（1 IU/ml），相鄰兩濃度之比值均為0.5的溶液。LH溶液按規(guī)定，配制為高劑量組（10 IU/ml），中劑量組（6 IU/ml），低劑量組（3.6 IU/ml），相鄰兩濃度之比值均為0.6的溶液。本實(shí)驗(yàn)室溶液劑量均使低劑量組卵巢/精囊明顯增重，高劑量組卵巢/精囊增重不致達(dá)極限。

2.3 效價(jià)測(cè)定

按規(guī)定方法皮下注射后，將動(dòng)物處死，稱重，解剖，摘出卵巢/精囊，稱重。以每10 g動(dòng)物體重的卵巢/精囊毫克數(shù)作為反應(yīng)值，用bs2000生物系統(tǒng)軟件中量反應(yīng)平行線3.3法計(jì)算生物效價(jià)。實(shí)驗(yàn)可靠性測(cè)驗(yàn)均通過(guò)[F檢驗(yàn)：回歸項(xiàng)顯著（P＜0.01），偏離平行、二次曲線和反向二次曲線不顯著（P＞0.05）]，F(xiàn)SH可信限率（FL%）小于45 %，LH可信限率（FL%）小于35 %。

2.4 數(shù)據(jù)處理

注射用尿促性素為樣品組，尿促性素標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照組。為進(jìn)行數(shù)據(jù)比較，按以下公式計(jì)算相對(duì)反應(yīng)值。

式中反應(yīng)值為每10 g動(dòng)物體重的卵巢毫克數(shù)/精囊毫克數(shù)，對(duì)照組的反應(yīng)值系數(shù)為1，樣品組的反應(yīng)值系數(shù)為其測(cè)得的相應(yīng)效價(jià)。統(tǒng)計(jì)14次注射用尿促性素效價(jià)測(cè)定實(shí)驗(yàn)中所有相對(duì)反應(yīng)值，其中大鼠終體重每5 g為一區(qū)間，低、中、高3個(gè)濃度分別統(tǒng)計(jì)，將各體重區(qū)間樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照組相對(duì)反應(yīng)值兩兩進(jìn)行t檢驗(yàn)。若P＜0.05，則表明該體重區(qū)間的樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照組的相對(duì)反應(yīng)值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該體重區(qū)間的大鼠終體重對(duì)其生物效價(jià)測(cè)定有影響。

3 結(jié)果

3.1 雌性大鼠終體重對(duì)FSH效價(jià)測(cè)定的影響

結(jié)果見表1。由表1可見，雌性大鼠各體重區(qū)間樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照品的相對(duì)反應(yīng)值兩兩進(jìn)行t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的組數(shù)為8組，占對(duì)照品總組數(shù)的38.10 %，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的數(shù)量為477只，占對(duì)照組總數(shù)量的41.41 %，而一般生物測(cè)定誤差為20 %左右[8]，表明雌性大鼠終體重對(duì)FSH的相對(duì)反應(yīng)值有影響。進(jìn)一步綜合分析低、中、高3個(gè)劑量，當(dāng)雌性大鼠終體重為50～55 g和70～75 g時(shí)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但70～75 g體重區(qū)間的標(biāo)準(zhǔn)差（s）小于50～55 g，個(gè)體間變異更小。綜上，70～75 g為雌性大鼠卵泡刺激素效價(jià)測(cè)定的最佳終體重。

表1 FSH效價(jià)測(cè)定的相對(duì)反應(yīng)值統(tǒng)計(jì)表（±s）

表1 FSH效價(jià)測(cè)定的相對(duì)反應(yīng)值統(tǒng)計(jì)表（±s）

注：各體重區(qū)間的樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照品的相對(duì)反應(yīng)值兩兩進(jìn)行t檢驗(yàn)， *P＜0.05。

低劑量（1單位/ml） 中劑量（2單位/ml） 高劑量（4單位/ml）樣品組 對(duì)照組 樣品組 對(duì)照組 樣品組 對(duì)照組n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值＜50 7 12.065±2.367 3 10.876±1.702 9 6.796±1.804 3 7.779±1.411 8 6.441±0.917* 3 4.664±0.519 50～55 50 13.702±3.038 9 12.340±1.966 43 8.652±2.877 8 7.087±1.222 45 5.847±1.046 6 5.217±0.899 55～60 98 13.193±2.673 34 12.722±2.249 104 8.923±2.605 27 8.808±1.713 110 6.318±1.235* 34 5.860±0.853 60～65 130 14.516±2.741 36 13.461±3.511 123 9.510±1.946 45 8.894±1.612 129 6.178±1.176* 42 5.671±1.099 65～70 71 14.041±2.595*21 12.562±1.991 76 9.099±2.004*19 8.046±1.092 66 6.282±1.067* 17 5.678±1.163 70～75 21 12.606±2.474 7 11.238±1.155 19 8.113±1.938 6 7.359±0.684 16 5.629±1.132 7 4.621±1.059＞75 7 12.519±1.829*2 8.880±0.227 10 8.017±1.481* 4 5.980±0.889 10 4.041±0.476* 3 3.242±0.296總體重區(qū)間 384 13.799±2.767 112 12.688±2.683 384 9.192±1.906 112 8.384±1.627 384 6.124±1.989 112 5.547±1.106大鼠終體重區(qū)間/g

3.2 雄性大鼠終體重對(duì)LH效價(jià)測(cè)定的影響

結(jié)果見表2。由表2可見，雄性大鼠各體重區(qū)間樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照品的相對(duì)反應(yīng)值兩兩進(jìn)行t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的組數(shù)為6組，占對(duì)照品總組數(shù)的28.57 %，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的數(shù)量為410只，占對(duì)照組總數(shù)量的47.45 %，而一般生物測(cè)定誤差為20 %左右[8]，表明雄性大鼠終體重對(duì)LH的相對(duì)反應(yīng)值有影響（中劑量組對(duì)照組55 g以下動(dòng)物僅1只，未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)）。進(jìn)一步綜合分析低、中、高3個(gè)劑量，當(dāng)雄性大鼠終體重為55～60 g和75～80 g時(shí)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但75～80 g體重區(qū)間的標(biāo)準(zhǔn)差（s）均小于55～60 g，個(gè)體間變異更小。綜上，75～80 g為雄性大鼠LH效價(jià)測(cè)定的最佳終體重。

表2 LH效價(jià)測(cè)定的相對(duì)反應(yīng)值統(tǒng)計(jì)表（±s）

表2 LH效價(jià)測(cè)定的相對(duì)反應(yīng)值統(tǒng)計(jì)表（±s）

注：各體重區(qū)間的樣品組的相對(duì)反應(yīng)值與對(duì)照品的相對(duì)反應(yīng)值兩兩進(jìn)行t檢驗(yàn)， *P＜0.05，**P＜0.01

低劑量（3.6單位/ml） 中劑量（6單位/ml） 高劑量（10單位/ml）樣品組 對(duì)照組 樣品組 對(duì)照組 樣品組 對(duì)照組n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值 n 相對(duì)反應(yīng)值＜55 4 1.061±0.147 2 0.951±0.049 3 0.876±0.071 1 0.731 3 0.571±0.015 2 0.590±0.011 55～60 31 0.961±0.150 12 0.881±0.130 25 0.741±0.135 8 0.664±0.113 16 0.575±0.061 6 0.518±0.087 60～65 65 0.952±0.170* 21 0.849±0.146 50 0.706±0.126 13 0.661±0.093 49 0.545±0.071** 19 0.477±0.074 65～70 84 0.882±0.148* 21 0.795±0.105 90 0.706±0.111 31 0.676±0.108 97 0.535±0.066** 25 0.490±0.072 70～75 57 0.935±0.159** 15 0.812±0.131 58 0.678±0.118 17 0.659±0.113 58 0.515±0.078* 16 0.466±0.085 75～80 33 0.910±0.130 9 0.838±0.140 42 0.669±0.081 11 0.622±0.042 44 0.502±0.054 13 0.471±0.045＞80 14 0.902±0.150 4 0.760±0.051 20 0.672±0.136 3 0.556±0.073 21 0.488±0.057 3 0.489±0.056總體重區(qū)間 288 0.923±0.156 84 0.831±0.128 288 0.697±0.118 84 0.654±0.106 288 0.527±0.070 84 0.484±0.073大鼠終體重區(qū)間/g

4 結(jié)論

大鼠終體重對(duì)尿促性素效價(jià)測(cè)定有影響，雌性大鼠終體重70～75 g，雄性大鼠終體重75～80 g，為其效價(jià)測(cè)定最佳終體重，對(duì)尿促性素效價(jià)測(cè)定有指導(dǎo)意義。