唐明先,陳 杭,羅孝貴,何曉蘭,羊玉蓉,馬 薇,戴旭光,降初拉爾布
(1.甘孜州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所,四川 康定 626000;2.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所,四川 成都 610066)
靈芝(Ganoderma lucidum) 為大型藥用真菌,古代醫(yī)書(shū)《神農(nóng)本草經(jīng)》將靈芝列為上品,現(xiàn)代中醫(yī)認(rèn)為,靈芝具有強(qiáng)心、保肝、鎮(zhèn)靜的功效[1]。甘孜州靈芝栽培起步晚,面積小、品種單一,因市場(chǎng)及品種原因,迫切需要馴化選育出產(chǎn)量高、商品性好的新品種來(lái)促進(jìn)甘孜州靈芝等食用菌產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。2012年上半年,課題組走訪菇農(nóng),發(fā)現(xiàn)了與目前市場(chǎng)上的靈芝品種不同的1種野生靈芝,菇農(nóng)俗稱為藏靈芝。調(diào)查中發(fā)現(xiàn),藏靈芝市場(chǎng)需求量大,價(jià)格是市場(chǎng)赤芝或紫芝的10倍~20倍。由于菇農(nóng)常年過(guò)度采摘,致使野生藏靈芝資源逐年減少,甚至面臨枯竭的危險(xiǎn),因此為了保護(hù)這一珍稀野生資源,在四川省食用菌創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目支持下,課題組從2012年上半年起開(kāi)始了野生藏靈芝的馴化選育工作,以期選育出高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、商品性好的藏靈芝新品種。
2012年5月8日,課題組在海螺溝景區(qū)海拔2 200 m的闊葉林下,采集到生長(zhǎng)在青杠腐木樁上的野生藏靈芝菌株并編號(hào)。
母種培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。
原種和栽培種配方:木屑78%、麥麩20%、石膏1%、糖1%,含水量60%~65%。
采收的子實(shí)體帶回室內(nèi)攤晾,通過(guò)無(wú)菌操作,提取生長(zhǎng)點(diǎn),在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),培養(yǎng)溫度23℃~25℃,待長(zhǎng)出菌絲后分離、純化。
將純化的菌株進(jìn)行ISSR聚類分析,鑒定菌株的遺傳特異性。將分離、純化的菌株進(jìn)行出芝篩選試驗(yàn),選擇遺傳穩(wěn)定性高且具有優(yōu)良商品性的菌株。
2014年~2016年在瀘定縣田壩鄉(xiāng)上松基地和磨西新興點(diǎn)安排試驗(yàn),以川芝6號(hào)作為對(duì)照,采用靈芝短段木熟料栽培方法進(jìn)行栽培。供試菌株接種發(fā)菌結(jié)束后,及時(shí)覆土出芝管理,每個(gè)菌株設(shè)為1個(gè)處理,3次重復(fù),每個(gè)重復(fù)200 kg(段木截段裝袋處理)。每袋約2 kg,每小區(qū)100袋,面積6 m2。
2015年~2016年在瀘定縣田壩鄉(xiāng)上松基地進(jìn)行試驗(yàn),以川芝6號(hào)作為對(duì)照,采用靈芝短段木袋裝熟料栽培方法進(jìn)行栽培。供試菌株接種發(fā)菌結(jié)束后,及時(shí)覆土出芝管理,每個(gè)菌株設(shè)為1個(gè)處理,3次重復(fù),每個(gè)重復(fù)2 000 kg(段木截段裝袋處理)。每袋約2 kg,每小區(qū)1 000袋,面積60 m2。
2013年將分離獲得的3個(gè)菌株在袋料上接種,進(jìn)行初篩試驗(yàn),通過(guò)觀測(cè)記錄其朵型、產(chǎn)量等指標(biāo),最后篩選出優(yōu)良菌株G31,暫定為“康定靈芝”。該菌株菌絲體無(wú)色、透明,薄壁,有隔,直徑2 μm~5 μm,具分枝和鎖狀聯(lián)合。在PDA培養(yǎng)基上菌絲呈白色絨毛狀,纖細(xì)、整齊,菌落表面形成淡黃色韌性菌膜,子實(shí)體形成的菌蓋為腎形或半圓形,菌蓋大小為 (7~9) cm× (5~18) cm,厚 1.5 cm~2.8 cm。菌蓋表面有同心環(huán)紋和放射性條紋,菌肉為白色,有特殊香味,味微苦;菌柄長(zhǎng)11 cm~15 cm,直徑2 cm~3 cm,組織緊密??刀`芝特征性狀詳見(jiàn)圖1、圖2。
圖1 康定靈芝子實(shí)體
圖2 康定靈芝菌落特征
經(jīng)廣東省微生物分析檢測(cè)中心對(duì)康定靈芝馴化栽培樣品進(jìn)行分子學(xué)鑒定,確認(rèn)篩選出的康定靈芝菌株為白肉靈芝[2](Ganoderma leucocontextumT.H.Li,W.Q.Deng,Dong M.Wang&H.P.Hu)。
康靈芝1號(hào)標(biāo)本經(jīng)四川省中醫(yī)藥科學(xué)院檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示,總灰分含量為3.42%,水溶性浸出物含量為6.94%,多糖含量為1.16%,三萜和甾醇成分含量為0.89%,經(jīng)與《中國(guó)藥典》2015版對(duì)比,這四類成分分別比赤芝或紫芝增加6.9%、131.3%、28.9%、78%。
2.4.1 區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果
康定靈芝的區(qū)域試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果見(jiàn)表1和表2。
表1 2014年~2015年度康定靈芝與對(duì)照產(chǎn)量結(jié)果比較
表2 2015年~2016年度康定靈芝與對(duì)照產(chǎn)量結(jié)果比較
由表1和表2可以看出,不同點(diǎn)區(qū)域試驗(yàn)結(jié)果趨向一致,平均每100千克菌材干芝單產(chǎn)達(dá)4.36kg,與川芝6號(hào)(CK) 相比增產(chǎn)差異明顯,增產(chǎn)幅度達(dá)13.1%。
2.4.2 生產(chǎn)試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果
康定靈芝的生產(chǎn)試驗(yàn)產(chǎn)量結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 康定靈芝生產(chǎn)試驗(yàn)與對(duì)照產(chǎn)量結(jié)果比較
由表3可以看出,每100千克菌材康定靈芝菌株單產(chǎn)達(dá)4.04 kg,比菌株川芝6號(hào)(CK) 平均增產(chǎn)10.7%,增產(chǎn)效果顯著。
康定靈芝的主要農(nóng)藝性狀比較結(jié)果見(jiàn)表4。
由表4可以看出,康定靈芝與川芝6號(hào)(CK)相比,新鮮的康定靈芝子實(shí)體個(gè)體較大,出芝整齊,形態(tài)美觀,朵型為腎形或半圓形,菌肉白色,有特殊香味,味微苦,發(fā)菌期153 d左右,每100千克菌材生產(chǎn)干芝4.04 kg,孢子粉彈射較強(qiáng)。
表4 康定靈芝與CK的主要形態(tài)特征及農(nóng)藝性狀比較
適宜種植區(qū)域?yàn)榇ㄎ鞲咴?,海? 500 m~2 500 m。栽培原料的主料為殼斗科櫟屬青杠段木,輔料為麥麩。大田覆土栽培。出芝期間溫度控制在18℃~30℃,空氣相對(duì)濕度85%~90%,光照強(qiáng)度1 000 lx~15 000 lx,通風(fēng)良好,保持空氣清新。瀘定縣自然條件下接種時(shí)間適宜安排在11月~12月,下地覆土出芝時(shí)間為次年4月下旬。
康定靈芝屬于白肉靈芝,該菌株子實(shí)體為腎形或半圓形,菌蓋表面具同心環(huán)紋和放射性條紋,幼嫩子實(shí)體有漆樣光澤,成熟子實(shí)體皺褶,黃褐色,菌肉白色,有特殊香味,味微苦,組織緊密。其菌絲體生長(zhǎng)溫度8℃~34℃,最適生長(zhǎng)溫度22℃~25℃;子實(shí)體形成和發(fā)育溫度18℃~30℃,最適溫度23℃~25℃,發(fā)菌期153 d左右。多點(diǎn)試驗(yàn)結(jié)果表明,該菌株出芝整齊、農(nóng)藝性狀穩(wěn)定,每100千克菌材干芝單產(chǎn)達(dá)4.04 kg,比對(duì)照菌株川芝 6號(hào)增產(chǎn)10.7%。同時(shí),其功能成分含量較高,是不同于現(xiàn)有栽培品種的靈芝新菌株。2016年12月31日獲得四川省農(nóng)作物品審委品種審定證書(shū),定名康定靈芝,品種審定編號(hào)為川審菌2016002。