外周血維生素D3在原發(fā)性干燥綜合征患者中的表達(dá)及與病情程度的關(guān)系①

劉鑫穎 房 成 張 勇

(唐山市工人醫(yī)院檢驗(yàn)科，唐山063000)

原發(fā)性干燥綜合征是一種自身免疫性疾病，發(fā)病機(jī)制尚不明確，但基礎(chǔ)研究認(rèn)為，遺傳、免疫、病毒感染等均可引發(fā)其發(fā)病[1]。臨床表現(xiàn)為腮腺、頜下腺腫大疼痛且反復(fù)發(fā)作，吞咽困難，眼睛感覺(jué)異物且淚少，視力出現(xiàn)下降，全身乏力，皮膚感到瘙癢等，還可累及外分泌腺[2,3]。發(fā)病人群多為30歲以上或絕經(jīng)期后的女性，老年發(fā)病率更高，隨著時(shí)間的變化，其發(fā)病率也逐年增長(zhǎng)[4]。25(OH)D3屬于脂溶性維生素，對(duì)免疫功能以及鈣磷代謝均具有調(diào)節(jié)作用[5]。臨床認(rèn)為，外周25(OH)D3和自身免疫性疾病之間具有密切的關(guān)系[6]。本研究旨在探討25(OH)D3在原發(fā)性干燥綜合征患者中的表達(dá)及與病情程度的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集我院就診的98例患者。均符合原發(fā)性干燥綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]：口鼻干，視力下降感覺(jué)有異物，腮腺、頜下腺腫大疼痛且反復(fù)發(fā)作，口鼻干燥、全身乏力等。納入肝腎肺功能無(wú)異常者；無(wú)結(jié)核病、肝炎等傳染疾?。慌浜涎芯空?；無(wú)器質(zhì)性疾?。慌懦焉锲趮D女；近期頭面部接受過(guò)放療；患有精神疾?。唤谑褂眠^(guò)乙酰膽堿藥物；本研究家屬及患者均簽署知情同意書(shū)，且經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)許可，將其分為pSS穩(wěn)定期組和pSS活動(dòng)期組。pSS穩(wěn)定期患者49例，男21例，女26例，年齡40～60歲，平均(50.28±5.03)歲；pSS活動(dòng)期49例，男23例，女26例，年齡41～60歲，平均(50.73±4.97)歲；同期選擇98例在我院體檢的健康志愿者作為對(duì)照組進(jìn)行研究，男50例，女48例，年齡40～60歲，平均(49.08±5.12)歲。比較三組性別等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，存在可比性，見(jiàn)表1。

1.2方法

1.2.1外周血標(biāo)本及血清采集方法 空腹采集患者外周靜脈抗凝血，加入淋巴細(xì)胞分離液(生產(chǎn)廠(chǎng)家：天津?yàn)驦DS1075)，密度梯度離心后并取單個(gè)核細(xì)胞。用PBS重懸PBMC后分裝至流式細(xì)胞管，650 g離心7 min，5 ml血一共可留取1～2 ml血漿,以盡量不吸取到紅細(xì)胞為原則，注意無(wú)菌操作，巴斯管不能伸進(jìn)EP管。吸取的血漿離心3 000 r/min，10 min，吸取上清。將血漿樣本用0.5 ml EP管分裝凍存，放入-80℃冰箱凍存，待所有樣本收集齊后，統(tǒng)一復(fù)蘇細(xì)胞，進(jìn)行抗體染色，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)(儀器型號(hào)：美國(guó)BD LSRⅡ)。

1.2.2血清采集及檢測(cè) 空腹采集患者外周靜脈血，以3 000 r/min離心10 min，取血清待檢測(cè)。按電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定IL-6、IL-10、IL-17，試劑盒：海南利能康泰制藥有限公司；按免疫比濁法檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor α，TNF-α)、試劑盒：廣東聯(lián)康藥業(yè)有限公司。采用ELISA(上海哈靈生物科技有限公司)檢測(cè)外周血25(OH)D3的水平。

GroupsSex(male/female)Age(year)Clinical manifestationFeverSwelling of parotid glandVasculitisLung involvementRenal lesionControl group50/4849.08±5.12/////pSS stable period21/2850.28±5.0314(28.57)20(40.81)17(34.69)10(20.40)9(18.36)pSS activity period23/2650.73±4.9712(24.48)18(36.73)19(38.77)11(22.44)10(20.40)

GroupsB lymphocyte indexCD27highCD27+T lymphocyte index(μg/L)TNF-αIL-6IL-10IL-17Control group1.80±0.2033.92±3.1969.03±11.0740.02±9.4296.89±10.3745.92±9.01pSS group0.87±0.2321.75±4.32135.89±15.8398.52±20.1746.16±17.0589.36±16.26

GroupsB lymphocyte indexCD27highCD27+ T lymphocyte index(μg/L)TNF-αIL-6IL-10IL-17pSS activity period0.70±0.1017.04±1.90205.86±28.98114.02±20.7331.92±8.09101.86±15.97pSS stable period1.23±0.3025.10±2.80124.57±16.0481.98±7.4060.86±6.1876.39±4.53

表4三組25(OH)D3水平對(duì)比

Tab.4Comparisonof25(OH)D3levelinthreegroups

GroupsnVitamin D3(pg/ml)Control group9841.64±5.59pSS active group7022.45±3.27pSS stable period4939.03±3.21

1.2.3觀(guān)察指標(biāo) 觀(guān)察pSS組和對(duì)照組B淋巴細(xì)胞指標(biāo)、T淋巴細(xì)胞指標(biāo)對(duì)比，pSS活動(dòng)期組和pSS穩(wěn)定期組B淋巴細(xì)胞指標(biāo)、T淋巴細(xì)胞指標(biāo)對(duì)比。

2 結(jié)果

2.1pSS組和對(duì)照組免疫功能指標(biāo)對(duì)比 在B淋巴細(xì)胞中，pSS組CD27high漿細(xì)胞、CD27+記憶性B細(xì)胞顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，在T淋巴細(xì)胞指標(biāo)中，pSS組TNF-α、IL-6、IL-17水平顯著高于對(duì)照組，IL-10水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.2pSS活動(dòng)期組和pSS穩(wěn)定期組免疫功能指標(biāo)對(duì)比 在B淋巴細(xì)胞中，pSS活動(dòng)期組CD27high漿細(xì)胞、CD27+記憶性B細(xì)胞顯著低于pSS穩(wěn)定期組(P<0.05)，在T淋巴細(xì)胞指標(biāo)中，pSS活動(dòng)期組TNF-α、IL-6、IL-17水平顯著高于pSS穩(wěn)定期組，IL-10水平顯著低于pSS穩(wěn)定期組(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.3三組25(OH)D3水平對(duì)比 活動(dòng)組25(OH)D3水平低于穩(wěn)定期組和對(duì)照組(P<005),但穩(wěn)定期組與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

3 討論

原發(fā)性干燥綜合征可累及全身各個(gè)系統(tǒng)，由于目前其發(fā)病機(jī)制尚不明確，因此，多種免疫細(xì)胞異?；罨恼{(diào)節(jié)機(jī)制尚處于未知狀態(tài)[8]。原發(fā)性干燥綜合征最常見(jiàn)的受累靶器官為唾液腺和淚腺，從而使患者全身出現(xiàn)一系列臨床癥狀，還可引起肺腎臟病變，出現(xiàn)低鉀血癥和腎小管酸中毒[9]。

25(OH)D3具有生物學(xué)活性，是25(OH)D3的代謝產(chǎn)物[10]。維生素D具有調(diào)節(jié)免疫以及鈣磷代謝的作用，與維生素D受體結(jié)合后，還可合成及分泌相關(guān)細(xì)胞因子，激活淋巴細(xì)胞，調(diào)節(jié)抗原遞呈細(xì)胞分化[11,12]。且以往大量研究證實(shí)，若維生素D攝入不足或減少時(shí)，可使T淋巴細(xì)胞亞群以及B淋巴細(xì)胞功能出現(xiàn)異常，從而導(dǎo)致免疫機(jī)制出現(xiàn)障礙[13]。本研究顯示，原發(fā)性干燥綜合征患者的25(OH)D3含量與正常人存在顯著差異，而原發(fā)性干燥綜合征活動(dòng)期患者的25(OH)D3含量明顯低于穩(wěn)定期患者。提示了25(OH)D3與原發(fā)性干燥綜合征之間存在一定的聯(lián)系，且其含量與病情程度之間呈負(fù)相關(guān)，但本次研究例數(shù)較少，還需大樣本研究證明。原發(fā)性干燥綜合征病發(fā)后最關(guān)鍵的病理環(huán)節(jié)是T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞[14]。國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為[15]，B淋巴細(xì)胞可導(dǎo)致靶腺體功能損傷，其指標(biāo)CD27high漿細(xì)胞、CD27+記憶性B細(xì)胞向靶腺體進(jìn)行遷移并浸潤(rùn)，出現(xiàn)含量異常降低的情況。在T淋巴細(xì)胞中，可使局部浸潤(rùn)從而產(chǎn)生多種炎癥因子參與疾病，促進(jìn)靶腺體功能損傷[16]。TNF-α、IL-6、IL-17是臨床上常見(jiàn)的炎癥因子，由免疫細(xì)胞合成及分泌，具有一定的促炎作用，可促進(jìn)病情的發(fā)展。IL-10是一種多功能細(xì)胞因子，由Th1細(xì)胞分化，可對(duì)細(xì)胞的生化及分化進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)，具有促進(jìn)嗜酸粒細(xì)胞凋亡的作用。T細(xì)胞活化后在靶腺體內(nèi)受到浸潤(rùn)后會(huì)使TNF-α、IL-6、IL-17、IL-10含量出現(xiàn)改變[17]。在本研究中，CD27+記憶性B細(xì)胞顯著低于正常人，且活動(dòng)期患者較穩(wěn)定期患者低；TNF-α、IL-6、IL-17含量顯著高于正常人，且活動(dòng)期患者較穩(wěn)定期患者高，IL-10含量低于正常人，活動(dòng)期患者較穩(wěn)定期患者低。說(shuō)明了該病可使機(jī)體免疫功能出現(xiàn)紊亂，加速病情發(fā)展。

國(guó)外研究表明，當(dāng)25(OH)D3不足時(shí)，Th1和Th17細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)異?；罨?，Th2免疫功能會(huì)出現(xiàn)減弱[18]，而B(niǎo)淋巴細(xì)胞出現(xiàn)異常成熟，從而對(duì)患者的靶器官功能造成損傷。臨床認(rèn)為，25(OH)D3具有抑制T淋巴細(xì)胞活化以及B淋巴細(xì)胞成熟的作用[19]。其可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)與分化，與維生素D受體結(jié)合激活后，能夠增強(qiáng)免疫活性，可減少對(duì)腺體功能的損傷[20]。

綜上所述，原發(fā)性干燥綜合征患者外周血25(OH)D3水平顯著低于正常人，25(OH)D3的不足可使T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及活化，造成腺體功能損傷，與原發(fā)性干燥綜合征的病情程度以及免疫功能之間存在密切的關(guān)系。