應(yīng)用超純水代替蒸餾水配制綿羊精液葡卵檸稀釋液的試驗

連曉春，蔣烈戈

（1.新疆兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆兵團(tuán)第九師畜牧科學(xué)研究所，新疆 額敏 834601）

超純水是應(yīng)用預(yù)處理、電滲析、紫外線殺菌、反滲透、離子交換、超濾和各種膜過濾等技術(shù)，將水中的導(dǎo)電介質(zhì)幾乎完全去除，同時將水中不離解的膠體物質(zhì)、氣體及有機物均去除至很低程度的水。超純水的電阻率大于18 MΩ.cm,這種水中除了水分子(H2O)外，幾乎沒有什么雜質(zhì)。隨著超純水生產(chǎn)技術(shù)的提高，它被應(yīng)用到電子、實驗室、食品、等領(lǐng)域。蒸餾水是指用蒸餾方法制備的純水，可分一次和多次蒸餾水，通過蒸餾，一次蒸餾可將不揮發(fā)的礦物質(zhì)鹽類除去。我們在配制綿羊人工授精稀釋液時運用一次蒸餾水，利用的就是蒸餾水無電解質(zhì)，無游離離子。目前的蒸餾水機多為在環(huán)型冷卻管結(jié)構(gòu)，靠水流量冷卻，大都存在結(jié)構(gòu)落后、浪費水資源、能耗高（4～20 KW）、生產(chǎn)效率低（5～20 L/H）、手動，需專人看管，易干燒，易結(jié)垢，難清洗，運行成本高，易中斷使用等缺陷，而超純水機隨用隨取,造水及時，生產(chǎn)時一鍵式操作，全自動制水，安全、可靠，無需專人值守，出水率高（1～100 L/H），超純水機的功率在50～200 W，能耗大大降低，超純水機還具有自動清洗功能，便于維護(hù)，運行成本低。針對當(dāng)今社會提倡環(huán)保、節(jié)能、減排的基礎(chǔ)上，提倡使用超純水替代蒸餾水。

傳統(tǒng)綿羊精液葡卵檸稀釋液用蒸餾水制作，基層綿羊配種站在配制葡卵檸稀釋液時，蒸餾水多在上級單位購買，而目前縣級以上家畜品種改良站多已配備了超純水機，蒸餾水的使用量越來越少，蒸餾水機已逐步淘汰。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)，在家禽中的雞[1]、家畜中的豬[2]、牛[3]等畜禽均使用傳統(tǒng)的稀釋液，劉威、孫計富在羊的人工授精技術(shù)研究進(jìn)展中提出，要繼續(xù)積極推廣改進(jìn)人工授精操作技術(shù)[4]，應(yīng)開展稀釋液改良方面的研究。也有人使用注射用水[5]，基本沒有大的差異。因此本次實驗旨在探討應(yīng)用超純水替代蒸餾水制作綿羊精液葡卵檸稀釋液，以簡化稀釋液配制程序，加快綿羊品種改良推廣工作進(jìn)程。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

本次實驗于2016年11月10日-12月5日在新疆兵團(tuán)第九師161團(tuán)育種站進(jìn)行，試驗?zāi)秆驗轶w重45～50 kg的成年經(jīng)產(chǎn)母羊，2017年4月1日-5月10日統(tǒng)計產(chǎn)羔結(jié)果。

1.2 試驗器材

1.2.1 超純水

采用美國熱電公司BARNSTEAD TⅡ型超純水機制作，它通過反滲透單元將自來水轉(zhuǎn)化為RO純水的水質(zhì)，接近于國標(biāo)實驗室三級用水標(biāo)準(zhǔn)與一次蒸餾水，故沖洗器皿等一般實驗室分析用水均可使用。

1.2.2 蒸餾水

采用蘇州江東精密儀器YAZD-5型蒸餾水機制作，功率4.5 KW，每小時出水量5 L。

1.2.3 稀釋液的配制

用分析天平（精度0.001 g）稱取葡萄糖3.0 g，檸檬梭鈉1.4 g，用量桶量取蒸餾水或超純水100 mL，卵黃20 mL，按葡萄糖－卵黃－檸檬梭鈉稀釋液配制要求，進(jìn)行配制。

1.3 試驗設(shè)計

1.3.1 精液采集

采用161團(tuán)育種站飼養(yǎng)的德國美利奴、薩?？朔N公羊進(jìn)行采精，種公羊要求：體質(zhì)外貌達(dá)到品種要求，達(dá)到中等以上種用體況，并有旺盛的性欲，精液品質(zhì)優(yōu)良。將采取的精液在300-600倍的顯微鏡下進(jìn)行鏡檢，外觀正常、密度中等以上、活力在0.8以上的精液方可進(jìn)行稀釋處理。

綜上所述，建筑工程管理專業(yè)教育是向社會輸送高素質(zhì)建筑管理人才的重要渠道，近些年來，建筑行業(yè)的迅猛發(fā)展帶動了我國建筑工程管理專業(yè)的發(fā)展，同時也使得其中存在的一些問題逐漸突顯出來。對此，我國各高校應(yīng)該積極吸收國外辦學(xué)經(jīng)驗，結(jié)合自身優(yōu)勢做好專業(yè)建設(shè)，為我國建筑行業(yè)發(fā)展提供更強的推動力。

1.3.2 精液稀釋

將收集的精液一分為二，按精液稀釋要求，分別用蒸餾水與超純水制作的稀釋液進(jìn)行2倍稀釋。

1.3.3 密度檢查

稀釋后用紅細(xì)胞計數(shù)法對精液進(jìn)行密度檢查，計算單位輸精量（0.1 mL）內(nèi)的有效精子數(shù)，鏡檢合格的稀釋精液每份留下0.5 mL左右，其余的送去輸精，間隔2 h、4 h，再次對置于常溫環(huán)境（25℃左右）下稀釋精液進(jìn)行密度檢查。

1.3.4 輸精

按綿羊人工授精程序，對輸精用具消毒后，進(jìn)行輸精，輸精部位：子宮頸內(nèi)0.5～1.0 cm處，輸精量0.1 mL，輸完精后對精液進(jìn)行回檢;間隔8～10 h進(jìn)行第二次輸精。

輸精時，對母羊進(jìn)行標(biāo)記，記錄。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 精子密度

用血細(xì)胞計數(shù)板進(jìn)行。先用紅細(xì)胞稀釋管吸取稀釋精液到0.5刻度處，用紗布擦去吸管頭沾附的精液，再吸取3%的氯化鈉溶液到刻度101處，用拇指和中指按住吸管的兩端，搖勻，使氯化鈉溶液與稀釋精液充分混勻，這樣將稀釋精液再次稀釋到200倍，吹掉管內(nèi)最初的幾滴液體，然后將吸管尖放在計算板中部的邊緣處，輕輕滴入一小滴，讓其自然流入計算室內(nèi)，這時在600倍顯微鏡下計算精子，計數(shù)5大方格精子總數(shù)乘以1千萬即為稀釋后1 mL稀釋精液的精子數(shù)[6]。每個樣本，至少要重復(fù)檢查兩次，取其平均值，若兩次結(jié)果偏差在10%以上，則需做第三次，取第三次結(jié)果與前兩次中與第三次結(jié)果相近的一次的平均值，作為最后結(jié)果。

1.4.2 返情率

發(fā)情配種后，間隔17～18 d，統(tǒng)計已配羊只的返情情況，計算試驗組與對照組的返情率[7]。返情率%＝已配母羊返情羊只數(shù)/參配母羊數(shù)×100%。

1.4.3 受胎率

間隔145～155 d，統(tǒng)計試驗組與對照組綿羊產(chǎn)羔情況，計算受胎率[8]。其中產(chǎn)羔母羊數(shù)包括流產(chǎn)母羊數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

以稀釋后0、2、4 h的精液密度、第一情期受胎率、受胎率參數(shù)為檢驗對象，進(jìn)行差異顯著性檢驗。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 精子密度

稀釋工作完成后，分稀釋后、2 h、4 h用血細(xì)胞計數(shù)法統(tǒng)計精液中的精子數(shù)，精液稀釋2 h內(nèi)后，通過顯著性檢驗（P＜0.05），試驗處理對結(jié)果沒有影響或無效,蒸餾水組與超純水組之間沒有較為明顯的差異，均能達(dá)到綿羊人工授精精子數(shù)要求。由于配種工作在新疆兵團(tuán)第九師161團(tuán)冬牧場進(jìn)行，在11月份，這里外界氣溫已達(dá)零下15℃左右，因此室內(nèi)溫度也極難控制，稀釋后4 h，此時精子數(shù)量也明顯降低，這與精液品質(zhì)、稀釋液無關(guān)，此時兩種稀釋液稀釋出的精子數(shù)也沒有大的差異，見表1。

表1 精子密度億

2.2 返情率

與配母羊標(biāo)記后，同群放牧，間隔18 d后，統(tǒng)計返情羊數(shù)，再次進(jìn)行人工授精，蒸餾水組與超純水組返情羊數(shù)分別只數(shù)為48只、46只，占總試驗羊數(shù)的16.8%、17.2%，二者沒有明顯的差異，見表2。

表2 返情率統(tǒng)計只、%

2.3 受胎率

2015年4月1日至5月15日，登記標(biāo)記母羊產(chǎn)羔情況，蒸餾水組產(chǎn)羔母羊數(shù)265只，超純水組產(chǎn)羔母羊數(shù)249只（二者均包括流產(chǎn)母羊），母羊總受胎率達(dá)到了93%、93.3%，二者之間沒有大的差異，見表3。

表3 受胎率統(tǒng)計表只、%

3 討 論

稀釋前后的精液密度用紅細(xì)胞計數(shù)法計算，最小相差0.02億，為總數(shù)的0.28%，最大相差0.23億，在稀釋后、稀釋后2 h、稀釋后4 h，這幾個階段來看，無較大的偏差。

綿羊的鮮精人工授精技術(shù)由多個因素影響[9，10]，在基層，最容易觀測、使用的方法是對綿羊返情率和受胎率的記錄[11]，這種方法操作簡單。使用超純水代替蒸餾水配置綿羊人工授精稀釋液，通過我們記錄的552只母羊的對比，超純水組返情率17.2%，傳統(tǒng)蒸餾水組16.8%，二者相差0.04%，超純水組母羊總受胎率達(dá)到了93.3%、傳統(tǒng)蒸餾水組93%，這兩個指標(biāo)之間均沒有大的差異，對綿羊總體受胎率沒有影響。

4 結(jié) 論

影響綿羊人工授精稀釋液品質(zhì)的因素很多，使用蒸餾水，主要因素是考慮稀釋液與精液為等滲溶液，低滲溶液或高滲溶液都會因滲透壓的緣故造成精子死亡，超純水與蒸餾水相比，均為無電解質(zhì)，無游離離子，故均能達(dá)到稀釋液配制要求。使用超純水相比蒸餾水而言，具有隨用隨取,造水及時，生產(chǎn)時一鍵式操作，全自動制水，安全、可靠，無需專人值守，出水率高（10～100 L/H），能耗低，可自動清洗，便于維護(hù)，運行成本低的特點，因此使用超純水制作綿羊人工授精精液稀釋液，可簡化稀釋液配制程序，加快綿羊品種改良推廣工作進(jìn)程，值得推廣。