右旋雷貝拉唑鈉對大鼠消化性潰瘍的藥效研究

林曉冬，劉 娜，劉 純，鄭曉霞，房紹英，程艷玲，郭秀麗

（1. 山東大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250001；2. 山東省藥學(xué)科學(xué)院 新藥評價中心，山東 濟(jì)南 250101）

消化性潰瘍?。╬eptic ulcer disease ，PUD）主要發(fā)生于胃和十二指腸，是由胃酸、胃蛋白酶自身消化所致的黏膜局限性組織缺損、炎癥與壞死性病變，深達(dá)黏膜肌層[1]。公認(rèn)的PUD的發(fā)病機(jī)制有：幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染、胃酸及胃蛋白酶等損傷因子和黏膜自身保護(hù)能力的降低[2-3]。

右旋雷貝拉唑[dexrabeprazole，R-(+)-rabeprazole]是新型苯并咪唑類質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI），通過抑制胃酸分泌的限速酶H+, K+-ATP酶（H+, K+-ATPase）起到抑制胃酸的作用。右旋雷貝拉唑是雷貝拉唑旋光異構(gòu)體的右旋體，雷貝拉唑本身具有受肝臟CYP2C19 基因多態(tài)性的影響小、H+, K+-ATP酶亞基結(jié)合位點(diǎn)多等優(yōu)勢[4]。與其他已上市的PPI單一旋光異構(gòu)體埃索拉唑、右旋蘭索拉唑、左旋泮托拉唑相比，右旋雷貝拉唑具有個體差異小、起效更快、藥效持久等優(yōu)勢[5]。因此右旋雷貝拉唑有可能成為治療PUD的首選藥物之一。

已有研究表明，右旋雷貝拉唑鈉對胃食管反流病、非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍有顯著的抑制作用，是主要藥效活性成分[6-7]。我們采用大鼠潰瘍模型對右旋雷貝拉唑鈉、左旋雷貝拉唑鈉及消旋雷貝拉唑鈉治療消化性潰瘍的作用進(jìn)行了對比研究，為右旋雷貝拉唑鈉相關(guān)臨床研究和開發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AY220型電子分析天平（日本島津公司）；YP3001N型電子天平，JY1002型電子天平（上海精密科學(xué)儀器公司）。

1.2 藥物和試劑

注射用右旋雷貝拉唑鈉（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：130403）；注射用左旋雷貝拉唑鈉（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：20130401），注射用雷貝拉唑鈉（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號120101）。0.9 %氯化鈉注射液（辰欣藥業(yè)，批號1212055301）；冰乙酸（天津廣成，批號20120409）；戊巴比妥鈉（德國默克公司，批號100808）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物和環(huán)境設(shè)施

SPF級CD（SD）大鼠210 只，雌雄各半，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供。飼養(yǎng)環(huán)境：SPF級，室溫20～25 ℃，日溫差≤3 ℃，換氣次數(shù)10～20次/h，濕度40 %～70 %，壓強(qiáng)梯度20～50 Pa，晝夜明暗交替照明12 h/12 h。

2 方法

2.1 大鼠胃酸分泌功能

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，按性別、體重隨機(jī)分為7組，即右旋雷貝拉唑鈉0.9，1.8，3.6 mg/kg組，左旋雷貝拉唑鈉對照組，雷貝拉唑鈉對照組，模型對照組，假手術(shù)組，每組10只，雌雄各5只。

造模前各組大鼠經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)的藥物溶液1次（5 ml/kg），模型對照組和假手術(shù)組同法給予生理鹽水。給藥完畢1 h后，各組大鼠以1 %戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，將動物仰臥固定，腹部手術(shù)區(qū)碘伏消毒，醫(yī)用酒精脫碘。取腹部劍突下正中切口，鈍頭鑷子將胃引出腹腔，避開血管，在幽門和十二指腸的交界處穿線將幽門結(jié)扎。將胃放回原位，縫合腹壁切口，碘伏消毒。術(shù)后將動物放回飼養(yǎng)籠，禁食禁水5 h后，麻醉處死大鼠，摘取全胃，收集胃液，3000 r/min離心20 min。取全部上清，量其體積，酸堿滴定法測定胃總酸含量，計算胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率[8-9]。

2.2 大鼠幽門結(jié)扎型胃潰瘍

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水54 h后，分組、給藥、手術(shù)，方法同2.1項(xiàng)。術(shù)后禁食禁水18 h后，麻醉處死各組大鼠。摘取全胃，沿胃大彎剪開胃腔，以生理鹽水輕柔漂洗后，測量判定胃黏膜面潰瘍程度，計算胃潰瘍指數(shù)、胃潰瘍抑制率。

胃潰瘍指數(shù)評分采用Guth法[10]：斑點(diǎn)糜爛計1分，糜爛長度<1 mm計2分，1～2 mm計3分，2～4 mm計4分，＞4 mm計5分。寬度＞1 mm時，分值×2。胃潰瘍抑制率=（模型對照組潰瘍指數(shù)-給藥組潰瘍指數(shù)）/模型對照組潰瘍指數(shù)×100 %。

2.3 大鼠乙酸型十二指腸潰瘍

健康CD（SD）大鼠70只，禁食不禁水24 h后，分組，方法同2.1項(xiàng)。動物麻醉后，仰臥位固定于手術(shù)板，腹部手術(shù)區(qū)碘伏消毒，醫(yī)用酒精脫碘。劍突下1 cm正中切口，暴露十二指腸。將一內(nèi)徑5 mm的醫(yī)用級聚丙烯管的光滑切面緊貼十二指腸起始部漿膜面，向管內(nèi)注入70 %乙酸60 μl，30 s后移出聚丙烯管，迅速用無菌吸水棉吸去殘留的乙酸，用10 ml生理鹽水沖洗并引流后，縫合腹壁。各組大鼠經(jīng)尾靜脈注射相應(yīng)的藥物溶液（5 ml/kg），模型對照組和假手術(shù)組同法給予生理鹽水。每天給藥1 次，連續(xù)7 d。

末次給藥2 h后，麻醉處死，取出胃及十二指腸上部。從乙酸貼敷的對面縱行剖開十二指腸，以生理鹽水輕柔漂洗后，測量十二指腸潰瘍的長徑和短徑，計算十二指腸潰瘍面積、十二指腸潰瘍抑制率。十二指腸潰瘍面積=π×長徑×短徑/4[11]。十二指腸潰瘍抑制率=（模型對照組潰瘍面積-給藥組潰瘍面積）/模型對照組潰瘍面積×100 %。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件分析，以±s表示，數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，且方差齊，采用LSD檢驗(yàn)。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 胃酸總分泌量、pH值及胃酸分泌抑制率

與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃酸總分泌量均顯著減少（P<0.01），右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃液pH值顯著升高（P<0.05，P<0.01）。本試驗(yàn)條件下，假手術(shù)組個體動物胃酸分泌量過少，本測試方法不適用。右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組胃酸總分泌量、胃液pH均優(yōu)于左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃酸總分泌量、胃液pH均優(yōu)于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。胃酸分泌抑制率由高到低順序?yàn)椋河倚棕惱蜮c3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞模型對照組。具體結(jié)果見表1。

表1 右旋雷貝拉唑鈉對單純幽門結(jié)扎大鼠胃酸分泌的影響（±s，n=10）

表1 右旋雷貝拉唑鈉對單純幽門結(jié)扎大鼠胃酸分泌的影響（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型組

/mg·kg-1胃酸總分泌量/μmol·h-1pH值胃酸分泌抑制率/%假手術(shù)組 － － － －模型對照組 － 93.12±29.83 1.02±0.11 0.00右旋雷貝拉唑鈉組組別 劑量0.9 65.22±49.51 1.12±0.14 29.96 1.8 50.02±28.25** 1.17±0.16* 46.28 3.6 39.32±32.99** 1.30±0.19** 57.77 1.8 70.38±34.44 1.05±0.10 24.42雷貝拉唑鈉組 3.6 46.24±31.38** 1.24±0.21** 50.34左旋雷貝拉唑鈉組

3.2 胃潰瘍指數(shù)、胃潰瘍抑制率

幽門結(jié)扎型胃潰瘍大鼠單次尾靜脈注射給藥5 h后，與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8、3.6 mg/kg組和雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組潰瘍指數(shù)顯著降低（P<0.05，P<0.01）。右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組胃潰瘍指數(shù)、胃潰瘍抑制率均優(yōu)于左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組胃潰瘍指數(shù)、胃潰瘍抑制率均優(yōu)于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組。胃潰瘍抑制率由高到低順序?yàn)椋河倚棕惱蜮c3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞模型對照組。具體結(jié)果見表2。

表2 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠胃潰瘍的影響（±s，n=10）

表2 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠胃潰瘍的影響（±s，n=10）

注：*P<0.05，** P<0.01 vs 模型組

/mg·kg-1胃潰瘍指數(shù)胃潰瘍抑制率/%假手術(shù)組 － － －模型對照組 － 44.1±13.65 0.00右旋雷貝拉唑鈉組組別 劑量0.9 35.7±18.06 19.05 1.8 23.3±11.64* 47.17 3.6 15.6± 9.03** 64.63左旋雷貝拉唑鈉組 1.8 33.3±17.04 24.49雷貝拉唑鈉組 3.6 23.0±8.27* 47.85

3.3 十二指腸潰瘍面積、十二指腸潰瘍抑制率

乙酸型十二指腸潰瘍大鼠經(jīng)尾靜脈注射給藥7 d后，與模型組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg組、雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組的十二指腸潰瘍面積顯著降低（P<0.01）。與左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組比較，右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組十二指腸潰瘍面積顯著降低（P<0.01），十二指腸潰瘍抑制率明顯升高。右旋雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組十二指腸潰瘍指數(shù)、十二指腸潰瘍抑制率均優(yōu)于雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組。十二指腸潰瘍抑制率由高到低順序?yàn)椋河倚棕惱蜮c3.6 mg/kg組＞雷貝拉唑鈉3.6 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞右旋雷貝拉唑鈉0.9 mg/kg組＞左旋雷貝拉唑鈉1.8 mg/kg組＞模型對照組。具體結(jié)果見表3。

表3 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠十二指腸潰瘍的影響（ ±s，n=10）

表3 右旋雷貝拉唑鈉對大鼠十二指腸潰瘍的影響（ ±s，n=10）

注：** P<0.01 vs 模型組；△△P<0.01 vs 左旋雷貝拉唑鈉組

組別 劑量/mg·kg-1十二指腸潰瘍面積/mm2十二指腸潰瘍抑制率/%假手術(shù)組 － － －模型對照組 － 6.04±1.37 0.00右旋雷貝拉唑鈉組0.9 4.98±1.33 17.63 1.8 4.09±0.86**△△ 32.42 3.6 2.82±0.63** 53.34左旋雷貝拉唑鈉組 1.8 5.81±1.94 3.88雷貝拉唑鈉組 3.6 3.90±0.97** 35.51

4 討論

H+, K+-ATP酶位于胃壁黏膜層，能以大約每小時1 %的速度重新生成，每天可生成25 %，半衰期約50 h，由于H+, K+-ATP酶是胃酸分泌的限速酶，因此H+,K+-ATP酶抑制劑是目前最有效的抑制胃酸的藥物[12]。PPI是目前治療Hp感染、胃食管反流病、吻合口潰瘍、慢性胃炎和卓-艾綜合征等胃酸相關(guān)性疾病的首選藥物和重要的診斷手段[13-14]，對非甾體抗炎藥引起的胃潰瘍同樣有效[15]。

研究表明，雷貝拉唑鈉主要通過非酶途徑代謝，其異構(gòu)體的大鼠和犬體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)均無性別差異，且無構(gòu)型轉(zhuǎn)化[16-17]。不同異構(gòu)體在犬體內(nèi)血藥濃度-時間曲線存在差異[18]，其原因可能是細(xì)胞色素P450 CYP2C18、CYP2C21的基因型在不同種屬間存在差異所致[19-20]。相比左旋雷貝拉唑，CYP2C19基因多態(tài)性對右旋雷貝拉唑的影響更大[21]。右旋雷貝拉唑?qū)+, K+-ATP酶活性抑制作用強(qiáng)于左旋雷貝拉唑，且在水應(yīng)激潰瘍模型、吲哚美辛誘導(dǎo)潰瘍模型和幽門結(jié)扎模型中具有優(yōu)勢[22]。

本研究結(jié)果表明，右旋雷貝拉唑鈉1.8，3.6 mg/kg通過抑制胃酸分泌、減少胃酸總分泌量、升高胃液pH，對胃潰瘍、十二指腸潰瘍均具有抑制作用。雷貝拉唑鈉臨床已知的不良反應(yīng)有：腹瀉、頭痛、鼻炎、咽炎、惡心、腹痛、血清胃泌素水平升高等，但組織學(xué)改變不顯著，腎功能損害和輕中度肝功能損害無需調(diào)整劑量[23]。由于右旋雷貝拉唑鈉潛在臨床的不良反應(yīng)和藥物相互作用的報道較少，應(yīng)得到重視。在仿制藥臨床前藥理毒理學(xué)評價過程中，針對藥物的自身特點(diǎn)具體問題具體分析，結(jié)合藥物臨床信息進(jìn)行評估和預(yù)測同樣具有十分重要的意義[24]。