miR-218在調(diào)控肝癌發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制及其干預(yù)措施分析

胡金陵

全球范圍內(nèi)肝癌死亡患者每年的死亡數(shù)量超過(guò)100萬(wàn),因此為患者提供有效的治療干預(yù)有重要的臨床價(jià)值［1］。MicroRAs作為一種非編碼RNA, 在人體當(dāng)中廣泛分布, 研究結(jié)果提示miR-218同腫瘤發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系, 在肺癌患者、前列腺癌患者以及肝癌患者當(dāng)中呈現(xiàn)出表達(dá)下降的傾向,在癌癥發(fā)生發(fā)展環(huán)節(jié)能夠發(fā)揮抑制效果［2,3］。miR-218對(duì)于肝癌細(xì)胞增殖方面的影響研究仍然較少, 本研究分析肝癌患者miR-218表達(dá)及其同病理特征之間的關(guān)系, 給予患者針對(duì)性干預(yù), 并在此基礎(chǔ)上分析干預(yù)措施的效果, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月～2017年2月本院收治的40例肝癌患者作為研究對(duì)象, 其中男29例, 女11例；年齡26～68歲, 平均年齡(50.1±6.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；病歷資料完整；知情同意本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并精神性疾病；妊娠哺乳期女性。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 miR-218檢測(cè)方法 人肝癌細(xì)胞株HepG2在含有胎牛血清的培養(yǎng)基當(dāng)中進(jìn)行培養(yǎng), 穩(wěn)定傳代3代子后, 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。miR-218轉(zhuǎn)染使用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HepG2之后分為兩組, 實(shí)驗(yàn)組添加miR-218mimic以及培養(yǎng)液、脂質(zhì)體,對(duì)照組添加無(wú)義序列的miRNAmimic以及培養(yǎng)液、脂質(zhì)體。接種細(xì)胞到培養(yǎng)瓶中, 常溫條件下持續(xù)培養(yǎng)到細(xì)胞融合度＞60%, 更換培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。收集HepG2細(xì)胞制作單細(xì)胞懸液, 細(xì)胞密度調(diào)整為1×105/ml, 100 μl/孔的濃度接種到96孔板。左上孔當(dāng)作空白孔, 僅僅添加培養(yǎng)基而不添加細(xì)胞。每組設(shè)置6個(gè)復(fù)孔, 每孔添加10 μl的3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT)溶液, 避光條件下持續(xù)培養(yǎng)2 h,去除上清之后添加100 μl的二甲基亞砜(DMSO), 常溫條件下持續(xù)孵育30 min直到顆粒溶解。酶標(biāo)儀檢測(cè)570 nm各孔的吸光度D值, 計(jì)算各組細(xì)胞的活性, 細(xì)胞活性=實(shí)驗(yàn)組的D均值/對(duì)照組的D均值［5］。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次計(jì)算平均值。

1.2.2 干預(yù)方法 患者均口服應(yīng)用伊馬替尼治療, 200 mg/次,2次/d, 用餐時(shí)服用。在此基礎(chǔ)上加強(qiáng)配套干預(yù)。①飲食干預(yù)：合理控制飲食, 最大限度實(shí)現(xiàn)多樣化, 確保營(yíng)養(yǎng)均衡。避免單一飲食而使得患者的營(yíng)養(yǎng)缺乏, 食物需要避免過(guò)熱或者過(guò)冷, 同時(shí)要指導(dǎo)患者少食多餐, 避免高脂肪以及高熱量食物。應(yīng)當(dāng)根據(jù)患者具體條件確定飲食計(jì)劃。②疼痛干預(yù)：為了緩解患者痛感, 醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)找出疼痛的特征、具體位置以及原因, 給予個(gè)性化的干預(yù)措施。臨床上往往應(yīng)用止痛藥物緩解患者的疼痛, 不過(guò)應(yīng)當(dāng)控制用量。此外, 還可以應(yīng)用按摩或者是心理暗示等方法。③心理干預(yù)：醫(yī)務(wù)人員需要對(duì)患者提供心理疏導(dǎo), 緩解其負(fù)性情緒, 要幫助患者樹(shù)立積極治療的信心, 同家屬溝通, 以便在第一時(shí)間發(fā)現(xiàn)其情緒變化。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較患者肝癌組織以及附近組織miR-218表達(dá)水平, 并分析miR-218表達(dá)與患者病理特征之間的相關(guān)性。比較患者干預(yù)前后的SAS、SAS評(píng)分, 分?jǐn)?shù)越高焦慮、抑郁情緒越為嚴(yán)重。比較患者干預(yù)前后VAS評(píng)分,分?jǐn)?shù)越高疼痛情況越明顯。同時(shí)應(yīng)用SF-36量表評(píng)估患者干預(yù)前后生活質(zhì)量, 具體包括社會(huì)功能、軀體功能、角色功能、認(rèn)知功能, 分?jǐn)?shù)越低生活質(zhì)量越差［9］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示, 兩組比較采用t檢驗(yàn), 多組比較采用方差分析；相關(guān)性分析應(yīng)用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織及癌旁組織miR-218表達(dá)水平比較 肝癌患者肝癌組織的miR-218表達(dá)水平為(0.45±0.18)低于癌旁組織的(1.54±0.63), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。隨著與癌組織距離的縮短, 患者組織的miR-218表達(dá)水平不斷降低, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 40患者肝癌組織及癌旁組織miR-218表達(dá)水平比較( )

表1 40患者肝癌組織及癌旁組織miR-218表達(dá)水平比較( )

注：不同與癌組織距離的組織miR-218表達(dá)水平比較, P＜0.05

2.2 miR-218表達(dá)與肝癌患者病理特征的相關(guān)性分析 miR-218表達(dá)與腫瘤大小以及TNM分期存在顯著相關(guān)性(r=-0.628、-0.755, P＜0.05)。見(jiàn)表 2。

表2 miR-218表達(dá)與肝癌患者病理特征的相關(guān)性

2.3 患者干預(yù)前后SAS、SDS以及VAS評(píng)分比較 干預(yù)后,患者SAS、SDS以及VAS評(píng)分均顯著低于干預(yù)前, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

表3 干預(yù)前后40例患者SAS、SDS以及VAS評(píng)分比較( , 分)

表3 干預(yù)前后40例患者SAS、SDS以及VAS評(píng)分比較( , 分)

注：與干預(yù)前比較, aP＜0.05

?

2.4 患者干預(yù)前后生活質(zhì)量評(píng)分比較 患者干預(yù)后社會(huì)功能、軀體功能、角色功能、認(rèn)知功能評(píng)分均高于干預(yù)前, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表4。

表4 40例患者干預(yù)前后生活質(zhì)量評(píng)分比較( , 分)

表4 40例患者干預(yù)前后生活質(zhì)量評(píng)分比較( , 分)

注：與干預(yù)前比較, aP＜0.05

?

3 討論

miRNAs屬于非編碼RNAs, 借助于結(jié)合目的轉(zhuǎn)錄降低mRNA, 或者是抑制mRNA翻譯實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)的負(fù)向調(diào)節(jié)。肝癌當(dāng)中存在表達(dá)異常的一系列miRNAs, 同時(shí)大部分同細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡以及腫瘤轉(zhuǎn)移存在聯(lián)系［4］。本研究結(jié)果顯示,肝癌組織miR-218表達(dá)水平顯著低于癌旁組織, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。進(jìn)一步分析可以發(fā)現(xiàn), miR-218表達(dá)下降同腫瘤大小(＞5 cm)以及TNM高分期(Ⅲ+Ⅳ)存在密切聯(lián)系。這表明miR-218同肝癌病情的發(fā)展存在聯(lián)系［5］。人類的miR-218主要包括兩個(gè)部分的基因編碼, 也就是miR-218-1以及miR-218-2, 其中miR-218-1位于SLIT2染色體4,而miR-218-2位于SLIT3染色體［6］。

有研究人員在肝癌細(xì)胞系HepG2當(dāng)中過(guò)表達(dá)miR-218,發(fā)現(xiàn)miR-218可以有效抑制細(xì)胞增殖同時(shí)加速細(xì)胞凋亡［7］。為分析miR-218加速肝癌細(xì)胞凋亡以及肝癌細(xì)胞增殖的具體機(jī)制, 研究人員選擇依賴性激酶6(CDK6)以及Bmi-1當(dāng)作miR-218的靶蛋白展開(kāi)分析, CDK6是蛋白通道當(dāng)中的調(diào)節(jié)因子之一, 能夠調(diào)節(jié)癌蛋白活性以及p27活性, 同時(shí)調(diào)節(jié)特定細(xì)胞的分化, 對(duì)于胸腺細(xì)胞以及腫瘤發(fā)生發(fā)展都有不容忽視的重要影響［8］。miR-218借助于下調(diào)CDK6蛋白, 能夠抑制惡性腫瘤細(xì)胞的增殖, 同時(shí)加速細(xì)胞凋亡。在肝癌當(dāng)中miR-195借助于抑制CDK6表達(dá)使得G(1)/S轉(zhuǎn)換發(fā)生阻滯。其中Bmi-1可以調(diào)節(jié)細(xì)胞轉(zhuǎn)化以及細(xì)胞增殖, 并且在干細(xì)胞更新環(huán)節(jié)以及腫瘤惡化環(huán)節(jié)都有重要影響。Bmi-1作為核染色質(zhì)調(diào)控因子, miR-218可以抑制Bmi-1表達(dá)從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖［9,10］。

本研究中, 干預(yù)后, 患者SAS、SDS以及VAS評(píng)分顯著低于干預(yù)前(P＜0.05), 提示伊馬替尼干預(yù)有明顯效果。PI3K/Akt通路借助于p85發(fā)揮影響, c-Kit磷酸化之后能夠同PI3K亞基p85加以結(jié)合, 從而激活PI3K/Akt通路。對(duì)于伊馬替尼較為敏感的肝癌患者, 在應(yīng)用伊馬替尼進(jìn)行治療的過(guò)程當(dāng)中,這條通路能夠得到有效的抑制。本研究中, 患者干預(yù)后社會(huì)功能、軀體功能、角色功能、認(rèn)知功能評(píng)分均高于干預(yù)前,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述, 肝癌患者的miR-218表達(dá)顯著下降, 為靶向治療提供新的思路, 采取針對(duì)性干預(yù)措施有利于減輕疼痛情況, 改善患者生活質(zhì)量。