宣雄智，李文嘉，盧玉標(biāo)

(1.蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 蘇州 215008； 2.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002；3.廣東溢多利生物科技股份有限公司，廣東 珠海 519060)

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，水產(chǎn)飼料需求逐年增加，飼料原料價(jià)格不斷攀升。大豆、油菜等飼料原料是人類的重要食物來(lái)源[1]，為避免水產(chǎn)動(dòng)物與人競(jìng)爭(zhēng)食物，確保水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)良性可持續(xù)發(fā)展，尋找可持續(xù)的飼料原料資源已成為現(xiàn)階段水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要目標(biāo)。我國(guó)藻類資源豐富，藻類中含有豐富的碳水化合物和具有特殊活性的優(yōu)質(zhì)蛋白，用紅藻等氮替代飼料中其他蛋白質(zhì)原料的同時(shí)也會(huì)替代部分用作黏合劑的淀粉，減少配合飼料中可作為人類食物的淀粉的使用量[2]。此外，藻類尤其海洋藻類富含多種有利于動(dòng)物生長(zhǎng)的活性物質(zhì)[3]。將多種不同海藻粉以不同劑量添加到配合飼料中投喂水產(chǎn)動(dòng)物，取得了良好效果[4-5]。在大型海藻中，紅藻的粗蛋白含量高，活性物質(zhì)種類豐富，相比綠藻、褐藻等其他大型藻類，紅藻更適合作為養(yǎng)殖動(dòng)物的飼料原料[6]。龍須菜(Gracilarialemaneiformis)屬于大型紅藻的一種，在我國(guó)沿海地區(qū)廣泛養(yǎng)殖，除小部分被直接用作鮑魚(yú)飼料外，大部分用于生產(chǎn)瓊膠和卡拉膠。隨著龍須菜產(chǎn)量的日益增長(zhǎng)，其價(jià)格也隨之下降，使得龍須菜在飼料中的應(yīng)用更具可行性。

異育銀鯽(Carassiusauratusgibelio)是以興國(guó)紅鯉為父本，天然雌核發(fā)育的方正銀鯽為母本，經(jīng)人工授精和異精雌核發(fā)育而獲得的子代，其生長(zhǎng)迅速，食性廣泛，適應(yīng)能力強(qiáng)，肉質(zhì)鮮美且易于養(yǎng)殖，頗受人們歡迎[7]。

迄今為止，鮮有學(xué)者研究大型海洋紅藻替代傳統(tǒng)飼料原料對(duì)淡水魚(yú)的影響[8]。為此，本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定異育銀鯽的生長(zhǎng)、生理生化等相關(guān)指標(biāo)來(lái)研究龍須菜對(duì)異育銀鯽營(yíng)養(yǎng)生理的綜合影響，并評(píng)估其作為異育銀鯽配合飼料原料的可行性，以拓展異育銀鯽飼料原料來(lái)源。

1 材料和方法

1.1 供試飼料

本研究所用龍須菜購(gòu)自福建寧德某公司。龍須菜用海水沖凈后，置于戶外陰干(約2周)。所有飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)孔徑為250 μm篩后充分混合均勻，采用逐級(jí)擴(kuò)大的方法添加維生素和礦物質(zhì)等微量原料，加入占飼料干質(zhì)量30%的水分，拌勻后用硬顆粒擠壓機(jī)(SLP-45，中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所)制成直徑為1.5 mm的顆粒飼料，在室溫下風(fēng)干，密封于真空包裝袋中，存放于-20 ℃冰箱中待用，配制5組試驗(yàn)組飼料，分別以3%、6%、9%、12%、15%龍須菜等氮替代基礎(chǔ)飼料中的菜粕，編號(hào)為D1—D5，以不含龍須菜藻粉的飼料為對(duì)照組(表1)。

表1 飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分(干物質(zhì)) %

注：a龍須菜藻粉(干物質(zhì)):粗蛋白18.42%、粗脂肪0.51%、粗灰分 19.13%；b復(fù)合礦物質(zhì): MgSO412 g、FeSO42.5 g、CuSO40.02 g、MnSO40.15 g、ZnSO40.353 g、KIO30.003 g、CoSO40.001 g；c復(fù)合維生素:維生素A 3.6×106IU、維生素D3 1.5×106IU、維生素E 7.5×103IU、維生素K 10 g、維生素B112 g、維生素B28 g、鹽酸吡哆醇 12 g、維生素B120.2 g、煙酸 35 g、泛酸鈣 25 g、葉酸 2 g、生物素 0.1 g、維生素C 100 g。

1.2 供試魚(yú)和飼養(yǎng)試驗(yàn)

試驗(yàn)用異育銀鯽購(gòu)自珠海某種苗場(chǎng)，試驗(yàn)開(kāi)始前，先將試驗(yàn)魚(yú)在室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)(70 cm×60 cm、200 L圓柱型養(yǎng)殖缸)馴化2周，馴養(yǎng)期間投喂對(duì)照組飼料。養(yǎng)殖試驗(yàn)分為6組，每組設(shè)3個(gè)平行。試驗(yàn)開(kāi)始前，供試魚(yú)禁食24 h，選擇健康且規(guī)格基本一致的幼魚(yú)，用丁香酚(40 mg/L)麻醉，稱體質(zhì)量后放入養(yǎng)殖缸中，每缸25尾。供試魚(yú)初始體質(zhì)量為(8.21±0.12)g，試驗(yàn)期間采用微流水養(yǎng)殖，水溫為(25±2)℃，pH值7.5左右；適量連續(xù)充氣，使水體溶氧≥5 mg/L；每天清晨用虹吸法去除養(yǎng)殖缸底部的糞便。每天投喂2次(8∶30、16∶30)，采用連續(xù)性飽食投喂，具體以供試魚(yú)不再上來(lái)?yè)屖碁闇?zhǔn)，記錄投飼量，飼喂8周。

1.3 樣品收集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，供試魚(yú)禁食24 h，用40 mg/L丁香酚麻醉后逐尾稱量體質(zhì)量。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每缸隨機(jī)挑取6尾，其中3尾麻醉致死，稱重后放到鋁盒中蒸煮、搗碎、烘干(105 ℃)，然后放入-20 ℃冰箱中用于全魚(yú)成分分析。其余的魚(yú)用不加抗凝劑的注射器從尾靜脈采血， 4 ℃條件下1 500 r/min離心15 min，分離取上層淡黃色液體即為血清，離心后的血清經(jīng)液氮速凍后置于超低溫冰箱保存?zhèn)溆?。將上述抽完血的供試魚(yú)(每處理組共9尾)用于背肌、肝臟、腎臟和前腸取樣，所取樣品裝袋后經(jīng)液氮速凍保存于-80 ℃，用于試驗(yàn)后期測(cè)定各種相關(guān)酶活力。

養(yǎng)殖試驗(yàn)最后2周，以含1%的Cr2O3消化率試驗(yàn)飼料飼喂異育銀鯽，并于30 min后用虹吸管從養(yǎng)殖缸底部收集含Cr2O3的糞便，用于飼料表觀消化率的測(cè)定。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 生長(zhǎng)性能與魚(yú)體成分測(cè)定 飼料和全魚(yú)樣品的水分、粗蛋白(GB/T 6432—94)、粗脂肪(GB/T 6433—2006)、粗灰分(GB/T 6438—2007)含量均按國(guó)標(biāo)方法測(cè)定。肝臟、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活力及血清總蛋白(TP)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的測(cè)定均按照南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

計(jì)算試驗(yàn)魚(yú)的增質(zhì)量率、飼料轉(zhuǎn)化率、攝食率、成活率等指標(biāo)。計(jì)算方法如下：

增質(zhì)量率 =(Wt-W0)/W0；

飼料轉(zhuǎn)化率=(Wt-W0+Wd)/I；

攝食率=100×I/ [t×(W0+Wt)/ 2]×100%；

成活率=末尾數(shù) / 初尾數(shù)×100%；

蛋白質(zhì)效率=(Wt-W0) /(I×Cp)×100%。

式中，Wt為試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量(g)；W0為試驗(yàn)初始體質(zhì)量(g)；t為試驗(yàn)時(shí)間(d)；Wd為死亡魚(yú)體質(zhì)量(g)；Cp為飼料中粗蛋白含量；I為飼料干物質(zhì)總投喂量(g)。

肝體比、臟體比的計(jì)算公式為：肝體比=肝臟鮮質(zhì)量/魚(yú)體鮮質(zhì)量；臟體比=內(nèi)臟團(tuán)鮮質(zhì)量/魚(yú)體鮮質(zhì)量。

1.4.2 表觀消化率測(cè)定 表觀消化率的測(cè)定參照Cho等[9]的方法，以1%Cr2O3作為指示劑，對(duì)所配制的試驗(yàn)飼料組干物質(zhì)和蛋白質(zhì)的表觀消化率進(jìn)行測(cè)定。具體計(jì)算如下：表觀消化率=[1-(A0/A×B/B0)]×100%，其中，A、A0分別為飼料中和糞便中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量；B、B0分別為飼料和糞便中的Cr2O3含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016對(duì)飼料龍須菜添加量和全魚(yú)粗脂肪含量進(jìn)行二次回歸分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，再用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 攝食龍須菜對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能及飼料利用的影響

由表2和表3可知，與對(duì)照組相比，D1、D2組異育銀鯽的增質(zhì)量率分別升高8.56%(P>0.05)、6.42%(P>0.05)，飼料干物質(zhì)表觀消化率分別升高3.94%(P<0.05)、3.78% (P<0.05)，D1組異育銀鯽的飼料轉(zhuǎn)化率升高7.41%(P<0.05)，而D4、D5組異育銀鯽的粗脂肪表觀消化率分別下降2.58%(P<0.05)、2.69%(P<0.05)，增質(zhì)量率分別下降4.27%(P>0.05)、5.35%(P>0.05)，D5組異育銀鯽的粗蛋白表觀消化率和臟體比分別下降1.53%(P<0.05)和8.43%(P<0.05)，但攝食率升高3.74%(P<0.05)。

2.2 攝食龍須菜對(duì)異育銀鯽魚(yú)體組成的影響

龍須菜飼料對(duì)異育銀鯽全魚(yú)、背肌及肝臟營(yíng)養(yǎng)組分的影響見(jiàn)表4。由表4可知，D5組異育銀鯽全魚(yú)粗脂肪含量較對(duì)照組下降5.72%(P<0.05)；各組異育銀鯽肝臟粗脂肪含量基本保持穩(wěn)定，D5組試驗(yàn)魚(yú)肝臟脂肪含量最低，較對(duì)照組下降2.64%(P>0.05)。以異育銀鯽的全魚(yú)粗脂肪含量為因變量(y)，以龍須菜在飼料中的添加量作為自變量(x)的回歸方程如下所示：y=-0.002 1x2+0.002 9x+5.864 0，R2=0.975 7?；貧w方程的二次曲線開(kāi)口向下，因此無(wú)最小值，由圖1可知，隨著龍須菜添加量的進(jìn)一步增加，異育銀鯽全魚(yú)粗脂肪含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。

表2 養(yǎng)殖8周后異育銀鯽的生長(zhǎng)和飼料利用狀況

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，下同。

表3 養(yǎng)殖8周后異育銀鯽的飼料表觀消化率 %

表4 養(yǎng)殖8周后異育銀鯽的全魚(yú)、背肌和肝臟成分(鮮質(zhì)量) %

圖1 攝食龍須菜異育銀鯽全魚(yú)粗脂肪含量變化趨勢(shì)

2.3 攝食龍須菜對(duì)異育銀鯽營(yíng)養(yǎng)代謝的影響

龍須菜飼料對(duì)異育銀鯽營(yíng)養(yǎng)代謝的影響見(jiàn)表5。由表5可知，D1組異育銀鯽蛋白質(zhì)效率較對(duì)照組升高8.48%(P<0.05)，D2組異育銀鯽血清總膽固醇含量較對(duì)照組升高9.84%(P<0.05)。當(dāng)飼料中龍須菜含量大于6%時(shí)，異育銀鯽蛋白質(zhì)效率呈下降趨勢(shì)，D5組蛋白質(zhì)效率較對(duì)照組分別下降5.45%(P>0.05)。與對(duì)照組相比，D1組異育銀鯽肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高11.34%(P<0.05)，肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和全魚(yú)總蛋白含量也分別升高4.46%(P>0.05)和4.91%(P>0.05)。與對(duì)照組相比，D5組異育銀鯽血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力分別升高5.30%(P<0.05)和7.82%(P<0.05)，但血清總蛋白含量下降8.26%(P<0.05)。D4、D5組異育銀鯽甘油三酯含量較對(duì)照組分別下降18.67%(P<0.05)、11.20%(P<0.05)。

表5 養(yǎng)殖8周后異育銀鯽的營(yíng)養(yǎng)代謝相關(guān)指標(biāo)

3 結(jié)論與討論

3.1 龍須菜飼料對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)情況和體組成的影響分析

本研究中，飼料中龍須菜替代量為3%時(shí)，異育銀鯽的飼料干物質(zhì)表觀消化率和飼料轉(zhuǎn)化率顯著高于對(duì)照組，且增質(zhì)量率較對(duì)照組提高8.56%。前人研究也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象，李雅婷等[10]用1%～5%的龍須菜飼料喂養(yǎng)眼斑擬石首魚(yú)發(fā)現(xiàn)，少量添加龍須菜能一定程度上提高眼斑擬石首魚(yú)飼料效率和增質(zhì)量率，并有益于其腸道健康；劉華忠等[11]研究表明，飼料中添加2%或4%螺旋藻粉均能顯著提高彭澤鯽的生長(zhǎng)性能，降低飼料系數(shù)，提高彭澤鯽的成活率?？梢?jiàn)，飼料利用率是影響?zhàn)B殖魚(yú)類生長(zhǎng)指標(biāo)的關(guān)鍵因子。龍須菜含有藻膽蛋白和非淀粉多糖等具有益生素功能的物質(zhì)[12]，在飼料中添加3%的龍須菜藻粉可能有利于異育銀鯽對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而一定程度上促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)。

前人研究表明，在飼料中添加20%的滸苔能顯著提高梭魚(yú)的攝食量[13]；添加螺旋藻粉也能使異育銀鯽的攝食率顯著升高，但隨著藻粉添加量的增加，魚(yú)體長(zhǎng)勢(shì)卻逐漸下降[14]。本研究中，飼料中龍須菜替代量達(dá)15%時(shí)，異育銀鯽攝食率顯著高于對(duì)照組，但增質(zhì)量率卻下降5.35%，推測(cè)龍須菜可能含有一些誘食性物質(zhì)[15-16]，其所含的水溶性膳食纖維有較好的持水力[17]，可作為腸道菌群的發(fā)酵底物，產(chǎn)生酸性物質(zhì)，刺激腸黏膜，這些因素共同作用提高了龍須菜15%添加組異育銀鯽的攝食率。此外，15%龍須菜替代組異育銀鯽粗脂肪消化率和蛋白質(zhì)沉積率顯著低于對(duì)照組，這可能是該組試驗(yàn)魚(yú)增質(zhì)量率有所下降的原因。

本研究中，當(dāng)龍須菜替代量超過(guò)6%時(shí)，異育銀鯽全魚(yú)肝體比呈下降趨勢(shì)。陳明等[8]有類似發(fā)現(xiàn)，在草魚(yú)飼料中添加少量龍須菜(添加量小于5%)時(shí)，草魚(yú)肝體比升高，添加量達(dá)到5%時(shí)，肝體比顯著下降，這表明在飼料中添加龍須菜有利于抑制異育銀鯽肝臟脂肪沉積。

3.2 龍須菜飼料對(duì)異育銀鯽蛋白質(zhì)代謝的影響分析

轉(zhuǎn)氨酶在氨基酸代謝過(guò)程中起重要作用，魚(yú)體狀態(tài)良好時(shí)，肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，尤其是谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷丙轉(zhuǎn)氨酶值的升高表明氨基酸合成代謝加強(qiáng)，有利于氮在體內(nèi)的蓄積，而谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高，則表明尿素生成加快，能減輕氨基酸代謝產(chǎn)物對(duì)機(jī)體的危害[18]。本研究中，飼料中龍須菜替代量為3%時(shí)，異育銀鯽蛋白質(zhì)效率較對(duì)照組提高8.48%，可能是由于飼料中添加的少量龍須菜促進(jìn)了該組試驗(yàn)魚(yú)肝臟轉(zhuǎn)氨酶活性的升高，加快了魚(yú)體蛋白質(zhì)的代謝。當(dāng)飼料中龍須菜替代量大于6%時(shí)，異育銀鯽的蛋白質(zhì)效率呈下降趨勢(shì)，不少研究都發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中海藻粉添加量過(guò)多時(shí)會(huì)降低飼料適口性和養(yǎng)殖動(dòng)物對(duì)飼料的利用率，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)效率的下降[13,19]。

血液蛋白質(zhì)的主要作用是維持膠體滲透壓，還具有運(yùn)輸、免疫、修補(bǔ)組織和緩沖等作用。本研究中，當(dāng)龍須菜替代量超過(guò)9%后，異育銀鯽血清總蛋白呈下降趨勢(shì)，龍須菜替代量達(dá)15%時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)血清總蛋白更是顯著下降，表明該組試驗(yàn)魚(yú)組織蛋白質(zhì)保持的動(dòng)態(tài)平衡向組織蛋白沉積的負(fù)方向進(jìn)行，不利于組織器官的生長(zhǎng)[20]。一般認(rèn)為，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生病變、壞死，或肝臟有炎癥時(shí)，血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高[21]。15%龍須菜替代組異育銀鯽血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于對(duì)照組，表明該組魚(yú)肝臟可能受到了一定程度的損壞，這對(duì)魚(yú)體蛋白質(zhì)代謝也會(huì)產(chǎn)生負(fù)面影響。

3.3 龍須菜飼料對(duì)異育銀鯽脂肪代謝的影響分析

大量研究表明，在飼料中添加大型海藻或者微藻會(huì)影響水產(chǎn)動(dòng)物的體脂沉積[10-11,19,22]，本研究中，異育銀鯽全魚(yú)粗脂肪含量隨著飼料中龍須菜替代量的增加而呈下降趨勢(shì)，飼料中龍須菜替代量達(dá)15%時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)全魚(yú)粗脂肪含量顯著下降，龍須菜替代量超過(guò)12%時(shí)，試驗(yàn)魚(yú)的血脂含量和粗脂肪表觀消化率顯著下降，此前在龍須菜飼料飼喂黃鰭鯛的研究中也得出類似結(jié)果[23]，推測(cè)由于龍須菜所含的膳食纖維主要為瓊膠多糖，具有較高的黏性，能在一定程度上吸附油脂[24]，抑制了異育銀鯽對(duì)甘油三酯的吸收，且多糖類膳食纖維還可能會(huì)抑制末端腸上皮細(xì)胞的消化代謝能力[25]，進(jìn)而影響魚(yú)體脂肪代謝。陳明等[8]在飼料中添加龍須菜，導(dǎo)致草魚(yú)血清甘油三酯含量有所下降；肖美添等[26]研究發(fā)現(xiàn)，龍須菜膳食纖維能顯著降低高血脂模型小鼠血清中總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的含量。以上結(jié)果都表明，龍須菜替代量超過(guò)12%時(shí)，會(huì)對(duì)異育銀鯽脂肪代謝產(chǎn)生影響。一般認(rèn)為,海藻中的膳食纖維吸水膨脹后具有黏性，可減緩胃排空，影響膽固醇的吸收[27]，但在本研究中，龍須菜6%添加組異育銀鯽血清膽固醇含量顯著高于對(duì)照組。Gatlin[28]認(rèn)為，當(dāng)魚(yú)體處于正常狀態(tài)時(shí)，血清膽固醇含量的升高可能表明魚(yú)體抗病能力有所提高，龍須菜影響異育銀鯽血清膽固醇代謝的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上，用3%的龍須菜替代飼料中的菜粕能在一定程度上促進(jìn)異育銀鯽的生長(zhǎng)，有利于提高其對(duì)飼料蛋白的利用率。隨著飼料龍須菜替代量的增加，異育銀鯽全魚(yú)粗脂肪含量呈下降趨勢(shì)，表明龍須菜能影響魚(yú)體脂肪代謝，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究?？傮w而言，用龍須菜藻粉替代異育銀鯽飼料中的菜粕是可行的。