鄧岳紅，錢沁佳

(海南省第三人民醫(yī)院，海南三亞572000)

宮頸癌是常見的婦科腫瘤之一。宮頸癌早期患者無明顯的癥狀和體征，易造成漏診或誤診[1]。隨著宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普及，宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的早期檢出率逐漸提高，病死率明顯下降[2，3]。然而宮頸細(xì)胞學(xué)檢查因假陰性率較高而逐漸被取代。血清學(xué)檢查具有便捷、快速、靈敏度高等特點(diǎn)，受到臨床的廣泛應(yīng)用。惡性腫瘤特異性生長因子(TSGF)為廣譜腫瘤標(biāo)志物，對多種惡性腫瘤均具有較高的敏感度；鱗癌抗原(SCC)現(xiàn)已廣泛用于宮頸癌的早期診斷及預(yù)后，微小RNA-375(miR-375)在食管癌及前列腺癌等患者體內(nèi)表達(dá)降低，并有報(bào)道指出其在宮頸癌組織中表達(dá)同樣下調(diào)。目前關(guān)于三者聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷價(jià)值報(bào)道少見。本研究通過觀察宮頸癌患者血清miR-375、TSGF、SCC水平變化情況，探討其對宮頸癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年8月～2017年9月我院收治的宮頸癌患者32例(宮頸癌組)，年齡35～74(53.25±4.67)歲。根據(jù)2000版國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期19例。宮頸上皮內(nèi)瘤變患者23例(宮頸上皮內(nèi)瘤變組)，年齡28～70(50.67±7.05)歲。同期健康體檢者25例(對照組)，年齡24～68(54.37±5.58)歲。三組年齡具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 采集受試者空腹靜脈血5 mL，離心提取上清液，-80 ℃保存待測。①血清miR-375檢測：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。使用miRNA提取試劑盒提取總miRNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，用熒光定量PCR檢測試劑盒進(jìn)行檢測。采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對表達(dá)量。②血清TSGF檢測：采用光度比色法。取40 μL血清，加入試劑1 mL，吸取上清液于波長470 nm比色，全自動(dòng)生化分析儀測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。③血清SCC檢測：采用ELISA法。取200 μL血清，使用SCC ELISA試劑盒及全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀BIOBASE2000測定其含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，采用x±s表示，三組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；若不服從正態(tài)分布，則用中位數(shù)(四分位數(shù)間距)表示，三組間比較采用Kruskal-WallisH方法，組間兩兩比較采用Mann-WhitneyU比較。通過二元Logistic回歸分析計(jì)算各腫瘤標(biāo)志物診斷宮頸癌的概率預(yù)測值，以miR-375、TSGF、SCC單獨(dú)和聯(lián)合檢測的預(yù)測概率值為因變量，以診斷結(jié)果為狀態(tài)變量繪制ROC曲線，計(jì)算曲線下面積(AUC)，比較各指標(biāo)的診斷效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清miR-375、TSGF、SCC水平比較 宮頸癌組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組、對照組血清miR-375的相對表達(dá)量分別為0.31(0.21，0.58)、0.82(0.63，1.83)、1.29(1.06，1.61)，宮頸癌組低于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組，宮頸上皮內(nèi)瘤變組低于對照組(P均<0.05)。三組血清TSGF水平分別為(83.85±17.47)、(65.49±8.81)、(68.35±11.10)U/mL，宮頸癌組高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組(P均<0.05)，宮頸上皮內(nèi)瘤變組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三組血清SCC水平分別為(4.07±2.28)、(1.76±0.98)、(0.78±0.39)μg/L，宮頸癌組高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組，宮頸上皮內(nèi)瘤變組高于對照組(P均<0.05)。

2.2 血清miR-375、TSGF、SCC診斷宮頸癌的效能 見圖1。單獨(dú)診斷宮頸癌時(shí)，miR-375診斷價(jià)值最大，SCC診斷價(jià)值最小，三者聯(lián)合檢測診斷價(jià)值高于單獨(dú)指標(biāo)檢測，見表1。miR-375的敏感度、特異度、準(zhǔn)確率高于TSGF、SCC，三者聯(lián)合檢測診斷宮頸癌的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率均高于單獨(dú)指標(biāo)檢測。見表2。

圖1 miR-375、TSGF、SCC單獨(dú)和聯(lián)合檢測診斷宮頸癌的ROC曲線

表1 miR-375、TSGF、SCC單獨(dú)和聯(lián)合檢測診斷宮頸癌的AUC結(jié)果

表2 miR-375、TSGF、SCC單獨(dú)和聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷價(jià)值(%)

3 討論

宮頸癌患者在早期無特殊表現(xiàn)，隨著病情的不斷加重，發(fā)展至中晚期時(shí)，患者會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則流血等癥狀，并且對于年輕女性危害更大，因此提高宮頸癌的早期診斷率至關(guān)重要。目前診斷宮頸癌的手段多依靠宮頸刮片、陰道鏡等傳統(tǒng)檢查方式，此類方法漏診率較高；近年來，隨著對腫瘤標(biāo)志物及RNA研究的深入，有學(xué)者提出結(jié)合腫瘤標(biāo)志物及RNA診斷宮頸癌具有較高的診斷價(jià)值。

miRNA是真核生物體內(nèi)的一類非編碼小RNA分子，其長度為18～22個(gè)核苷酸，參與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡[4]。研究顯示，miR-375可結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子SP1抑制宮頸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，并且發(fā)現(xiàn)其在宮頸癌患者腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)[5～7]。Hao等[8]報(bào)道，宮頸癌Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-375表達(dá)水平低于宮頸癌Ⅰ～Ⅱ期患者，認(rèn)為miR-375不僅可作為宮頸癌的診斷標(biāo)志物，并且能在一定程度上反映病情的嚴(yán)重程度。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組血清miR-375表達(dá)低于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組，宮頸上皮內(nèi)瘤變組低于對照組。表明宮頸癌患者miR-375表達(dá)減少，腫瘤細(xì)胞受抑制作用減弱，增殖轉(zhuǎn)移的概率增大。

TSGF是惡性腫瘤生長相關(guān)的糖類物質(zhì)和代謝物等物質(zhì)的統(tǒng)稱，其特點(diǎn)是在腫瘤形成的早期濃度就已經(jīng)很高，異于其他腫瘤標(biāo)志物[9～11]。TSGF水平升高可加快腫瘤組織血管增生，促進(jìn)血管網(wǎng)形成，并參與腫瘤組織的形成、生長及擴(kuò)散[12]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組血清TSGF水平高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組，提示TSGF可作為判別宮頸癌與宮頸其他疾病的標(biāo)志物；而宮頸上皮內(nèi)瘤變組血清TSGF水平與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明TSGF為腫瘤特異性標(biāo)志物，在非癌變組織表達(dá)無明顯變化。

SCC是從鱗狀上皮細(xì)胞中分離出來的抗原物質(zhì)，參與正常和惡變時(shí)的蛋白分解調(diào)控，是子宮頸鱗癌的首選腫瘤標(biāo)志物[13]。SCC主要存在于宮頸、頭頸等鱗狀上皮細(xì)胞中，在高分化的細(xì)胞中敏感性更高[14]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組血清SCC水平高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組，宮頸上皮內(nèi)瘤變組高于對照組，表明SCC可作為區(qū)別宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變的指標(biāo)，并且其水平在惡性病變組織中表達(dá)明顯升高，早期進(jìn)行檢測可敏感、準(zhǔn)確地診斷疾病。

本研究進(jìn)一步分析了miR-375、TSGF、SCC單獨(dú)和聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷價(jià)值。結(jié)果表明，單獨(dú)指標(biāo)檢測診斷宮頸癌時(shí)，miR-375診斷價(jià)值較大，SCC診斷價(jià)值最小，聯(lián)合檢測診斷價(jià)值高于單獨(dú)指標(biāo)檢測;聯(lián)合診斷的敏感度、特異性及準(zhǔn)確率均高于單獨(dú)腫瘤標(biāo)志物檢測。

綜上所述，宮頸癌患者血清TSGF、SCC水平升高，miR-375水平降低，三者聯(lián)合檢測有助于宮頸癌的診斷。