李桂喜 ，董松嶺 ， 何永光 ，魏曼 ，梁磊

(1.商丘市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 商丘 476100；2.商丘市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，河南 商丘 476000；3.鄭州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 鄭州450007；4.商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心，河南 商丘 476100）

由于養(yǎng)雞生產(chǎn)中廣泛使用抗菌素 （飼料長(zhǎng)期低劑量添加，雛雞和青年雞預(yù)防性投藥尤為嚴(yán)重），不合理使用或?yàn)E用抗菌素，導(dǎo)致大腸艾希菌因抗菌藥物的選擇性壓力，耐藥菌得以迅速繁殖而成為優(yōu)勢(shì)菌，并引起多重耐藥和耐藥基因獲得較長(zhǎng)期存留或遺傳。產(chǎn)蛋期藥物殘留嚴(yán)重影響食品安全和人體健康，殘留藥物通過排泄物進(jìn)入土壤和地下水對(duì)生態(tài)安全造成嚴(yán)重危害。

為了臨床合理和最低限度使用抗菌藥物,2018年1月1日至6月30日對(duì)蘇魯豫皖交界某雞病門診140日齡以上、疑似患有大腸桿菌病的病死雞，進(jìn)行常規(guī)大腸艾希菌分離并選用8種藥物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)和耐藥性研究。

1 材料與方法

1.1 病料來源 疑似患有大腸桿菌病的病死蛋雞，進(jìn)行常規(guī)大腸艾希菌分離鑒定毒株。

1.2 培養(yǎng)基 鄭州人福博賽生物技術(shù)有限公司商品化MH培養(yǎng)基。

1.3 質(zhì)控菌 大腸埃希菌ATCC25922。

1.4 藥敏紙片 OXOID公司商品化藥敏紙片，選用 AMC(阿莫西林/克拉維酸)、N（新霉素）、CIP（環(huán)丙沙星）、CT（多粘菌素）、CTX（頭孢噻肟）、C（氯霉素）、SH（壯觀霉素）、K（卡那霉素）8 種藥敏紙片進(jìn)行本研究。其中氯霉素作為獸藥氟苯尼考藥敏參考，頭孢噻肟作為獸藥頭孢噻呋藥敏參考。

1.5 藥敏試驗(yàn)方法 采用CLSI標(biāo)準(zhǔn)K-B法。

1.6 藥敏結(jié)果判定 根據(jù)CLSI最新解釋標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 分離株致病性大腸艾希菌敏感結(jié)果 CT敏感率最高達(dá)86.27%，N最低敏感率僅為4.59%，由高到低排序：CT(289株/335 株，86.27%)＞SH(227株/429 株，52.91%)＞AMC(167 株/415 株，40.24%)＞CTX(108株/389株，27.76%)＞K(81株/354株，22.88%)＞CIP(76 株/395 株，19.24%)＞C(52 株/396株，13.13%)＞N(13 株/283 株，4.59%)。 結(jié)果見表 1、圖1。

圖1 不同藥物敏感（S）柱狀圖

表1 2018年上半年藥敏試驗(yàn)結(jié)果匯總表（單位：株）

2.2 分離株致病性大腸艾希菌耐藥結(jié)果 C耐藥率高達(dá)83.08%，AMC耐藥率最低為11.08%，由高到低的排序：C(329株/396株，83.08%)＞N(202株/283 株，71.38%)＞CIP(262 株/395 株，66.33%)＞CTX(228株/389株，58.61%)＞K(203株/354株，57.34%)＞SH(121 株/429 株，28.21%)＞CT(株 46/335株，13.73%)＞AMC(46 株/415 株，11.08%)。 結(jié)果見圖2。

圖2 不同藥物耐藥（R）柱狀圖

2.3 0 mm藥敏值結(jié)果 C對(duì)78.28%菌株無任何作用，只有2株對(duì)CT的藥敏值是0mm，由高到底的排序 ：C(310株/396株，78.28%)＞K(203株/354株，57.34%)＞CIP(151 株/395 株，38.23%)＞CTX(109株/389 株，28.02%)＞SH(26 株/429 株，6.06%)＞N(15株/396 株，3.79%)＞AMC(8 株/415 株，1.93%)＞CT(2株/335株，0.59%)。結(jié)果圖3。

圖3 不同藥物抑菌圈直徑0mm柱狀圖

2.4 誘導(dǎo)耐藥和依賴耐藥菌株分離結(jié)果 對(duì)K、CIP和C產(chǎn)生誘導(dǎo)耐藥和依賴耐藥菌株較多，對(duì)CT產(chǎn)生最少，只有4株/335株，為1.19%。由多到少排序：K(34株/354株，9.60%)＞CIP(29株/395株，7.34%)＞C(22 株/396 株，5.56%)＞SH(15 株/429株，3.49%)＞CTX(13 株/389 株，3.34%)＞N(8 株/396株，2.02%)＞AMC＞(8 株/415 株，1.93%)＞CT(4 株/335株，1.19%)。 結(jié)果見圖 4。

圖4 依賴耐藥和誘導(dǎo)耐藥情況

2.5 多重耐藥結(jié)果 有24.72%菌株對(duì)7種藥全部耐藥，只有1株對(duì)8種藥全部敏感，1株對(duì)7種藥敏感，其余均對(duì)2種以上藥物耐藥。多重耐藥由高到低排序：7耐 (67株/271株，24.72%)＞6耐(66株/271 株，24.35%)＞5 耐 (62 株/271 株，22.88%)＞4耐 (25株/271株，9.23%)＞3耐 (21株/271株，7.75%)＞8耐(15株/271株，5.54%)＞2耐(13株/271株，%)＞1耐=0耐(1株/271株，0.37%)。 結(jié)果見圖5、表 2。

圖5 多重耐藥餅狀圖

表2 多重耐藥匯總表

綜合以上結(jié)果，C的耐藥率、0mm藥敏值居于首位；N、CIP耐藥率分別居于第二和第三；CT敏感率最高，0mm藥敏值、耐藥率、誘導(dǎo)耐藥和依賴耐藥菌株分離株均最低。

3 結(jié)論與討論

3.1 由于蛋雞親代細(xì)菌耐藥質(zhì)粒的遺傳和育雛期、產(chǎn)蛋前期抗生素的不規(guī)范使用，導(dǎo)致蛋雞大腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生。C、N、CIP高耐藥率的試驗(yàn)結(jié)果，與蛋雞生產(chǎn)中氟本尼考、氟喹諾酮、新霉素類藥物的預(yù)防性投藥和濫用藥密切相關(guān)，這三類藥物也是多次禽蛋抽檢藥殘較多的品種，與2018年上半年食藥監(jiān)部門鮮蛋抽檢藥物殘留結(jié)果一致。鮮蛋不合格原因是被檢出含有氟苯尼考、恩諾沙星、氧氟沙星等，其中氟苯尼考檢出頻次57.58%（38/66）、恩諾 沙星 39.39%（26/66）、氧氟沙星1.52%（1/66）。

3.2 致病性大腸艾希桿菌是一種機(jī)會(huì)菌，產(chǎn)蛋期是大腸桿菌原發(fā)和繼發(fā)的高發(fā)期。

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低雞舍NH3、H2S、粉塵的濃度可將發(fā)病率降至一個(gè)較低的水平。日常飼料添加微生態(tài)制劑，采用生物拮抗作用，可有效抑制致病性大腸艾希桿菌的繁殖。

3.3 加強(qiáng)低致病性禽流感、新城疫等病毒性疫病的防控，可以減少致病性大腸艾希桿菌的繼發(fā)感染。

3.4 蛋雞發(fā)病后可采用酸化劑飲水和加強(qiáng)雞舍消毒。酸化劑飲水將pH值調(diào)控至4.2左右，抑制致病性大腸艾希桿菌的繁殖，雞舍強(qiáng)化消毒能夠降低空氣致病性大腸埃希菌濃度。

3.5 選擇飼養(yǎng)優(yōu)質(zhì)抗病蛋雞品種，如農(nóng)大三號(hào)、花鳳等本土品種。