賀海林 鐘澤艷 陳劍虹 官志揚(yáng) 楊坤祥 鐘國(guó)興 徐志邦

廣東省惠州市第一婦幼保健院(516007)

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)分為α-地貧和β-地貧兩種[1]。根據(jù)臨床癥狀的嚴(yán)重程度不同可以分為靜止型地貧、輕型地貧、中間型及重型地貧。靜止型和輕型地貧無需特殊治療，中、重型地貧除了輸血外，國(guó)內(nèi)外尚無有效的治療方法，重點(diǎn)在于預(yù)防[2]。為探討預(yù)防重癥地貧的有效手段及其效果，分析本院2015年1月—2016年12月診斷為攜帶同型地貧基因夫婦363例產(chǎn)前基因診斷及隨訪結(jié)果，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年1月—2016年12月在本院產(chǎn)前診斷中心診斷363對(duì)攜帶同型地貧基因夫婦，363對(duì)中同為α地貧基因攜帶者236對(duì)；同為β地貧基因攜帶者56對(duì)；其中一方為α、β地貧基因雙重雜合子，另一方為攜帶有與之同型的α、β地貧基因或α、β雙重雜合子夫婦71對(duì)。經(jīng)知情同意后行產(chǎn)前地貧基因診斷。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1標(biāo)本采集根據(jù)孕周選擇標(biāo)本采集方式，共獲得絨毛標(biāo)本1例、羊水標(biāo)本359例、臍帶血標(biāo)本3例。標(biāo)本用于DNA的初次提取及細(xì)胞培養(yǎng)后的二次平行實(shí)驗(yàn)。DNA提取方法按地貧基因診斷試劑盒(廣東凱普生物科技股份有限公司)說明書進(jìn)行。

1.2.2 α珠蛋白基因檢測(cè)采用Gap-PCR方法診斷中國(guó)人常見的東南亞型(SEA)基因缺失、泰國(guó)型(THAI)基因缺失、-α3.7基因缺失和-α4.2基因缺失等4種缺失型α-地貧基因，采用反向斑點(diǎn)雜交法(PCR-RDB)檢測(cè)常見的α-珠蛋白基因αCSα、αQSα和αWSα3種點(diǎn)突變型地貧基因，檢測(cè)方法按試劑盒(深圳益生堂生物技術(shù)有限公司)操作說明書進(jìn)行。

1.2.3 β珠蛋白基因檢測(cè)采用PCR結(jié)合反向斑點(diǎn)雜交法(PCR-RDB)，檢測(cè)中國(guó)人常見的β-地貧基因17種基因突變類型，檢測(cè)方法按試劑盒(深圳益生堂生物技術(shù)有限公司)操作說明書進(jìn)行。

1.2.4 α、β地貧基因檢測(cè)廣東凱普生物科技股份有限公司α、β地貧基因檢測(cè)試劑盒利用導(dǎo)流雜交的原理，可通過PCR擴(kuò)增及快速導(dǎo)流雜交芯片一次檢測(cè)上述檢測(cè)范圍內(nèi)除泰國(guó)型(THAI)基因缺失外的常見α、β地貧基因型。

1.3 隨訪

363例孕婦均在產(chǎn)前診斷后1年電話隨訪，了解中重型地貧者胎兒結(jié)局、非中重型地貧胎兒出生后表型和發(fā)育情況。

2 結(jié)果

2.1 同型地貧基因攜帶夫婦產(chǎn)前基因診斷

363對(duì)同型地貧基因攜帶夫婦產(chǎn)前基因診斷結(jié)果見表1。

表1 363對(duì)攜帶同型地貧基因夫婦

2.2 同為α-地貧基因攜帶者夫婦胎兒基因分型

236對(duì)同為α-地貧基因攜帶夫婦產(chǎn)前診斷地貧基因譜及見表2。由非缺失型α-地貧基因αQSα和αCSα所致的HbH病(3例)臨床表型通常較重，故與50例巴氏水腫胎(49例SEA純合子及1例THAI/SEA復(fù)合雜合子)共計(jì)為53例中重型α-地貧。

2.3 同為β-地貧基因攜帶者夫婦胎兒基因分型

56對(duì)同型β-地貧基因攜帶夫婦產(chǎn)前診斷地貧基因譜及見表3。

2.4 至少一方為α、β雙重雜合子的同型地貧基因攜帶者夫婦胎兒基因分型

71對(duì)至少一方為α、β雙重雜合子地貧基因攜帶夫婦中，產(chǎn)前診斷正常36例(50.7%)、α或β地貧雜合子15例(21.1%)、巴氏水腫胎4例(0.1%)、α、β地貧雙重雜合子13例(18.3%)、β-地貧復(fù)合雜合子3例(0.04%)。

表2 α-地貧基因攜帶孕婦產(chǎn)前胎兒基因型

表3 β-地貧基因攜帶孕婦產(chǎn)前胎兒基因型

*無突變

2.5 重型α-地貧及妊娠胎兒結(jié)局

中重型α-地貧共計(jì)57例，即3例非缺失型HbH病及54例巴氏水腫胎，均自愿選擇引產(chǎn)；14例中重型β-地貧胎兒中13例選擇引產(chǎn)，1例選擇繼續(xù)妊娠而出生1例重型β-地貧胎兒。產(chǎn)后隨訪均與產(chǎn)前診斷結(jié)果相符。

3 討論

地貧是我國(guó)南方最常見和危害最大的遺傳病之一，重型α-地貧胎兒多在妊娠末期胎死腹中或分娩后死亡；重型β-地貧患兒一般在出生后3～6個(gè)月出現(xiàn)癥狀，需輸血維持生命，多在童年期夭折，目前尚缺少有效治療方法。因此，對(duì)夫婦雙方為同型地貧基因攜帶者的孕婦，在妊娠早期或中期進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免重癥地貧兒出生，是最積極有效的預(yù)防措施[3]。以降低重癥地貧患兒出生率為目標(biāo)的人群監(jiān)控計(jì)劃已在一些歐美高發(fā)區(qū)(如意大利、希臘、塞浦路斯等國(guó)家)取得了成功的經(jīng)驗(yàn)[4]?；葜菔杏?014年開始陸續(xù)在全市范圍內(nèi)開展了地中海貧血防控項(xiàng)目，以及應(yīng)用監(jiān)測(cè)信息管理系統(tǒng)對(duì)納入管理的目標(biāo)人群實(shí)行免費(fèi)地貧基因檢測(cè)。通過對(duì)婚檢、孕檢地貧篩查，大大提高了同型地貧基因攜帶夫婦的檢出率，為產(chǎn)前診斷提供了良好基礎(chǔ)。

本資料同為α-地貧基因攜帶者的夫婦檢出Bart’s水腫胎兒檢出率(21.2%)較之本地區(qū)類似研究檢出率(11.69%[5])高。可能與地貧防控項(xiàng)目實(shí)施后，高危人群定向轉(zhuǎn)診到本院有關(guān)。本院實(shí)驗(yàn)室通過采取STR檢測(cè)及羊水細(xì)胞培養(yǎng)雙通道、多平臺(tái)相互映證等措施，確保地貧產(chǎn)前診斷的準(zhǔn)確無誤[6]。有1對(duì)夫婦獲知重型β-地貧胎兒的產(chǎn)前診斷結(jié)果后選擇繼續(xù)妊娠，并產(chǎn)下1例重型β-地貧患兒。對(duì)另1例孕有重型β-地貧胎兒的夫婦，通過充分告知和實(shí)際病例宣教，使其自主選擇引產(chǎn)，避免了重癥β-地貧兒的出生。說明跟蹤隨訪工作是地貧防控的重要內(nèi)容，跟蹤隨訪工作是否到位，直接關(guān)系到地貧高危夫婦是否相信產(chǎn)前診斷結(jié)果，采納遺傳咨詢建議[7]。地貧防控工作是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)在正確、快速診斷的基礎(chǔ)上，主動(dòng)及時(shí)地與重型地貧夫婦溝通，并依據(jù)確診結(jié)果采取有效方式進(jìn)行隨訪宣教，才能最大限度的避免重癥地貧兒的出生，將地貧防控工作落到實(shí)處。而防止地貧患兒發(fā)生的關(guān)鍵是在于加大對(duì)育齡人群的篩查力度及宣傳，這也更突顯出對(duì)同型地貧夫婦宣教隨訪工作及適時(shí)培訓(xùn)的重要性[8-9]。尤其是在當(dāng)前“全面兩孩”政策下，高齡孕婦通常受孕不易，在得知重型地貧胎兒的產(chǎn)前診斷結(jié)果后，往往難以接受，心存僥幸。因此，如何加強(qiáng)產(chǎn)前診斷后遺傳咨詢及心理干預(yù)，提高實(shí)際干預(yù)效果，也是值得深入研究的重要課題[10]?？傊?，在地貧遺傳知識(shí)尚待普及、尤其是重型β-地貧危害尚未充分認(rèn)知的環(huán)境下，地貧防控工作任重而道遠(yuǎn)。