高赫一

（海南師范大學，海南 ?？?570100）

在水生動物食物鏈中，草履蟲為多種水生經(jīng)濟動物幼體的開口飼料。在生物學研究領域，草履蟲為模型動物，能夠用于動物細胞生理、生化和遺傳學研究。在環(huán)境保護科學研究中，草履蟲則是水質(zhì)凈化和環(huán)境監(jiān)測的重要活性生物材料。在癌癥等疾病的準確診斷方面，也需要利用草履蟲的水溶性提取物。所以，無論是在教研還是生產(chǎn)實踐中，草履蟲都是必須具有的單細胞實驗動物，擁有多種采集和培養(yǎng)方法。掌握這些方法，則能更好地解決實驗材料問題。

1 草履蟲采集方法分析

在生活環(huán)境上，草履蟲通常在有機物豐富且陽光充足的地方集聚。在0～30℃的水溫中，草履蟲都能浮于水面正常生活。在14～22℃條件下，草履蟲擁有較強的繁殖能力，可以形成乳白色薄膜，實現(xiàn)大量繁殖。如果水溫不超過10℃，草履蟲將持續(xù)減少，繁殖能力將隨著溫度降低而下降。

1.1 直接采集法

草履蟲可以通過直接采集獲得，具體采集時分為2種情況：①水溫較高的情下，可以在池塘、水溝等擁有較多腐草爛葉的地方采集草履蟲。具體而言，就是在落葉多的地方利用清潔的小廣口瓶或試管沿著草履蟲集聚的水面進行池水采集，然后對著光源進行器具觀察，確認水中是否存在游動的小白點；②溫度較低時，草履蟲不像溫度高時一樣活動頻繁，通常會不斷集聚和縮在一起，減少流動次數(shù)，并會沉入水底。采集時將冰層打開，在冰下壓強較大的條件下，水會向上噴射，水下集聚成球狀的草履蟲將隨之噴出。

1.2 PKU采集法

采用PKU采集法時，則是在池塘、水溝等野外場地的水下進行聚氨酯泡沫塑料的浸泡。在水下3～5 cm的位置進行塑料浸泡，時間約30 min，然后將泡沫塑料中的水擠入培養(yǎng)皿中，則能完成草履蟲采集。

2 草履蟲培養(yǎng)方法研究

在草履蟲培養(yǎng)方面，可以采用植物培養(yǎng)、動物組織培養(yǎng)、生物制品培養(yǎng)等三類培養(yǎng)方法。

2.1 植物培養(yǎng)

采用植物培養(yǎng)法，可以劃分為直接和間接兩類。直接培養(yǎng)草履蟲方面，可以進行野生禾本科植物干草的采集，最好為當年生長在水塘、池沼的植物，比如稻草、麥稈等。對植物近根部的莖稈進行截取，剪成2 cm左右，然后放在盛有河水或自來水的燒杯中。將燒杯放在有陽光的地方，經(jīng)過幾天就能得到草履蟲。因為在禾本科植物的根莖上，通常粘有縮成團狀草履蟲，經(jīng)過水培后可以大量繁殖。但采用該種方法需要注意避免選變質(zhì)或發(fā)霉的草履蟲，也不能選更年的植物。在秋收后，草尚未枯黃時，可以進行植物材料采集。對野外采集得到的草履蟲進行直接培養(yǎng)，往往會得到個體大小存在差異的草履蟲，同時含有輪蟲、眼蟲等原生動物或浮游生物，草履蟲的純度不高。針對這一情況，還要通過分離和純化進行擴大培養(yǎng)，才能得到個體大且純度高的實驗材料。采取間接培養(yǎng)法時，需要進行2 cm左右新鮮潔凈稻草的截取。將稱取得到的15 g稻草放入培養(yǎng)皿中，加入1000 mL水。將水煮沸后，經(jīng)過冷卻、過濾和定容，作為稻草培養(yǎng)液。在培養(yǎng)草履蟲時，在培養(yǎng)皿上蓋上雙層紗布，避免其他生物進入，然后放置24 h，可以進行草履蟲接種。采用植物培養(yǎng)法，除了利用稻草培養(yǎng)液，也可以利用麥粒等植物培養(yǎng)液。

2.2 動物組織培養(yǎng)

采用動物組織培養(yǎng)法，即利用蛋黃、豬內(nèi)臟、牛肉等動物組織進行培養(yǎng)液的制備，然后進行草履蟲接種。制備蛋黃培養(yǎng)液，需要將0.5 g煮熟蛋黃放入培養(yǎng)皿，先利用少量清水將其搗碎，得到糊狀物。在此基礎上，加入500 mL清水，然后放置2 d，滴入唇滴蟲培養(yǎng)液后可進行草履蟲接種。利用豬內(nèi)臟進行培養(yǎng)液制取，可以取2 g肝臟或胰臟切碎，然后添加400 mL清水，浸泡10 h后可接種草履蟲，三四天后可以得到大量草履蟲。采用牛肉制備培養(yǎng)液，需要取50 g牛肉，利用500 mL水熬成汁，在冰箱中冷藏。向草履蟲培養(yǎng)液中每周進行一兩滴牛肉汁滴加，可以獲得大量的草履蟲。

2.3 生物制品培養(yǎng)

生物制品培養(yǎng)即利用酵母、奶粉等生物制品制作草履蟲培養(yǎng)液，比如采用酵母培養(yǎng)草履蟲，需要利用少量清水將2 g干酵母粉末搗碎，得到糊狀物后加入250 mL清水。放置數(shù)小時后，可進行草履蟲接種。接種后，需要將培養(yǎng)皿蓋上，在室溫下放置7 d左右，培養(yǎng)出的草履蟲大多帶有暗灰色食物泡。通過多次更換培養(yǎng)液，可以使草履蟲的純度得到提高。制備奶粉培養(yǎng)液，需要利用少量清水將一匙脫脂乳粉搗碎，得到糊狀物后加入500 mL煮沸清水，攪拌均勻后進行冷卻。接種草履蟲后，需要在22℃條件下放置兩三日，可以得到處于分裂生殖狀態(tài)的草履蟲。5 d后，草履蟲數(shù)量將得到高峰值，每隔兩周加入少量薄脫脂乳粉糊狀物，可以完成長期培養(yǎng)。采用該種方法培養(yǎng)得到的草履蟲不僅個體大，同時擁有清晰的細胞質(zhì)和食物泡，常能看到大核。此外，也可以直接在1000 mL蒸餾水中加入幾滴牛奶或豆?jié){，在接種草履蟲后以適宜條件培養(yǎng)，可以在兩三日后獲得大量草履蟲。

2.4 連續(xù)培養(yǎng)

實際上，只要在適宜溫度條件下，擁有充足的養(yǎng)分，草履蟲就可以一直旺盛成長。所以，想要進行草履蟲持續(xù)培養(yǎng)，可以將草履蟲培養(yǎng)皿放在25℃條件下，以黃光照射，并定期加入營養(yǎng)液，可以實現(xiàn)草履蟲的連續(xù)培養(yǎng)。按照每500 g加入2 g的標準定期向培養(yǎng)液中加入起發(fā)酵作用的碳酸氫鈉，或添加5 g蔗糖，可以使草履蟲的培養(yǎng)效果得到改善。

3 結(jié)論

通過研究發(fā)現(xiàn)，作為最原始和較低等的典型單細胞動物，草履蟲具有易采集和培養(yǎng)的特點，能迅速繁殖。在采集方面，可采用直接采集法和PKU采集法。在培養(yǎng)方面，可采用植物培養(yǎng)、動物組織培養(yǎng)、生物制品培養(yǎng)等多種培養(yǎng)方法，并通過連續(xù)培養(yǎng)獲得大量草履蟲。通過合理的采集，為草履蟲提供適宜的生長條件和有效的培養(yǎng)液，能使草履蟲迅速繁殖。

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