仔豬復(fù)方中草藥飼料添加劑的抑菌及急性毒理學(xué)研究

楊猛，黃亞東，張二飛,鄭琪

（江蘇食品藥品職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇淮安223005）

仔豬斷奶時容易產(chǎn)生腹瀉、營養(yǎng)不良，進而影響仔豬生長性能，長期使用抗菌藥和激素的濫用，產(chǎn)生了細菌耐藥性增加、環(huán)境污染等一系列問題，嚴重威脅規(guī)?；i場的健康養(yǎng)殖和人類健康[1]。以我國產(chǎn)量豐富的中草藥為原料研制飼料添加劑，代替抗生素防治仔豬腹瀉，具有抗病促生長顯著效果、作用方式獨特、無有害殘留、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點[2]。

1 材料

1.1 中草藥復(fù)方制劑

根據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出2劑“止瀉散”仔豬復(fù)方中草藥飼料添加劑。

1.2 試驗動物

試驗動物為昆明種小白鼠，體重為18～22g，用常規(guī)方式飼養(yǎng)，自由采食。購于揚州大學(xué)。

2 方法

2.1 抑菌試驗方法

2.1.1 藥敏性試驗 采用牛津杯加注藥液的體外抑菌法。將12cm滅菌培養(yǎng)皿分成6個扇區(qū)。中草藥及復(fù)方的醇提物按照同樣的方法進行體外抑菌試驗[3]。

2.1.2 最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測定 依據(jù)水提物、醇提物抑菌結(jié)果，采用10倍稀釋法及2倍稀釋法，測定MIC和MBC。

10倍稀釋法：用無菌營養(yǎng)肉湯倍比稀釋藥液（終體積5mL），37℃培養(yǎng)24h。以不顯示濁度、細菌未生長時的藥物濃度作為MIC，并取該管中0.05mL肉湯，接種于營養(yǎng)瓊脂平板；37℃培養(yǎng)24h，平板上無菌落或菌落生長數(shù)≤10的藥物濃度為MBC[3]。

2倍稀釋法：根據(jù)10倍稀釋法結(jié)果，進一步確定MIC和MBC，MIC和MBC判定同10倍稀釋法[3]。

2.2 急性毒性試驗（LD50的測定）

根據(jù)此前預(yù)試驗結(jié)果，設(shè) 20000mg/kg，29000mg/kg，42050mg/kg和60973mg/kg4個劑量組（等比級數(shù)1.45）和一個空白對照組。取18～22g小白鼠，每組10只，雌雄各半，連續(xù)給藥7d，每天觀察小白鼠精神、食欲、飲水、活動及中毒情況，并記錄小白鼠的死亡數(shù)目[4]。

2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

表1 中草藥復(fù)方制劑水提物對6種病原菌的抑菌效果比較（抑菌）

表2 中草藥復(fù)方制劑的水浸提物對6種病原菌的MIC和MBC（g/mL）

試驗值以平均數(shù)±標準差表示，并采用SPSS17.0進行單因素方差分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 抑菌試驗結(jié)果

3.1.1 中草藥復(fù)方制劑水提物對6種相關(guān)病原菌的抑菌直徑

3.1.2 中草藥復(fù)方制劑水提物對6種病原菌的MIC和MBC

由表1和表2，抑菌直徑、最小抑菌濃度和最小殺菌濃度分析可知，根據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制的2劑中草藥復(fù)方制劑都有較好的抑菌和殺菌效果，并且復(fù)方制劑與單味中草藥相比抑菌和殺菌效果均優(yōu)于單味中草藥。

3.2 毒理學(xué)試驗結(jié)果

經(jīng)7d觀察，全部小白鼠的精神、食欲、飲水等情況和對照組比較均無異常。據(jù)此確定小白鼠灌服中草藥飼料60973mg/kg后，仍沒有出現(xiàn)中毒死亡。按毒理學(xué)評價標準，可不必測定半數(shù)致死量（LD50），即 LD50＞60973mg/kg。結(jié)果表明，中草藥飼料添加劑屬于實際無毒類物質(zhì)。

4 結(jié)論

據(jù)抑菌直徑、最小抑菌濃度和最小殺菌濃度分析可知，依據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制的2劑中草藥復(fù)方制劑都有較好的抑菌和殺菌效果，并且復(fù)方制劑抑菌和殺菌效果均優(yōu)于單味中草藥。

急性毒理學(xué)試驗、蓄積毒性試驗結(jié)果顯示，復(fù)方中草藥飼料添加劑是一種無毒副作用的純天然的綠色藥物。