陳燕 齊衍超 郎益鵬 趙海鵬 楊麗蓉

濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 山東濰坊 261105

環(huán)孢素是一種可以對(duì)機(jī)體免疫反應(yīng)起到抑制作用的藥物，它能有效抑制免疫相關(guān)細(xì)胞的增殖和功能，降低抗體的免疫反應(yīng)，常用來作為器官移植后的抗排異反應(yīng)藥物。環(huán)孢素的發(fā)明是近幾十年來醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)ζ鞴僖浦惭芯咳〉玫闹匾M(jìn)展。而環(huán)孢素中包含了多種雜質(zhì)，要想發(fā)揮環(huán)孢素的治療作用，確保用藥安全性就必須精確控制環(huán)孢素中各種雜質(zhì)的含量?；诖耍疚膮⒖枷嚓P(guān)研究資料，采用HPLC法測定環(huán)孢素膠囊中主要有效成分的含量及有關(guān)物質(zhì)，為精確控制藥品質(zhì)量提供參考。

1 儀器與材料

安捷倫1260型HPLC儀，1200系列自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測器、四元泵（美國安捷倫公司）；XS-205DU型電子天平(瑞士梅特勒公司)。環(huán)孢素對(duì)照品（瑞士Nvoartis公司，批號(hào)：130495-200202）；環(huán)孢素B、環(huán)孢素C、環(huán)孢素H、環(huán)孢素G、異環(huán)孢素A、異環(huán)孢素H對(duì)照品（諾華制藥有限公司，批號(hào)分別為518-85、005-95、520-85、16-85、502-88、210-89）；環(huán)孢素膠囊（北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司，批號(hào)：20090601）；四氫呋喃為色譜純；磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

填充劑為C18柱，用長1米、直徑0.25mm的不銹鋼管連接色譜柱、進(jìn)樣閥，用于熱交換；流動(dòng)相為四氫呋喃-0.05mol/L磷酸溶液(45:55)；流速為1.0ml/min；檢測波長220nm；色譜柱溫度、不銹鋼管溫度為75℃；進(jìn)樣量10μL。

2.2 溶液的制取

(1)系統(tǒng)適用性溶液制取。使用電子天平分別稱取3毫克環(huán)孢素B、環(huán)孢素C、環(huán)孢素H、環(huán)孢素G、異環(huán)孢素A、異環(huán)孢素H對(duì)照品，稱取100毫克環(huán)孢素對(duì)照品，將它們放入50毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解稀釋到刻度制得系統(tǒng)適用性溶液。

（2）對(duì)照品溶液的制取。使用電子天平稱取50毫克左右的環(huán)孢素對(duì)照品，將其放入25毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度；精密量取1毫升置于200毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋至刻度，獲得對(duì)照品溶液。

（3）供試品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物適量(含環(huán)孢素約100mg)精密稱取，將其置于50毫升量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋至刻度，搖勻后獲得供試品溶液。

3 有關(guān)物質(zhì)

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

使用電子天平精密稱取適量的六種雜質(zhì)對(duì)照品以及環(huán)孢素對(duì)照100mg，將它們放入50毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。

3.2 檢出限和定量限

使用逐步稀釋法測定，以S/N=3時(shí)計(jì)算出環(huán)孢素檢出限為3ng。以S/N=10時(shí)計(jì)算出環(huán)孢素以及六種雜質(zhì)的定量限分別為：9.9、20.3、19.5、31.3、18.28、50.6、45.2ng。

3.3 校正因子

使用電子天平分別稱取適量的各雜質(zhì)對(duì)照品、環(huán)孢素對(duì)照品配制對(duì)照品溶液，計(jì)算出環(huán)孢素及各種各雜質(zhì)對(duì)應(yīng)的校正因子。

4 含量測定

4.1 溶液的配制

供試品溶液的配制方法同上文所述。

對(duì)照品溶液：使用電子天平稱取50毫克左右的環(huán)孢素對(duì)照品，將其放入25毫升的量瓶中，添加比例為80:20的四氫呋喃-水混合液溶解并稀釋到刻度，搖勻后作為對(duì)照品溶液。

4.2 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品根據(jù)上文所述方法配制供試品溶液、對(duì)照品溶液，根據(jù)上文所述的色譜條件開展分析，進(jìn)行六次樣品測定，平均含量為97.5%，RSD值 0.1%。

4.3 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照上述方法配制供試品溶液，在0、2、4、6、8h測定峰面積，得到峰面積均值16499，RSD0.2%。檢測結(jié)果顯示8小時(shí)之內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

4.5 樣品含量測定

精密稱取環(huán)孢素膠囊樣品，制備供試品溶液、對(duì)照品溶液，根據(jù)上文給出的色譜條件分析，根據(jù)外標(biāo)法用峰面積計(jì)算環(huán)孢素膠囊樣品含量。

5 討論

環(huán)孢素生產(chǎn)、儲(chǔ)存過程中存在的雜質(zhì)主要包括環(huán)孢素G、異環(huán)孢素A、環(huán)孢素B、環(huán)孢素D等，含量都極少。本次研究對(duì)環(huán)孢素B、環(huán)孢素C、環(huán)孢素H、環(huán)孢素G、異環(huán)孢素A、異環(huán)孢素H這六種雜質(zhì)進(jìn)行控制。試驗(yàn)顯示流動(dòng)相為四氫呋喃-0.05 mol/L 磷酸溶液（45：55）時(shí)，環(huán)孢素與六種雜質(zhì)的均能達(dá)到基線分離。

6 結(jié)語

綜上所述，使用HPLC法對(duì)環(huán)孢素膠囊含量及有關(guān)物質(zhì)的測定可以獲得精準(zhǔn)可靠的結(jié)果，可以為環(huán)孢素膠囊質(zhì)量控制提供有價(jià)值的參考。