孫豐收 ，鄭尊濤 ，樸秀英 ，朱光艷 ，廖先駿 ，龔 勇 ，李富根 *

（1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東泰安 271001）

枸杞（Lycium barbarum L.）是重要的藥食同源農(nóng)產(chǎn)品，在我國主要分布于寧夏、內(nèi)蒙古、新疆等地[1]。枸杞中含有胡蘿卜素、硫胺素、核黃素、煙酸、抗壞血酸、酸漿果紅素及微量元素等多種組分，具有抗腫瘤、抗衰老、降血糖、降血脂、抗疲勞等多種功效[2-4]。枸杞含糖量高，常有木虱、裸薊馬、粉蚧、蚜蟲等蟲害發(fā)生，防治難度大，目前主要以化學(xué)防治為主[5-6]。目前，吡蟲啉、噠螨靈、乙螨唑等多種農(nóng)藥已在枸杞上登記使用，然而農(nóng)藥在確保枸杞產(chǎn)量的同時，由于其不合理使用，造成農(nóng)藥殘留超標(biāo)，不僅對人體健康產(chǎn)生直接或潛在的毒害，也會對生態(tài)環(huán)境造成污染。因此，建立枸杞中快速、準(zhǔn)確、高效的農(nóng)藥檢測方法十分必要。目前，關(guān)于枸杞中農(nóng)藥殘留分析方法主要有液相色譜法（HPLC）[7-8]、氣相色譜法（GC）[9-11]、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）[12-13]、液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）[14-16]等。其中，HPLC-MS/MS具有高靈敏度、高準(zhǔn)確度、高通量等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥多殘留分析。林童等[6]建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定枸杞中5種農(nóng)藥的殘留量，樣品采用乙腈提取，C18固相萃取小柱凈化，在添加水平為0.001～0.1 mg/kg時，5種農(nóng)藥的回收率為82.15%～102.81%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.89%～5.02%；Fu等[14]采用乙腈提取枸杞樣品，N-丙基乙二胺（PSA）凈化，建立了HPLC-MS/MS同時檢測枸杞中8種農(nóng)藥殘留的方法。8種農(nóng)藥的平均回收率為82.1%～96.2%，RSD均小于7%。本研究在已有報道的基礎(chǔ)上，采用QuEChERS前處理，結(jié)合HPLC-MS/MS檢測技術(shù)，建立了同時檢測枸杞中4種農(nóng)藥殘留的分析方法，為枸杞中農(nóng)藥殘留快速檢測提供技術(shù)支持。

1 實(shí)驗部分

1.1 主要儀器

Thermo Finnigan-TSQ Quantum液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，配電噴霧離子源（ESI）；OA-SYSN-EVAP 112氮吹儀；IKA ULTRA-TURRAX T25 digitel高速分散機(jī)；SIGAM 4-15離心機(jī)；METTLER AE240、PC4000分析天平；IKA VORTEX GENIUS 3渦旋混合儀；0.22 μm有機(jī)濾膜等。

1.2 主要試劑

乙腈為色譜純；氯化鈉、無水硫酸鎂、檸檬酸為分析純；乙酸為優(yōu)級純；水為GB/T 6682—2008中規(guī)定的一級水；4種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供。

1.3 樣品前處理

稱取5.0 g枸杞樣品于100 mL塑料離心管中，加入20 mL純水，15 000 r/min勻漿30 s，加入20 mL乙腈劇烈振蕩1 min，再加入1.5 g檸檬酸、1 g氯化鈉、4 g無水硫酸鎂，劇烈振蕩1 min，4 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min。取上清液10 mL于15 mL塑料離心管中，加入0.4 g PSA、1.2 g無水硫酸鎂，劇烈振蕩至混合均勻后，渦旋混合3 min，4 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min。取4 mL上清液于刻度試管中，氮吹至近干，用乙腈定容至1 mL，渦旋混勻，過0.22 μm有機(jī)濾膜，上機(jī)待測。

1.4 檢測條件

C18色譜柱（100 mm×2.1 mm），粒徑5 μm；進(jìn)樣體積10 μL；流動相為0.05%乙酸水溶液＋乙腈，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源ESI，正離子模式；噴霧電壓：3 000 V；脫溶劑氣溫度350℃；鞘氣（N2）壓力137.9 kPa；輔助氣（N2）壓力68.95 kPa；碰撞氣（Ar）壓力0.133 Pa；多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），具體監(jiān)測條件見表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測條件

4種農(nóng)藥的標(biāo)樣譜圖見圖1～圖4。

圖1 甲基異柳磷標(biāo)樣譜圖（0.02 mg/L）

圖2 克百威標(biāo)樣譜圖（0.02 mg/L）

圖3 噻嗪酮標(biāo)樣譜圖（0.02 mg/L）

圖4 霜霉威標(biāo)樣譜圖（0.02 mg/L）

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確稱取一定量的標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1 mg），以乙腈溶解并稀釋，配制成系列標(biāo)樣溶液，質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.05、0.1、0.2和0.5 mg/L，采用1.4檢測條件進(jìn)行分析。甲基異柳磷線性回歸方程為y=2 539 725 x＋359 477，相關(guān)系數(shù)R2為0.998 5；克百威線性回歸方程為y=12 768 188 x＋1 627 831，相關(guān)系數(shù)R2為0.991 2；噻嗪酮線性回歸方程為y=60 568 423 x＋1 063 434，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 1；霜霉威線性回歸方程為y=18 676 561 x-1 107 854，相關(guān)系數(shù)R2為0.990 3。結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度為0.01～0.5 mg/L，4種農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好。

2.2 添加回收實(shí)驗

將空白枸杞樣品粉碎，加入標(biāo)樣，充分混勻后靜置2 h，設(shè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01、0.1、0.5 mg/kg，進(jìn)行添加回收實(shí)驗。每個添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)重復(fù)5次，采用1.3方法進(jìn)行前處理，1.4檢測條件進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，4種農(nóng)藥的添加回收率為80.3%～102.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～11.2%，見表3。

表3 添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=5）

根據(jù)添加回收實(shí)驗結(jié)果，得到枸杞中4種農(nóng)藥的定量限均為0.01 mg/kg。

3 結(jié)論

枸杞中農(nóng)藥采用乙腈提取，QuEChERS凈化，HPLC-MS/MS檢測。本文建立了枸杞中4種農(nóng)藥的殘留分析方法，并對方法的回收率和精密度進(jìn)行了探究。在3個添加水平下，回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足檢測要求。本方法簡便快捷、準(zhǔn)確可靠，為枸杞中農(nóng)藥殘留量的測定提供了一種簡單高效的檢測方法。