周軼冰

[摘要] 目的 探討胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表達(dá)檢測及其臨床意義。 方法 收集佳木斯市中心醫(yī)院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術(shù)的胃癌患者20例作為實驗組，健康人群20例作為對照組，使用qRT-PCR方法對實驗組和對照組血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測，分析檢測結(jié)果的臨床意義。 結(jié)果 microRNA-26a在實驗組術(shù)前血清樣本中的表達(dá)水平（1.76±0.54）明顯低于對照組（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明顯低于術(shù)后血清樣本中的表達(dá)水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在實驗組術(shù)前血清樣本中的表達(dá)水平（29.54±3.12）明顯高于對照組（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明顯高于術(shù)后血清樣本中的表達(dá)水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001）。 結(jié)論 microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標(biāo)記物。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；血清樣本；microRNA-26a；microRNA-199a

[中圖分類號] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2018）23-0022-03

Detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer

ZHOU Yibing

Department of Second General Surgery， Jiamusi Central Hospital in Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

[Abstract] Objective To investigate the detection and clinical significance of microRNA-26a and microRNA-199a in serum of patients with gastric cancer. Methods A total of 20 patients who were diagnosed with gastric cancer and underwent radical resection in Jiamusi Central Hospital from January 2015 to December 2017 were selected as the experimental group. 20 healthy people were selected as the control group. The expression levels of microRNA-26a and microRNA-199a in two groups were detected quantitatively by qRT-PCR. The clinical significance of the detection results was analyzed. Results The expression level of microRNA-26a in the preoperative serum samples of the experimental group （1.76±0.54） was significantly lower than that in the control group （5.33±1.12） （t=4.55， P=0.002）， which was also significantly lower than that of the control group after surgery（3.89±0.87） （t=5.11， P=0.001）. The expression level of microRNA-199a in the preoperative serum samples of the experimental group（29.54±3.12） was significantly higher than that in the control group（6.07±1.34） （t=6.19， P=0.001）， and the former was also significantly higher than that in postoperative serum samples（15.87±2.64）（t=5.76， P=0.001）. Conclusion microRNA-26a and microRNA-199a may become serum markers for the early diagnosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； Serum samples； microRNA-26a； microRNA-199a

胃癌是一種死亡率極高的惡性腫瘤，在我國早期診斷率較低，患者確診時已經(jīng)進(jìn)入中晚期，導(dǎo)致手術(shù)治療的效果并不理想。胃癌的發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果，分為多個階段，由多種基因共同參與，通常是由于癌基因和抑癌基因表達(dá)失調(diào)所引起的。microRNA長度約為21個核苷酸，廣泛存在于各種真核生物中，是一種非蛋白質(zhì)編碼RNA。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者均致力于microRNA在腫瘤組織和血清中異常表達(dá)的研究工作，已經(jīng)證實，microRNA參與很多癌基因和抑癌基因的調(diào)控，對癌細(xì)胞的增殖、分化和凋亡均起著關(guān)鍵作用[1-3]。

本研究選取佳木斯市中心醫(yī)院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術(shù)的胃癌患者20例作為實驗組，在我院進(jìn)行健康體檢的健康人群20例作為對照組，使用qRT-PCR方法對實驗組和對照組血清中microRNA-26a和microRNA-199a的表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測，分析檢測結(jié)果的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集佳木斯市中心醫(yī)院2015年1月～2017年12月期間確診且行根治術(shù)的胃癌患者20例作為實驗組，入組標(biāo)準(zhǔn)[4，5]：①經(jīng)我院胃鏡檢查，取病理診斷為胃癌且行手術(shù)切除治療，術(shù)后由病理學(xué)確診；②患者手術(shù)過程中未出現(xiàn)大出血；③血清標(biāo)本采集前未進(jìn)行放化療；④患者均為初發(fā)腫瘤，并無其他任何惡性病史。實驗組中男12例，女8例，患者平均年齡（55.6±4.2）歲，根據(jù)腫瘤的TNM分期法對實驗組中的樣本進(jìn)行分期。隨機(jī)選取在我院進(jìn)行健康體檢的健康人群20例作為對照組，其中男10例，女10例，平均年齡（58.5±6.2）歲，兩組一般資料情況見表1。

1.2 方法

1.2.1 收集血清樣本 采用真空采血管裝入促凝劑作為促凝管，抽取實驗組中患者術(shù)前以及術(shù)后7 d外周血5 mL，同時抽取對照組外周血5 mL，將收集的血清樣本置入促凝管中，放入離心機(jī)，3000轉(zhuǎn)速離心10 min，取管內(nèi)上清液置于2 mL離心管內(nèi)，放入冰箱保存，溫度-80℃[6-8]。

1.2.2 提取血清中總RNA 取血清樣本20 μL，加入裂解液，置入振蕩器混勻，再加檢測外參CR100，繼續(xù)振蕩混勻；將樣本放置5 min，分離核酸蛋白復(fù)合物，加入同體積氯仿，繼續(xù)振蕩混勻，再將樣本放置5 min；將樣本放入離心機(jī)內(nèi)離心，取無色水相置入新的離心管；將1 μL無水乙醇加入500 μL轉(zhuǎn)移液，轉(zhuǎn)入吸附柱，放置2 min后離心機(jī)離心；向吸附柱加入去蛋白液和漂洗液，反復(fù)離心棄廢液，將吸附柱放置在超凈工作臺上晾干后轉(zhuǎn)入新的離心管，加入DEPC處理水20 μL，放置2 min后離心機(jī)離心，收集總RNA，放入冰箱備用，溫度-80℃[9-11]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，其中年齡、腫瘤大小等患者的計量資料的組間差異使用非配對t檢驗，具體數(shù)據(jù)采用（x±s）表示，而各組間microRNA-26a和microRNA-199a表達(dá)水平的差異則采用U檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，所有P均為雙側(cè)。

2結(jié)果

采用qRT-PCR法對實驗組術(shù)前、術(shù)后和對照組中血清樣本的microRNA-26a和microRNA-199a表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)microRNA-26a在實驗組術(shù)前血清樣本中的表達(dá)水平（1.76±0.54）明顯低于對照組（5.33±1.12）（t=4.55，P=0.002），也明顯低于術(shù)后血清樣本中的表達(dá)水平（3.89±0.87）（t=5.11，P=0.001）；microRNA-199a在實驗組術(shù)前血清樣本中的表達(dá)水平（29.54±3.12）明顯高于對照組（6.07±1.34）（t=6.19，P=0.001），也明顯高于術(shù)后血清樣本中的表達(dá)水平（15.87±2.64）（t=5.76，P=0.001），見表2。

3討論

胃癌具有早期診斷率低、死亡率高等特點，是多因素共同作用的結(jié)果，分為多個階段，由多種基因共同參與，通常是由于癌基因與抑癌基因表達(dá)失調(diào)所引起的。近年來，國內(nèi)外許多學(xué)者均致力于microRNA在腫瘤組織和血清中異常表達(dá)的研究工作，已經(jīng)證實，microRNA參與很多癌基因和抑癌基因的調(diào)控，對癌細(xì)胞的增殖、分化和凋亡均起著關(guān)鍵作用。

近年來，很多學(xué)者均把研究焦點集中在了惡性腫瘤的早期診斷上，尤其是腫瘤的血清標(biāo)記物以其無創(chuàng)、易取材、檢測方便等特點得到了廣泛的重視。胃癌是一種死亡率極高的惡性腫瘤，在我國早期診斷率較低，患者確診時已經(jīng)進(jìn)入到中晚期，導(dǎo)致手術(shù)治療的效果并不理想，并且臨床上常用的一些腫瘤標(biāo)記物對于胃癌缺乏敏感性，因此尋找胃癌早期診斷的血清標(biāo)物就尤為重要。microRNA長度約為21個核苷酸，廣泛存在于各種真核生物中，是一種非蛋白質(zhì)編碼RNA，通過對癌基因和抑癌基因的調(diào)控參與腫瘤細(xì)胞增殖、分化的整個過程[12]。

本研究初步探討了胃癌患者血清中microRNA-26a和microRNA-199a表達(dá)檢測及其臨床意義，我們對20例胃癌患者實驗組術(shù)前、術(shù)后和對照組的血清樣本中microRNA-26a和microRNA-199a的表達(dá)水平進(jìn)行了定量檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌患者術(shù)前血清樣本中microRNA-26a的表達(dá)水平顯著低于術(shù)后，而胃癌患者術(shù)后血清樣本中microRNA-26a的表達(dá)水平又顯著低于對照組；胃癌患者術(shù)前血清樣本中microRNA-199a的表達(dá)水平顯著高于術(shù)后，而胃癌患者術(shù)后血清樣本中microRNA-199a的表達(dá)水平又顯著高于對照組，因此microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標(biāo)記物[13，14]。

microRNA-26a是一種能夠抑制多種促癌基因微小RNA，通過調(diào)控下游靶基因，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和分化，從而抑制腫瘤的形成，有研究已經(jīng)證實，microRNA-26a在胃癌組織中的表達(dá)水平也顯著降低，這與本研究結(jié)果一致，通過對患者病理特征的研究，發(fā)現(xiàn)microRNA-26a的表達(dá)水平與TNM分期存在一定的相關(guān)性，胃癌患者TNM分期越晚，microRNA-26a的表達(dá)水平越低，因此microRNA-26a不僅可以作為胃癌早期診斷的血清標(biāo)記物，還有可能成為判斷胃癌患者TNM分期以及預(yù)后情況的標(biāo)記物[15]。

很多研究顯示microRNA-199a和多種腫瘤均存在著表達(dá)的差異，本研究發(fā)現(xiàn)microRNA-199a在胃癌患者血清樣本中的表達(dá)顯著升高，并且在病理分級、TNM分期不同的樣本中，microRNA-199a的表達(dá)水平也具有一定的差異性，是否與其他的臨床指標(biāo)有關(guān)還有待證實。

綜上所述，胃癌患者術(shù)前血清樣本中microRNA-26a和microRNA-199a的表達(dá)水平有顯著變化，術(shù)前、術(shù)后血清樣本中的表達(dá)也有顯著差異，這些均提示microRNA-26a和microRNA-199a有可能成為胃癌早期診斷的血清標(biāo)記物，但由于本研究的實驗樣本數(shù)量有限，對microRNA-26a和microRNA-199a與胃癌的分期、分型以及浸潤程度的相關(guān)性還有待更進(jìn)一步的研究。

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（收稿日期：2018-05-21）