文/Peter Pfeiffer Roman Klinkner
正確的移液是實驗成功的保障 // 在實驗室工作的每一個人都會移液,但你真的會嗎?或者不是每一個人都認為他會正確的移液,你可以從本文中得知移液過程中最重要的是什么,如何得到可以重復再現(xiàn)的移液結(jié)果。
在實驗室中,幾乎沒有一項工作像移液一樣普通了。也許正是因為如此普通、如此簡單而沒有得到人們的關(guān)注吧。但就是這樣一個最為普通、簡單工作卻對檢測實驗的結(jié)果有著至關(guān)重要的影響,而且還隱含著許多“陷阱”。那么在移液時要注意些什么問題呢?定期標定移液器就可以了嗎?你真的會正確的移液?或者你應該如何改進、完善移液技術(shù)呢?
本文章著重介紹的是移液器類型方面的基礎(chǔ)知識,以及它們的應用和各種移液技術(shù)。
圖1 正確的移液對獲得準確的試驗結(jié)果和可重復性的分析結(jié)論有著非常重要的意義
圖2 手動空氣正壓式移液器(左),活塞式多功能分液器(中)和電子移液器(右)
玻璃或者塑料制成的一次性移液器適合于移送液體,它們的采購成本非常低廉,但不能準確的測定移液量,而想精確移液量和移液總量等準確的定量移液時需要使用經(jīng)典的玻璃移液器。但玻璃移液器在小容量移液時的精度也不高,而且小容量移液時玻璃移液器也顯得有些笨重了。移液總量在1mL以上時使用玻璃移液器可以得到理想的移液精度。當移液總量在微升范圍內(nèi)時,使用活塞式移液器才能滿足精度要求。這種移液器又稱之為馬爾堡移液器、微型或者微量型移液器?;钊揭埔浩饕呀?jīng)成為實驗室中的標準計量器具了,能夠在微升范圍內(nèi)快捷方便的完成移液任務。
活塞式移液器最大的結(jié)構(gòu)設(shè)計特點是帶彈簧的可移動柱塞。利用柱塞在移液管中的上下移動,實驗員可以任意的設(shè)置、調(diào)整移液量,因此可以快速、準確的移送限定容積的液體,通常在所謂的標稱容積10%至100%的范圍內(nèi)。活塞式移液器分為兩大類型:空氣正壓式移液器和活塞移動式移液器。
活塞式移液器的結(jié)構(gòu)設(shè)計非常簡單類似于注射器,依靠活塞的運動吸取被移送的液體介質(zhì),液體介質(zhì)與活塞端面直接接觸。
在空氣正壓式移液器中,運動的活塞與被移送的介質(zhì)之間有一段空氣柱,被移送液體介質(zhì)與移液器吸頭相互接觸。在移送水性介質(zhì)、不同液體之間交替移液時,空氣正壓式移液器是首選的移液器。
空氣正壓式移液器是應用最為廣泛的移液器。它還有多通道的變型類型,從而方便的微量滴定板中的移液。例如8通道移液器和12通道移液器。
本文所提到的所有移液器以及包含了分液器、移液機器人、滴定器、移液輔助設(shè)備等通常都歸入“液體處理”技術(shù)領(lǐng)域中的術(shù)語。
圖3 不同的移液技術(shù),正向移液(左)和反向移液(右)
表1 移液時常見的十種錯誤
當前市場開發(fā)出來的最新產(chǎn)品是電子移液器。其簡單的使用操作和多種多樣的使用可能性使其成為實驗室日常工作中的得力助手。它們的最大優(yōu)點是消除了移液器的壓力點誤差源,因為它不再需要實驗員手指的感覺了。尤其是大量移液時它最受歡迎,因為它避免了實驗員的手部疲勞。許多電子移液器還提供了作為小容量分液器使用的可能性,即連續(xù)多次移送限定容積的液體。
與手動活塞式移液器相比較的這些優(yōu)點應在購置移液器之前就考慮其最大重量、最高采購成本和維護保養(yǎng)成本等問題。
除了前面介紹的注意事項之外,在選擇移液器時還要注意被移送液體介質(zhì)的性質(zhì)??諝庹龎菏揭埔浩鬟m合于移送水質(zhì)液體。吸頭的選擇則要根據(jù)被移送液體介質(zhì)的物理量和化學/物理性質(zhì)。密度很高的液體介質(zhì)(例如汞)、粘度很高的液體介質(zhì)(例如蜂蜜)或者蒸發(fā)氣壓很高的液體介質(zhì)(例如乙醇)應該用活塞式移液器來移送。
原則上有兩種移液方式:正向移液和反向移液(參見圖3)。兩種方式的根本區(qū)別在于使用第一和第二按壓點的時間不同。在正向移液時移液器吸頭完全排空,而反向移液時移液器吸頭中保留一部分液體。應用最多的是正向移液,尤其是水質(zhì)液體。而反向移液最適合于移送高蒸發(fā)壓力或者高粘度液體介質(zhì),在泡沫很多的液體介質(zhì)移液時,反向移液也有著很好的移液效果。
在移液過程中反復發(fā)生相同的典型錯誤、偏差根源參見表1。表1清楚的說明了這些問題是如何產(chǎn)生的,應該如何避免它們的發(fā)生。根據(jù)本文介紹的信息,你應該能夠避免常見的錯誤,從而改進實驗室的移液技術(shù)。