王杏利, 石汶汶, 鞠建偉, 許忠民
(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)圖書館,陜西楊凌 712100; 2.西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院,陜西楊凌 712100)
植物胚是一個(gè)具有全能性的多細(xì)胞結(jié)構(gòu),通常有2種來源,一種是有性的合子胚,另一種是無性的不定胚或體細(xì)胞胚。由不同倍性間雜交或遠(yuǎn)緣雜交獲得的合子胚,在胚發(fā)育的初期階段就會退化或敗育,從而降低了育種效率[1-2]。胚挽救(embryo rescue)技術(shù),是在適宜條件下對植物胚進(jìn)行離體培養(yǎng),使即將退化或敗育的胚繼續(xù)發(fā)育而形成再生植株,是作物育種的一項(xiàng)重要技術(shù),利用該技術(shù)可以有效加快育種進(jìn)程,對于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重要意義。
在信息大爆炸的時(shí)代,隨著網(wǎng)絡(luò)資源的不斷發(fā)展、搜索平臺的不斷完善,面對唾手可得的文獻(xiàn)資源,如何快速聚焦研究熱點(diǎn),確立自己的研究方向,成為科研工作者面對的新問題。為了幫助作物育種工作者了解植物胚挽救的研究熱點(diǎn),本文以超星發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)為數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)源,通過數(shù)據(jù)分析與文本聚類等文獻(xiàn)分析方法對該主題進(jìn)行深入研究。
超星發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)是超星公司開發(fā)出來的一種文獻(xiàn)檢索系統(tǒng),該系統(tǒng)是建立在海量元數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,通過知識挖掘、數(shù)據(jù)倉儲、數(shù)據(jù)分析、資源整合、文獻(xiàn)計(jì)量學(xué)等相關(guān)方法與技術(shù),在一個(gè)文獻(xiàn)檢索平臺上集成整合國內(nèi)各種主要中文數(shù)據(jù)庫資源,其文獻(xiàn)類型包含專利、標(biāo)準(zhǔn)、中文期刊、學(xué)位論文、圖書、會議論文、科技成果、視頻等[3]。通過發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)的分面聚類、知識關(guān)聯(lián)等可以聚焦研究主題的時(shí)序發(fā)展軌跡、研究熱點(diǎn)、核心研究機(jī)構(gòu)或研究團(tuán)隊(duì),從而為相關(guān)研究人員快速了解該領(lǐng)域的研究前沿和熱點(diǎn)、確立自己的研究方向與學(xué)術(shù)交流提供信息參考。
本文以超星發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)為檢索平臺,以主題詞=胚挽救為檢索式進(jìn)行檢索,檢索截止日期為2018年4月5日。
文獻(xiàn)計(jì)量分析(bibliometric analysis)是情報(bào)研究的主要方法之一??萍嘉墨I(xiàn)是科研成果的主要表現(xiàn)形式,其數(shù)量反映科學(xué)研究的活躍程度及科研工作者對某一主題的關(guān)注度,對科技文獻(xiàn)進(jìn)行計(jì)量分析,可以使研究者快速明了相關(guān)主題的研究發(fā)展歷史、聚焦研究方向。
2.1.1 文獻(xiàn)類型及年份分布 依據(jù)上述檢索策略,共檢出文獻(xiàn)597篇,其中期刊論文272篇,學(xué)位論文150篇,會議論文46篇,專利45項(xiàng),科技成果81項(xiàng),其他文獻(xiàn)3篇。從文獻(xiàn)出版年份統(tǒng)計(jì)分析可見,關(guān)于胚挽救技術(shù)的研究起步于20世紀(jì)80年代,進(jìn)入21世紀(jì),隨著我國經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和科研條件的不斷改善,胚挽救研究在植物育種界得到了更廣泛的關(guān)注。在2000—2009年的10年間,有221篇論文;在2010—2017年,相關(guān)文獻(xiàn)量已有271篇。
2.1.2 核心研究機(jī)構(gòu)及地區(qū) 文獻(xiàn)是科研成果的載體,文獻(xiàn)數(shù)量與質(zhì)量是研究機(jī)構(gòu)科研能力的直接體現(xiàn)。通過對檢出文獻(xiàn)的研究機(jī)構(gòu)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析可見,有關(guān)胚挽救的研究主要集中在西北農(nóng)林科技大學(xué)、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)等高校及中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院、云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院等科研院所。省域分布主要為陜西省,占總文獻(xiàn)量的31%,其次為湖北省、河北省。文獻(xiàn)量較多的前10個(gè)省(市)及其占比見圖1。
2.1.3 核心關(guān)鍵詞 關(guān)鍵詞是論文主題的直接體現(xiàn),通過關(guān)鍵詞聚類,特別是可視化后的聚類結(jié)果,可以直觀快速地了解主題的研究熱點(diǎn)及相關(guān)性。對檢出的597篇文獻(xiàn)采用可視化分析,圖2中的球體大小代表關(guān)鍵詞出現(xiàn)頻率,顏色深淺代表關(guān)鍵詞與胚挽救的相關(guān)度。從圖2可以看出,胚挽救研究以葡萄、百合、胚培養(yǎng)、遠(yuǎn)緣雜交、多倍體、組織培養(yǎng)等為主。
2.2.1 早期退化或發(fā)育不良胚的挽救 胚挽救技術(shù)開始于20世紀(jì)初,近年來,有關(guān)離體胚挽救技術(shù)體系研究的方法有3種類型,第1種是離體培養(yǎng),第2種是活體轉(zhuǎn)移,第3種是活體培養(yǎng)。其中,尤以胚發(fā)育初期進(jìn)行離體培養(yǎng)的研究最多,在通常情況下,遠(yuǎn)緣雜交和不同倍性雜交形成的合子胚都可以通過胚挽救形成再生幼苗。胚齡、培養(yǎng)基的成分、培養(yǎng)基中的激素配比等3種因素與離體培養(yǎng)再生幼苗獲得的比例有關(guān)。利用離體胚挽救技術(shù)進(jìn)行早期退化或發(fā)育不良胚的挽救,在桃育種中培育優(yōu)質(zhì)早熟桃品種的效果很好,并取得了成功。萬春雁等為探索胚退化機(jī)制及早熟桃的胚挽救育種方法,以早熟桃品種華光為試驗(yàn)材料,以曙光為對照,從幼果期至后熟期觀測種胚的形態(tài)指標(biāo)和內(nèi)源激素水平變化,結(jié)果表明,華光和曙光的種胚縱、橫徑、質(zhì)量與胚性指數(shù)都與果實(shí)發(fā)育呈正相關(guān),華光品種的上述指標(biāo)在開花后65 d達(dá)到最大值后就迅速下降,但同時(shí)出現(xiàn)胚退化現(xiàn)象,而曙光的上述指標(biāo)仍呈小幅上升的趨勢[4]。郭印山等針對早熟葡萄育種中胚發(fā)育不全的問題而進(jìn)行的早熟葡萄胚搶救技術(shù)研究表明,影響各個(gè)組合早熟葡萄雜交后代成苗率最重要的因素是取胚時(shí)期[5-7]。
2.2.2 克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 植物多倍體育種和遠(yuǎn)緣雜交過程中常會出現(xiàn)胚敗育現(xiàn)象,造成胚敗育的有多種因素,如幼胚起源、胚乳與胚囊發(fā)育異常、激素與營養(yǎng)供應(yīng)失調(diào)、基因調(diào)控和酶失活等。由于遠(yuǎn)緣雜交的合子胚和胚乳發(fā)育不協(xié)調(diào),結(jié)果將會導(dǎo)致雜種胚退化或者敗育,因此,胚挽救要在雜種胚退化或敗育前進(jìn)行離體培養(yǎng),這是進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交獲得新種質(zhì)一種重要途徑[8-9]。選育植物新品種時(shí),遠(yuǎn)緣雜交技術(shù)通常是將野生種和野生近緣種的優(yōu)良基因,通過雜交技術(shù)整合到優(yōu)質(zhì)栽培品種中,或者將不同種屬優(yōu)良基因通過雜交重組選育出優(yōu)質(zhì)多抗植物新品種,然而遠(yuǎn)緣雜交通常不親和,而利用胚挽救技術(shù)則可克服這種現(xiàn)象。孫亮等以富士蘋果為母本、金二十世紀(jì)梨和京白梨為父本進(jìn)行屬間雜交試驗(yàn),以未授粉正常管理的果實(shí)為對照對授粉果實(shí)進(jìn)行生物學(xué)觀察,并對幼胚進(jìn)行挽救培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),以金二十世紀(jì)梨為父本的雜交果坐果率為4.83%,以京白梨為父本的未坐果;雜交果實(shí)前期發(fā)育快,果實(shí)大于對照,后期發(fā)育慢,果實(shí)小于對照;果形指數(shù)前期小于對照,后期大于對照[10]。2009年扈新民等以甘藍(lán)顯性雄性不育系作母本,以蘿卜自交系作父本進(jìn)行授粉雜交,對胚珠、子房進(jìn)行離體培養(yǎng),結(jié)果表明,胚珠培養(yǎng)的效果較子房培養(yǎng)好,子房培養(yǎng)僅獲得3株雜交苗,胚珠培養(yǎng)各處理共獲得29株雜交苗[11]。趙艷艷等為將油菜中根腫病抗性基因CRR導(dǎo)入甘藍(lán)從而獲得抗根腫病的結(jié)球甘藍(lán)材料,以二倍體結(jié)球甘藍(lán)與四倍體人工合成油菜為親本進(jìn)行正反雜交,采用MS和B5培養(yǎng)基對雜交子房和胚珠進(jìn)行胚挽救試驗(yàn),研究不同取樣時(shí)期、培養(yǎng)基、基因型及暗處理對胚珠萌發(fā)率的影響,并采用流式細(xì)胞儀法對雜交后代幼苗倍性進(jìn)行初步鑒定,結(jié)果表明,胚珠培養(yǎng)優(yōu)于子房培養(yǎng),以油菜為母本進(jìn)行雜交,獲得57株雜種苗,反交組合只得到7株[12]。張朝君等為獲得OTO(黃天霸×西伯利亞)遠(yuǎn)緣雜交新材料,用東方百合品種西伯利亞與OT型百合黃天霸品種作為試驗(yàn)材料,通過離體受精技術(shù)和不同授粉方式,利用胚挽救進(jìn)行離體培養(yǎng),試驗(yàn)結(jié)果表明,通過非常規(guī)授粉方法進(jìn)行授粉,子房膨大率較高;用常規(guī)方法授粉約15~20 d花瓣隨即枯萎,子房沒有膨大現(xiàn)象[13]。通過子房切斷的方法,黃天霸×西伯利亞子房的膨大率可以達(dá)到50%;采用柱頭嫁接的方法,西伯利亞×黃天霸子房的膨大率只有14%。在正反交試驗(yàn)中,西伯利亞×黃天霸的雜交效果沒有黃天霸×西伯利亞的好,后者成功得到遠(yuǎn)緣雜交材料。
2.2.3 植物新品種的選育 利用離體胚挽救技術(shù)體系選育植物新品種,在無籽葡萄育種方面取得了較大進(jìn)展。無籽葡萄品種一般不能作為雜交母本,用有籽葡萄品種作為雜交母本,在后代中幾乎很難得到無籽類型品系。離體胚挽救可以使用葡萄假單性結(jié)實(shí)的無籽品種作為母本進(jìn)行雜交成為可能[14-17]。陳昌文等通過胚挽救的方法獲得了蟠桃品種中蟠桃10號[18]。殷富有等經(jīng)胚挽救成苗,進(jìn)行回交、自交后育出云資粳41號[8]。此后,植物細(xì)胞工程技術(shù)在農(nóng)作物品種改良和培育中得到廣泛應(yīng)用。孫寧等應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與常規(guī)育種方法進(jìn)行水稻種質(zhì)創(chuàng)新選育的研究,利用花粉培養(yǎng)建立了水稻的堊白性狀近等基因系,并成功選育出津稻294水稻新品系;通過胚挽救技術(shù)進(jìn)行水稻雜交種及突變系的離體胚培養(yǎng),成功獲得了野生水稻與栽培稻雜交后代的永久營養(yǎng)體[19]。在花卉方面,胚挽救也有應(yīng)用,崔光芬等研究得出,金門百合是以O(shè)T百合T11作為雜交母本、以D74作為雜交父本,通過切割柱頭進(jìn)行人工授粉,并結(jié)合離體胚挽救獲得的一種OT百合雜種系切花新品種[20]。顏津?qū)幍冗x育出的迎春1號是利用切割柱頭雜交授粉、胚挽救、組培擴(kuò)繁和種球復(fù)壯等技術(shù),在開花后選取優(yōu)良株系而獲得的百合切花新品種,該品種植株健壯、花大色艷、香味濃郁、商品性好、抗病能力強(qiáng)[21]。
2.2.4 利用胚挽救技術(shù)選育三倍體 三倍體和多倍體植物具有高度不育性,不能形成正常種子,二倍體和四倍體植株雜交后,利用胚挽救進(jìn)行離體培養(yǎng)可以獲得部分三倍體植株。在植物育種方面,柑橘和葡萄的應(yīng)用較多,由于這2種果樹的三倍體果實(shí)具有果大、無籽等優(yōu)良特性,對葡萄二倍體和四倍體進(jìn)行雜交,在幼胚敗育前對雜交種胚珠進(jìn)行離體胚挽救,利用這種胚挽救技術(shù)已經(jīng)獲得大量三倍體葡萄植株。石艷等為選育三倍體無核葡萄新品種,以二倍體歐洲葡萄無核品種愛莫無核、紅寶石無核、黎明無核與歐山雜種北醇以及四倍體歐美雜種藤稔、黑奧林為親本,進(jìn)行了5個(gè)組合的雜交,通過胚挽救技術(shù)獲得雜種幼苗41株,并利用染色體計(jì)數(shù)法與流式細(xì)胞儀等方法對所獲得的再生植株進(jìn)行倍性鑒定,結(jié)果表明,有10株雜種為三倍體,6株為四倍體,4株為非整倍體,其余21株為二倍體[22]。2014年,郭印山等以二倍體葡萄品種和四倍體葡萄品種為親本進(jìn)行正反雜交試驗(yàn),對雜交胚珠進(jìn)行胚挽救,利用染色體計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞儀等對雜交后代幼苗倍性進(jìn)行了鑒定,結(jié)果表明,無核紅寶石×香悅于開花后60 d接種胚珠萌發(fā)率最高,為8.33%,得到雜種再生植株8株,其中有1株為三倍體植株(12.5%);香悅×無核紅寶石在花后83 d接種胚珠萌發(fā)率最高,為29.38%,獲得雜種再生幼苗56株,其中有16株為三倍體幼苗(27.59%)[23]。由于柑橘三倍體植株具有果大、無籽、抗病性強(qiáng)等特性,因而育種者都把三倍體作為一個(gè)重要育種目標(biāo)。雖然獲得柑橘三倍體植株的途徑很多,但是二倍體和四倍體雜交具有一定的優(yōu)勢,該方法可以在短時(shí)間內(nèi)有效地聚合二者的優(yōu)良性狀,所以是柑橘三倍體育種的一種最重要的途徑。高清華等提到,1957年,Ohta等首次對柑橘胚進(jìn)行離體培養(yǎng),并獲得成功,研究結(jié)果表明,以多胚性柑橘品種作母本可獲得成熟種子,但其實(shí)生后代中的雜種苗比例均較低[1]。劉可慧等以3個(gè)柑橘異源四倍體體細(xì)胞雜種為父本,分別與二倍體單胚性沙田柚進(jìn)行屬間雜交,在胚敗育前,利用胚搶救技術(shù)進(jìn)行離體培養(yǎng),利用流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行檢測,結(jié)果表明,獲得的再生植株為柑橘三倍體植株[24]。
2.2.5 胚挽救在分子標(biāo)記方面的應(yīng)用 近幾年來,隨著分子標(biāo)記技術(shù)的快速發(fā)展,進(jìn)一步挖掘野生植物有益基因已經(jīng)日益成為現(xiàn)代植物育種的一條重要途徑[25]。余文貴等采用構(gòu)建野生番茄漸滲系途徑,不但加快了有用性狀篩選,而且可以縮短育種時(shí)間,進(jìn)一步促進(jìn)了數(shù)量性狀遺傳的基礎(chǔ)研究[26]。2005年郭海江等報(bào)道,以歐洲無核葡萄品種作母本、以歐洲普通葡萄品種和中國野生葡萄品種為父本雜交了16個(gè)組合,利用離體胚挽救獲得再生植株55個(gè)[27]。劉仕琴等將長雄野生稻和泰國秈稻RD23雜交,利用離體胚挽救獲得再生植株F1代,隨后利用泰國秈稻RD23作為輪回親本和F1代連續(xù)回交得到BC6群體,并對紅米基因進(jìn)行分子定位研究,為紅米的遺傳基因定位研究奠定了基礎(chǔ)[28]。周國治等通過胚挽救技術(shù)獲得番茄抗根結(jié)線蟲雜種[29]。趙鶴等通過幼胚挽救培養(yǎng)獲得秘魯番茄LA3858植株[30]。
2.3.1 培養(yǎng)時(shí)期 朱際君等認(rèn)為,胚的發(fā)育階段不同,其培養(yǎng)成功的概率也是不同的,胚齡越小,培養(yǎng)成功率越低[31-32]。在胚發(fā)育早期,合子胚其實(shí)完全處于異養(yǎng)狀態(tài),其發(fā)育所需條件和營養(yǎng)要求比較復(fù)雜,離體培養(yǎng)很難成功。可是在胚發(fā)育后期,又會因?yàn)槟阁w內(nèi)發(fā)育不協(xié)調(diào)從而導(dǎo)致幼胚退化或敗育。因而離體培養(yǎng)最好選擇幼胚發(fā)育程度較高,而且生活力最強(qiáng)時(shí)期。董曉玲等利用胚挽救技術(shù)對葡萄無核品種楊格爾的研究發(fā)現(xiàn),在開花后27~33 d間進(jìn)行胚離體培養(yǎng)的成功率較高[15]。李桂榮等以金光杏梅胚為材料的研究結(jié)果表明,金光杏梅在落花后49 d左右進(jìn)行離體培養(yǎng)效果最佳,在此時(shí)期胚乳開始退化,幼胚剛出現(xiàn)畸形,核也開始出現(xiàn)木質(zhì)化,果實(shí)體積達(dá)到總體積的77.9%[33]。顧愛俠等研究認(rèn)為,大白菜和甘藍(lán)進(jìn)行種間雜交,授粉后5~7 d進(jìn)行子房離體培養(yǎng)的效果最好[34]。
2.3.2 培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基 離體胚挽救成功的關(guān)鍵是適宜的培養(yǎng)基。研究表明,植物幼胚的發(fā)育時(shí)期與物種不同,胚挽救需要的培養(yǎng)基也不盡相同。影響離體培養(yǎng)的環(huán)境因子很多,如溫度、pH值與光照度。植物胚在不同發(fā)育時(shí)期需要不同的pH值。Kantharajah等用MS與MT為基本培養(yǎng)基進(jìn)行獼猴桃和柑橘離體培養(yǎng),取得了較好的效果[35]。Carimi等研究表明,在柑橘胚挽救培養(yǎng)時(shí),在培養(yǎng)基中添加麥芽提取物可以提高成苗率[36]。李玉玲等對葡萄雜交胚珠進(jìn)行胚挽救的研究表明,在花前2周噴施5 mg/L 6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)可以提高火洲黑玉的成苗率;在繼代培養(yǎng)基中加入CCC(氯化氯代膽堿)可以壯苗,提高移栽成活率[37]。趙凱等以敗育型無核葡萄為母本、以歐山雜種作父本進(jìn)行人工雜交,對雜交胚珠進(jìn)行離體培養(yǎng),結(jié)果表明,在3種胚珠培養(yǎng)基中,以ER(一種培養(yǎng)基)+500 mg/L水解絡(luò)蛋白(CH)+0.5 mg/L GA3(赤霉素)+1.5 mg/L IAA(吲哚-3-乙酸)培養(yǎng)基的胚發(fā)育率和成苗率最高,其結(jié)果也表明,CH和GA3、IAA的添加對胚發(fā)育率和成苗率均沒有顯著影響[38]。
2.3.3 激素水平 生長調(diào)節(jié)劑在胚挽救中也起著至關(guān)重要的作用,幼胚正常生長需要較低濃度的細(xì)胞分裂素,而高濃度細(xì)胞分裂素會抑制胚生長,甚至?xí)龠M(jìn)胚形成非器官性愈傷組織,胚離體培養(yǎng)過程中細(xì)胞分裂素和生長素分別起到促進(jìn)胚嫩芽分化與生根作用。1984年Wang對草莓胚進(jìn)行離體培養(yǎng)研究,結(jié)果表明,用MS培養(yǎng)基不添加激素僅誘導(dǎo)出愈傷組織,用含有0.5 mg/L BA的MS培養(yǎng)基或5~20 mg/L 2,4-D的MS培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),可以誘導(dǎo)成胚并形成組織[39]。武書哲等以雜交后代未敗育種胚為試驗(yàn)材料進(jìn)行離體胚挽救,研究6-BA對無核葡萄希姆勞特胚發(fā)育的影響,結(jié)果表明,希姆勞特在含有0.5 mg/L 6-BA、1.5 mg/L IAA、0.5 mg/L GA3、5 g/L瓊脂、60 g/L蔗糖、1.0 mg/L活性炭,pH值為5.8的Nitsch培養(yǎng)基中胚發(fā)育成功率最佳[40]。田淑芬等為了研究外源添加物對無核葡萄胚珠發(fā)育與胚培養(yǎng)的影響,以希姆勞特×玫瑰香優(yōu)系、紅寶石無核×玫瑰香優(yōu)系雜交胚為試驗(yàn)材料,研究 6-BA、甘氨酸與活性炭的不同濃度配比對葡萄胚珠生長發(fā)育的影響,結(jié)果表明,在紅寶石無核×玫瑰香優(yōu)系胚發(fā)育率最適激素濃度方面,6-BA為0.5 mg/L,甘氨酸為4.00 mmol/L;在希姆勞特×玫瑰香優(yōu)系雜交胚發(fā)育的最適濃度方面,甘氨酸是 1.00 mmol/L,相應(yīng)的誘導(dǎo)率為17.33%;2個(gè)組合最適的活性炭濃度為1.0 g/L[41]。夏晶等用西伯利亞與黃天霸為親本進(jìn)行百合雜交試驗(yàn),研究親本花粉活力,結(jié)果表明,GA3有利于胚發(fā)育前期迅速萌發(fā),但后期發(fā)育長勢細(xì)弱,不利于成球[42]。杜學(xué)梅等對六月鮮棗幼胚進(jìn)行離體培養(yǎng)研究,用開花后12~82 d的胚進(jìn)行離體培養(yǎng),結(jié)果表明,開花后70~72 d的胚適宜培養(yǎng)基為1/2MS+0.4 mg/L IBA(吲哚丁酸)+0.8 mg/L BA+500 mg/L LH(黃體生成素)+5 mg/L GA3+5%蔗糖,胚培苗經(jīng)過擴(kuò)繁后轉(zhuǎn)入1/2MS+1.0 mg/L IBA+0.06 mg/L IAA+2%蔗糖培養(yǎng)基上,獲得了健壯生根苗,生根苗移栽成活率達(dá)85%以上[43]。
在植物特異種質(zhì)資源創(chuàng)制和新品種選育研究方面,胚挽救技術(shù)應(yīng)用特別廣泛,其發(fā)展速度也很快,可以加快植物育種進(jìn)程。由于每種植物胚的發(fā)育條件差異,同時(shí)影響胚離體培養(yǎng)的因素很多,因而經(jīng)常是不同作物胚挽救技術(shù)差別可能很大,甚至同一作物不同組合的胚挽救技術(shù)也有較大差異,很難一致化和程序化,因此在對植物進(jìn)行胚挽救時(shí)對已有的相關(guān)胚挽救體系進(jìn)行參考,并優(yōu)化各種影響因素。