馬 翀 ， 王 旭

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 ， 北京 海淀 100193)

2019年8月12日，經(jīng)中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心國(guó)家外來(lái)動(dòng)物疫病研究中心確診，新疆維吾爾自治區(qū)伊犁州發(fā)生牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情，這是我國(guó)首次確診發(fā)生該病。經(jīng)當(dāng)?shù)匦竽莲F醫(yī)部門排查，截至8月19日，共在伊犁州察布查爾縣、霍城縣、伊寧市發(fā)現(xiàn)病牛218頭，死亡1頭[1]。

牛結(jié)節(jié)性皮膚病(Lumpy Skin Disease，LSD)，又稱牛結(jié)節(jié)疹或牛疙瘩皮膚病[2-3]，是由山羊痘病毒屬結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(Lumpy Skin Disease Virus， LSDV)引起的傳染病[2-5]，牛和亞洲水牛均可感染[4,6]。羊痘病毒屬引起的疾病可跨國(guó)界傳播，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)曾將本病列為A類疫病[7]，現(xiàn)規(guī)定為必須通報(bào)的重要?jiǎng)游镆卟?；也是我?guó)進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病名錄中規(guī)定的A類疫病[8]，根據(jù)本病的傳播性、致病性、危害性等特點(diǎn)和動(dòng)物防疫法規(guī)定，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將本病暫時(shí)按二類動(dòng)物疫病管理[1]。因本病在我國(guó)首次確診，所以本文整理了部分相關(guān)文獻(xiàn)，以將本病簡(jiǎn)單介紹給讀者，并為防控策略的制訂提供參考依據(jù)。

1 病原

LSDV是痘病毒科(Poxviridae)脊椎動(dòng)物痘病毒亞科(Chordopoxvirinae)山羊痘病毒屬(Capripoxvirus，CaPV)的病毒，同屬成員還有綿羊痘病毒(Sheep pox virus，SPPV)和山羊痘病毒(Goat pox virus，GTPV)。LSDV只有一種血清型，代表毒株為在南非分離到的Neethling株[9]， LSDV、SPPV和GTPV具有血清學(xué)交叉反應(yīng)[4]。LSDV非常穩(wěn)定，幾乎沒(méi)有遺傳變異。

LSDV對(duì)溫度敏感，55 ℃ 2 h、65 ℃ 30 min可失活。可以從在 -80 ℃下保存10年的皮膚病變組織中復(fù)活，在4 ℃下保存的組織培養(yǎng)液中可存活6個(gè)月。LSDV對(duì)強(qiáng)堿性或強(qiáng)酸性環(huán)境敏感。pH值6.6～8.6時(shí)，37 ℃放置5 d后滴度沒(méi)有明顯降低。在28 ℃的磷酸鹽緩沖液中可存活35 d[10-11]。LSDV對(duì)乙醚(20%)、氯仿、福爾馬林(1%)、某些清潔劑(例如十二烷基磺酸鈉)、苯酚(2%，15 min)、次氯酸鈉(2%～3%)、碘化合物(1∶33稀釋)和季銨化合物(0.5%)敏感。在陽(yáng)光直射條件下，LSDV可被紫外線殺滅。但因舍飼牛棚內(nèi)不會(huì)被陽(yáng)光直曬，其內(nèi)污染的LSDV不會(huì)被紫外線殺滅，可以存活幾個(gè)月的時(shí)間[12]。

2 流行病學(xué)

2.1 LSD的流行史 結(jié)節(jié)性皮膚病(LSD)于1929年在贊比亞首次出現(xiàn)，至1988年前一直流行于非洲大陸，造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。1988-1989年之間，埃及和以色列首次確認(rèn)了撒哈拉沙漠以北和非洲大陸以外地區(qū)發(fā)生LSD。2013年后，LSD席卷了整個(gè)中東地區(qū)，并傳播到了土耳其，其后幾年內(nèi)蔓延至歐洲東南部和俄羅斯。2018 年，該病沿著俄羅斯和哈薩克斯坦邊界向東移動(dòng)，2019年8月傳至我國(guó)新疆地區(qū)。至2019年10月，本年度已上報(bào)OIE的LSD疫情為32起，其中我國(guó)和孟加拉國(guó)為首次通報(bào)疫情[15]。

2.2 易感動(dòng)物 除奶牛和肉牛外，亞洲水牛也有自然感染的報(bào)道[4]。皮膚較薄的奶牛品種對(duì)LSDV更易感，而瘤牛和雜交瘤牛等地方性品種可能對(duì)該病毒具有天然抗性。試驗(yàn)感染綿羊和山羊后，接種部位有局部反應(yīng)，但尚無(wú)LSDV自然感染小型反芻動(dòng)物的報(bào)道。黑斑羚和長(zhǎng)頸鹿可在試驗(yàn)性感染后出現(xiàn)LSD的臨床癥狀。研究人員曾在非洲和中東地區(qū)的多種羚羊、角馬和野水牛等野生動(dòng)物檢出過(guò)CaPV、抗體或核酸，但未證實(shí)其為L(zhǎng)SDV感染。

2.3 氣候與地域風(fēng)險(xiǎn) LSD多零星暴發(fā)，可受動(dòng)物的調(diào)運(yùn)或遷徙、免疫狀況以及影響傳播媒介的風(fēng)和降雨模式等因素影響。在熱帶和溫帶地區(qū)，疾病暴發(fā)常呈季節(jié)性。在已報(bào)道發(fā)病的國(guó)家，盡管LSD的發(fā)生有季節(jié)性變化，但一年四季均有病例發(fā)生。研究表明，降水量(正相關(guān))或/和晝夜溫差均值(負(fù)相關(guān))是與LSD暴發(fā)分布相關(guān)的最重要的環(huán)境因素[14]。此外，農(nóng)牧交錯(cuò)帶、城郊結(jié)合部、湖泊周圍、泛洪區(qū)、灌溉區(qū)和農(nóng)業(yè)區(qū)也是LSD的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)[12,14-17]。

3 病原傳播

3.1 接觸傳播 早期研究和田間證據(jù)表明，LSDV無(wú)法通過(guò)直接接觸在動(dòng)物間有效傳播[15,18]，但這一結(jié)果還需要有足夠數(shù)量的動(dòng)物和現(xiàn)代研究方法(例如實(shí)時(shí)PCR)進(jìn)一步驗(yàn)證。有試驗(yàn)證明，LSDV可通過(guò)精液(本交或人工授精)傳播[19]，臨床和亞臨床感染的公牛均可從精液中排出LSDV[15,20]，且可長(zhǎng)時(shí)間排毒。

3.2 節(jié)肢動(dòng)物的媒介作用 間接證據(jù)表明，LSDV可通過(guò)多種節(jié)肢動(dòng)物機(jī)械傳播。LSDV的傳播常與氣候條件和節(jié)肢動(dòng)物的密度有關(guān)，但非必須條件[21-22]。2006年以色列奶牛群中LSD暴發(fā)的動(dòng)態(tài)數(shù)學(xué)模型支持節(jié)肢動(dòng)物是LSDV的傳播媒介的假設(shè)[23]。

研究表明，多種節(jié)肢動(dòng)物有機(jī)會(huì)吸食、攜帶和傳播LSDV[24]，但尚無(wú)節(jié)肢動(dòng)物是LSDV生物傳播媒介的確切證據(jù)。在機(jī)械傳播方式中，病毒通過(guò)昆蟲(chóng)媒介的受污染口器傳播，而并未在節(jié)肢動(dòng)物細(xì)胞或組織中復(fù)制病毒。已證明具尾扇頭蜱(Rhipicephalusappendiculatus)和希伯來(lái)鈍眼蜱(Amblyommahebraeum)[25]雄蟲(chóng)可機(jī)械性傳播LSDV。Lubinga等已報(bào)道LSDV可在脫色扇頭蜱(Rhipicephalusdecoloratus)和具尾扇頭蜱垂直傳播的證據(jù)，并在其蛻變過(guò)程中持續(xù)存在[26-29]。LSDV在蜱中能夠垂直傳播可能具有更重要的流行病學(xué)意義，蜱可能是LSDV在環(huán)境中的維持庫(kù)。廄螫蠅(Stomoxyscalcitrans)等多種蠅類在牧場(chǎng)中廣泛存在，雖已證明有些蠅可傳播SPPV、GTPV等病原，但能否傳播LSDV尚有待證實(shí)。此外，一些蚊、蠓和牛虻等雖然在吸食感染牛血液后可檢測(cè)到病毒或已證明是其他疾病的傳播媒介，但無(wú)直接證據(jù)表明其能夠傳播LSDV。

研究證明,節(jié)肢動(dòng)物媒介通過(guò)機(jī)械途徑參與了牛個(gè)體間的LSDV傳播，但其具體作用尚不清楚。

3.3 間接傳播 LSDV可在痂皮內(nèi)存活，當(dāng)痂皮從皮膚病灶脫落時(shí)仍具有感染性?，F(xiàn)場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)表明，將健康牛復(fù)養(yǎng)于LSD暴發(fā)后清群的牛舍時(shí)，它們會(huì)在1-2周內(nèi)發(fā)病，表明病毒在傳播媒介、環(huán)境或二者中均持續(xù)存在[4]。在疫苗免疫或注射治療的過(guò)程中，如果不更換針頭，可能會(huì)通過(guò)被污染的針頭造成醫(yī)源性的群內(nèi)或群間傳播[4]。

4 臨床癥狀

自然暴發(fā)和試驗(yàn)感染的LSD患牛，疾病表現(xiàn)出的嚴(yán)重程度和臨床癥狀有很大差異。本病的臨床表現(xiàn)首先是發(fā)熱(40～41.5 ℃)、溢淚、食欲減退、精神沉郁和不愿意運(yùn)動(dòng)。試驗(yàn)感染牛的潛伏期為4-7 d，自然感染牛的潛伏期可長(zhǎng)達(dá)5周[4]，首先表現(xiàn)出溢淚和流涕、淺表淋巴結(jié)腫大，其后出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，并在數(shù)天內(nèi)呈稽留熱表現(xiàn)。如患畜為奶牛，可見(jiàn)產(chǎn)奶量驟降。發(fā)熱癥狀持續(xù)數(shù)天后，皮膚上出現(xiàn)5～50 mm大小的結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)呈圓形隆起、堅(jiān)實(shí)、界限明顯。相鄰的結(jié)節(jié)可融合成大的不規(guī)則的皮疹。深部結(jié)節(jié)可累及皮膚各層，包括表皮、真皮和皮下組織，有時(shí)可累及深部的肌肉組織?；寂Ｆつw病灶的數(shù)量和大小可能表現(xiàn)出很大差異?；寂５慕Y(jié)節(jié)觸診時(shí)有疼痛表現(xiàn)，常先出現(xiàn)在頭部皮膚，包括口腔、鼻鏡和眼睛，然后是頸部、軀干部、乳房、生殖器、四肢和尾部的皮膚表面。感染動(dòng)物的結(jié)節(jié)數(shù)量可從單個(gè)結(jié)節(jié)到上千個(gè)(嚴(yán)重感染牛)。之后，皮膚病灶常會(huì)變成栓塞狀壞疽，脫落后在皮膚上留下大的潰瘍?cè)?。?dāng)皮膚結(jié)節(jié)痊愈后，也會(huì)在皮膚上留下永久性的瘢痕。由LSDV或繼發(fā)性細(xì)菌感染引起的乳房炎是常見(jiàn)并發(fā)癥。由于淋巴結(jié)腫大和胸部和腿部腫脹，?？赡懿辉敢膺\(yùn)動(dòng)。當(dāng)病變蔓延至皮膚下面的組織中，例如肌腱和腱鞘，患?？赡馨l(fā)生跛行。發(fā)生LSD的奶牛卵巢靜止、乏情。而感染的公牛，陰囊、陰莖龜頭、包皮黏膜和睪丸實(shí)質(zhì)都會(huì)受到影響。

特征性痘樣病變可見(jiàn)于消化道黏膜和呼吸道黏膜，患牛流涎，鼻液逐漸從漿液性變成黏液膿性。肺部感染可導(dǎo)致原發(fā)性或繼發(fā)性肺炎，患牛呼吸迫促?？梢?jiàn)結(jié)膜炎和眼眵，有時(shí)會(huì)發(fā)生單側(cè)或雙側(cè)潰瘍性角膜炎。剖檢時(shí)，可在整個(gè)消化道和呼吸道以及各種內(nèi)臟的表面都可能發(fā)現(xiàn)病灶；具有多處皮膚病灶的牛，皮下?lián)p傷在剝皮后清晰可見(jiàn)。皮膚上的結(jié)節(jié)堅(jiān)實(shí)，可累及皮下組織和肌肉。急性病理組織學(xué)變化主要包括表皮空泡變性、胞漿內(nèi)包涵體和真皮血管炎。慢性病理組織學(xué)變化包括局部纖維化和組織壞死。

5 診斷

5.1 鑒別診斷 主要與牛皰疹病毒2型(BoHV-2)引起的偽結(jié)節(jié)性皮膚病進(jìn)行鑒別診斷。偽結(jié)節(jié)性皮膚病的臨床表現(xiàn)常較溫和，其特征是結(jié)節(jié)見(jiàn)于淺表，與LSD的早期癥狀類似。針對(duì)皮膚病變，其他需進(jìn)行鑒別的疾病有：嗜皮菌病、皮癬、牛皮疽、感光過(guò)敏、放線菌病、放線桿菌病、蕁麻疹、昆蟲(chóng)叮咬、貝諾蟲(chóng)病、諾卡氏菌病、蠕形螨病、盤尾絲蟲(chóng)病、偽牛痘和牛痘等。黏膜病變的鑒別診斷包括：口蹄疫、藍(lán)舌病、牛病毒性腹瀉(黏膜病)、惡性卡他熱、傳染性牛鼻氣管炎和牛水泡性口腔炎等[4,6,30]。此外，弱毒LSDV活疫苗可能在牛中引起輕微的不良反應(yīng)，表現(xiàn)的癥狀類似于臨床型LSD[4]。

5.2 實(shí)驗(yàn)室診斷 多種方法可用于LSD的實(shí)驗(yàn)室診斷。針對(duì)病原檢測(cè)，既有經(jīng)典的電鏡觀察和病毒分離方法，也有更新的分子生物學(xué)方法，如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)、DNA測(cè)序、嵌套梯度PCR和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(RFLP)相結(jié)合等方法。對(duì)于免疫學(xué)診斷，有病毒中和試驗(yàn)(VN)、間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)、免疫瓊擴(kuò)(AGID)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫印跡(Western Blotting)等。根據(jù)OIE規(guī)定，對(duì)于血清學(xué)診斷，VN是金標(biāo)準(zhǔn)。針對(duì)不同目的的LSD實(shí)驗(yàn)室診斷方法選擇，可參照OIE推薦方法。

在暴發(fā)期間，可用病毒中和試驗(yàn)、免疫過(guò)氧化物酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA)或間接熒光抗體試驗(yàn)(IFAT)等方法進(jìn)行診斷。在流行病間期(即流行病之間的安靜期/年)，難以對(duì)LSD進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)，因?yàn)榇藭r(shí)以細(xì)胞免疫為主，并且當(dāng)前可用的血清學(xué)檢測(cè)可能不足以檢測(cè)輕度和持續(xù)的LSDV感染。

6 防制

6.1 治療 因本病的嚴(yán)重危害性，發(fā)現(xiàn)臨床病例后不建議治療，應(yīng)及時(shí)上報(bào)并撲殺。

6.2 預(yù)防與控制

6.2.1 預(yù)防 對(duì)于LSD的預(yù)防，最佳方法是對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的牛群提前進(jìn)行疫苗免疫。有效的疫苗免疫可在接種后28 d產(chǎn)生保護(hù)作用。同時(shí)對(duì)疫區(qū)嚴(yán)格控制牛群的調(diào)運(yùn)，對(duì)疫區(qū)采取隔離和禁牧，對(duì)疫區(qū)易感動(dòng)物定期驅(qū)蟲(chóng)和消滅蟲(chóng)媒等措施防止疾病擴(kuò)散[4]。目前，弱毒LSDV活疫苗、SPPV或GTPV疫苗已用于LSD的預(yù)防，可使用相應(yīng)的疫苗免疫牛群。

從疫情控制及安全角度考慮，獸醫(yī)行政部門有必要在疾病已傳入國(guó)內(nèi)的情況下提前做好疫苗儲(chǔ)備工作。對(duì)高危地區(qū)可開(kāi)展疫苗免疫，以免疫情進(jìn)一步擴(kuò)大。

6.2.2 控制 (1)控制牛群調(diào)運(yùn):未進(jìn)行疫苗免疫牛的調(diào)運(yùn)是疾病傳播的主要危險(xiǎn)因素,在LSD暴發(fā)期間，應(yīng)嚴(yán)格控制牛的調(diào)運(yùn)，為確保實(shí)施效果，要從立法和執(zhí)法配合層面考慮,一旦懷疑或確認(rèn)該病，必須立即禁止買賣活牛,對(duì)非法交易，應(yīng)處以嚴(yán)厲的處罰,在游牧和輪牧的地區(qū)，應(yīng)至少在轉(zhuǎn)場(chǎng)前28 d給牛接種疫苗,在疫情暴發(fā)期間，未接種疫苗的種畜不得調(diào)運(yùn),只能在限定區(qū)域內(nèi)的屠宰場(chǎng)屠宰牛，避免由運(yùn)輸車輛和蟲(chóng)媒傳播病毒；(2)動(dòng)物撲殺及處置:在許多已發(fā)病的國(guó)家，已經(jīng)采取了全群或部分撲殺政策,政策的制訂與執(zhí)行需考慮國(guó)家和地區(qū)的經(jīng)濟(jì)狀況，避免因撲殺補(bǔ)償與牛的價(jià)格差距過(guò)大而難以有效貫徹,根據(jù)EFSA關(guān)于LSD的應(yīng)急處理建議，接種疫苗對(duì)降低LSDV傳播的控制要優(yōu)于撲殺政策[6],不管選擇哪種撲殺政策，在疫區(qū)進(jìn)行及時(shí)有效的疫苗免疫可有效控制疫情,如果采取全群撲殺政策，疫苗免疫的效果可能更好,撲殺后，死畜要依照國(guó)家法規(guī)進(jìn)行深埋或焚燒處置；(3)人員、設(shè)施和環(huán)境的清潔消毒:如前所述，LSDV非常穩(wěn)定，可以在pH值為6.6～8.6的極冷和干燥環(huán)境中存活,被感染的動(dòng)物皮膚病灶的痂皮脫落至環(huán)境中，可使病毒存活數(shù)月并具有感染力,發(fā)生疫情的牛場(chǎng)、車輛、牛舍和可能受污染的環(huán)境要選用有效的產(chǎn)品進(jìn)行徹底的清潔和消毒,相關(guān)人員也應(yīng)注意清潔及隔離，盡管LSDV對(duì)大多數(shù)消毒劑和清潔劑敏感，但是為了有效地對(duì)牧場(chǎng)設(shè)備設(shè)施進(jìn)行消毒，仍需要機(jī)械清潔設(shè)備設(shè)施的表面(例如表面的污垢、肥料、干草和稻草)。FAO在《Animal Health Manual on Procedures for Disease Eradication by Stamping Out》(FAO，2001年)中給出了對(duì)現(xiàn)場(chǎng)、設(shè)備、設(shè)施和環(huán)境凈化的實(shí)用建議，可參照?qǐng)?zhí)行；(4)蟲(chóng)媒控制:定期或定點(diǎn)殺滅昆蟲(chóng)的措施可減緩機(jī)械傳播的速度，但不能完全阻止，特別是在放牧牧場(chǎng)中，對(duì)于舍飼牛場(chǎng)，可以考慮使用防蟲(chóng)和殺蟲(chóng)措施。清理死水、泥塘和糞污處理池等節(jié)肢動(dòng)物孳生場(chǎng)所，并改善牛場(chǎng)的排水是減少牛及其周圍媒介數(shù)量有效方式；(5)生物安全管理:在臨近地區(qū)發(fā)生疫情時(shí)，應(yīng)將牧場(chǎng)的生物安全管理提至最高等級(jí)，由于LSD可通過(guò)蟲(chóng)媒機(jī)械傳播，所以生物安全管理無(wú)法防止疫情發(fā)生，但可以降低風(fēng)險(xiǎn)，處于潛伏期或有病毒血癥但無(wú)臨床癥狀的新購(gòu)入牛，是將病原引入陰性牛群的主要風(fēng)險(xiǎn)，因此，新購(gòu)入牛的來(lái)源要可信，在混群前要進(jìn)行系統(tǒng)地臨床檢查，且應(yīng)與自有牛群隔離至少28 d，要盡可能減少外來(lái)人員對(duì)牧場(chǎng)參觀、訪問(wèn)、服務(wù)，對(duì)牧場(chǎng)的各個(gè)入口都應(yīng)嚴(yán)格管控，進(jìn)入牧場(chǎng)時(shí)，所有訪客車輛和設(shè)備均應(yīng)徹底清潔、消毒，靴子也應(yīng)徹底清洗，或穿鞋套。進(jìn)入牧場(chǎng)的訪客應(yīng)穿著干凈的一次性防護(hù)服；(6)宣傳及科普:應(yīng)對(duì)一線從業(yè)者，如獸醫(yī)、獸醫(yī)專業(yè)學(xué)生、養(yǎng)牛業(yè)從業(yè)人員、牛販、運(yùn)牛車司機(jī)和配種員宣傳LSD的癥狀及危害，鼓勵(lì)其在發(fā)現(xiàn)疑似病例后盡快上報(bào)，運(yùn)牛車司機(jī)是發(fā)現(xiàn)患牛的最佳人選，可以具體到牧場(chǎng)、屠宰場(chǎng)以及牲畜交易市場(chǎng)的感染牛，鼓勵(lì)其發(fā)現(xiàn)后盡快將疑似病例通知當(dāng)?shù)孬F醫(yī)主管部門；(7)監(jiān)測(cè)方案:監(jiān)測(cè)方案基于主動(dòng)和被動(dòng)臨床監(jiān)測(cè)以及對(duì)可疑病例采集血液樣本、鼻拭子或皮膚活檢進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，在已發(fā)生疫情的邊境地區(qū)設(shè)立監(jiān)測(cè)牧場(chǎng)，加強(qiáng)一線從業(yè)人員的培訓(xùn)，如發(fā)現(xiàn)疑似病例，盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，做到提前預(yù)警預(yù)報(bào)；(8)國(guó)際和地區(qū)貿(mào)易:對(duì)已發(fā)生疫情的國(guó)家的活牛及相關(guān)產(chǎn)品、皮毛原材料和有風(fēng)險(xiǎn)的產(chǎn)品等的進(jìn)口嚴(yán)格檢疫并加強(qiáng)控制，必要時(shí)可暫停交易。要加強(qiáng)高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的活畜交易市場(chǎng)管理，避免疫情傳入或擴(kuò)散。