吳文學(xué) ， 王天坤 ， 王朋朋 ， 張海燕 ， 馬文閣 ， 高 光

(1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 ， 北京 海淀 100193 ； 2.北京市昌平區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ，北京 昌平 102200 ； 3. 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 ， 北京 海淀 100081)

奶牛乳房炎是奶牛乳腺的一種炎癥，通常因細(xì)菌感染而引起[1]。一般根據(jù)臨床癥狀等可將乳房炎分為臨床乳房炎和隱性乳房炎[2]。臨床乳房炎的乳房和乳汁有肉眼可見的臨床變化，常表現(xiàn)為乳區(qū)腫脹，皮膚發(fā)紅，觸診乳房發(fā)熱、有硬塊、疼痛敏感，奶產(chǎn)量減少，乳汁變黃白色，呈血清樣或水樣，內(nèi)有絮狀物或凝塊。檢查可發(fā)現(xiàn)乳汁pH值偏堿性，體細(xì)胞計(jì)數(shù)和氯化物含量均增加。隱性乳房炎的乳房和乳汁通常無肉眼可見的變化，必須采用間接方法對奶樣中炎癥相關(guān)因子進(jìn)行檢查才能確診，如：體細(xì)胞數(shù)上升、電導(dǎo)率增加、牛奶中的酶和其他特定蛋白增加，牛奶中脂肪、乳糖和酪蛋白等組份的含量下降等[3]。進(jìn)行乳房炎檢測或診斷時(shí)，可以從奶罐中采樣進(jìn)行群體水平的檢測，也可以采集每個(gè)乳區(qū)的奶樣或每頭牛各乳區(qū)的混合奶樣，進(jìn)行個(gè)體水平的檢測。

1 群體水平的檢測

1.1 大罐奶體細(xì)胞數(shù)的檢測 體細(xì)胞數(shù)與產(chǎn)奶量、牛奶品質(zhì)密切相關(guān)，也是乳房炎診斷的一個(gè)重要指標(biāo)，因而通過檢測大罐奶中的體細(xì)胞數(shù)可以檢測牛群患隱性乳房炎的狀況[4]。只要乳腺中存在致病微生物，白細(xì)胞就會進(jìn)入腺泡、乳管和乳池中來對抗感染，導(dǎo)致牛奶中的體細(xì)胞數(shù)增加[5]。如果將感染乳區(qū)的牛奶與健康乳區(qū)的牛奶混合，這頭牛所產(chǎn)的牛奶以及大罐中整群牛的牛奶的體細(xì)胞數(shù)都會有所增加。對于大多數(shù)牛場，大罐奶體細(xì)胞數(shù)的理想控制標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)際控制標(biāo)準(zhǔn)是小于20萬/mL[5]。在乳房炎控制較好的牛場，大罐奶體細(xì)胞數(shù)始終會低于10萬/mL。但是，在傳染性病原得到有效控制的牛場，即使大罐奶體細(xì)胞數(shù)低于20萬/mL，也會有環(huán)境性病原菌引起的臨床乳房炎發(fā)生。因?yàn)榄h(huán)境性病原引起的乳房感染通常持續(xù)時(shí)間都很短，牛群的感染率也很低，而且許多臨床型乳房炎患病乳區(qū)所產(chǎn)的牛奶也不會加到奶罐里，所以不會對大罐奶的體細(xì)胞數(shù)產(chǎn)生明顯影響[6]。在這種情況下，每月檢測的大罐奶體細(xì)胞數(shù)或牛場體細(xì)胞數(shù)并不能反映乳區(qū)的長期健康狀況。如果大罐奶體細(xì)胞數(shù)超過20萬/mL，說明這個(gè)牛群的乳房炎發(fā)病率升高。對于大罐奶體細(xì)胞數(shù)很高的牛群，應(yīng)采取有效的乳房炎控制措施來逐步降低體細(xì)胞數(shù)，并通過每月和每年的大罐奶體細(xì)胞數(shù)記錄來評估控制效果。

1.2 臨床乳房炎的發(fā)病率 由于大罐奶體細(xì)胞數(shù)無法反映牛群整體臨床乳房炎的情況，必須通過臨床乳房炎的發(fā)病率記錄來正確評價(jià)牛場的乳房炎感染情況。在此基礎(chǔ)上，綜合考慮臨床癥狀嚴(yán)重程度、泌乳階段、繁殖情況以及其他影響奶牛生產(chǎn)性能和壽命的各種因素，決定是否采取治療措施和選擇最佳治療方案。由于僅根據(jù)治療記錄往往會低估臨床乳房炎的發(fā)病率，所以在統(tǒng)計(jì)分析發(fā)病率時(shí)，不能用乳房炎臨床治療記錄代替發(fā)病記錄。一般而言，普通牛場每月每100頭牛中新發(fā)生臨床乳房炎的奶?？梢赃_(dá)到4頭或5頭，而對于乳房炎控制良好的牛場，每月每100頭奶牛中新發(fā)生臨床乳房炎的病例應(yīng)不超過2例。

1.3 大罐奶的細(xì)菌培養(yǎng) 通過對大罐奶進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，可以得到重要的數(shù)據(jù)信息。例如，根據(jù)細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果可以建立監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)培養(yǎng)鑒定結(jié)果可以分析病原菌的來源。通常情況下，奶樣中的無乳鏈球菌幾乎均來源于已被感染的奶牛，而其他細(xì)菌則主要來源于畜舍環(huán)境，由于擠奶前乳頭清潔消毒不充分或者擠奶器清潔衛(wèi)生不好等原因而污染牛奶[7]。因此，對大罐奶進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的主要意義是鑒定污染牛奶的主要細(xì)菌，為采取措施清除污染源提供指導(dǎo)。

有些奶站和奶牛場會定期從大罐奶中采樣并進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和體細(xì)胞計(jì)數(shù)，用于監(jiān)測牛群乳房炎的狀況。在無感染史的牛場，通過這兩種方法可以早期檢測出新發(fā)的無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌或支原體感染。如果大罐奶中存在這些病原，則可以確定有牛只發(fā)生了乳房感染。但由于是混合后的奶樣，因此無法確定是哪頭牛感染和感染牛的數(shù)量。每月進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)記錄，也可以有效監(jiān)測其他病原感染，或擠奶過程中的問題和飼料衛(wèi)生問題等。為了確保牛奶的質(zhì)量，應(yīng)盡力降低奶中細(xì)菌數(shù)量，將菌數(shù)控制在5 000萬/mL以下[8]。

2 個(gè)體水平的檢測

2.1 檢查乳區(qū)外觀 最好是在擠奶后立即對乳區(qū)進(jìn)行外觀健康狀況檢查，對于出現(xiàn)腫脹和發(fā)熱等急性乳房炎癥狀的乳區(qū)、有瘢痕組織(永久性損傷)的畸形乳區(qū)、或者萎縮的乳區(qū)，要進(jìn)行乳腺檢查[9]。

2.2 檢查奶樣外觀 在擠奶前準(zhǔn)備階段對前3把奶進(jìn)行檢查，可以早期檢測出異常奶和發(fā)病牛只[10]。對于固定在牛頸枷或栓系式牛欄內(nèi)的奶牛，可以將擠出的奶滴到黑色背景板上，如出現(xiàn)變色、絮片、凝乳塊或水樣乳，則判定為異常奶[11]。對于在擠奶臺上的奶牛，可以直接觀察流出的或落在地面上的前3把奶，以避免將感染的牛奶濺到乳頭和乳區(qū)上。

2.3 CMT檢測 通過加利福尼亞乳房炎檢測法(California Mastitis Test，CMT)和威斯康星乳房炎檢測法，可以估算出單頭奶牛的體細(xì)胞數(shù)[12]。CMT檢測反應(yīng)結(jié)果陽性，表示有乳房炎發(fā)生。由于正常乳區(qū)在擠奶過程中也會出現(xiàn)持續(xù)數(shù)小時(shí)的體細(xì)胞數(shù)升高，所以在擠奶后采樣進(jìn)行CMT，通常會出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。為了確保結(jié)果的一致性和可靠性，應(yīng)在擠奶前完成乳頭清潔和棄去前3把奶后，采集奶樣進(jìn)行檢測。

2.4 體細(xì)胞計(jì)數(shù) 自動(dòng)化電子細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和計(jì)算機(jī)記錄系統(tǒng)可以定期報(bào)告每頭泌乳牛的體細(xì)胞數(shù)(每頭牛各乳區(qū)所產(chǎn)牛奶混合后的結(jié)果)，從而對乳房炎的控制過程進(jìn)行監(jiān)測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)控制措施的不足。通過數(shù)據(jù)處理中心，可以查看體細(xì)胞數(shù)升高的奶牛的全部信息，經(jīng)前后對比分析可以估計(jì)新發(fā)的亞臨床感染或慢性感染的奶牛數(shù)，也可以根據(jù)每頭奶牛的體細(xì)胞數(shù)估算出大罐奶體細(xì)胞數(shù)和泌乳期平均體細(xì)胞數(shù)。單頭奶牛對大罐奶體細(xì)胞數(shù)的影響取決于泌乳牛群的規(guī)模，在小規(guī)模牛群的大罐奶中，單頭奶?？赡軙峁?0%以上的體細(xì)胞，淘汰幾頭體細(xì)胞數(shù)高的奶牛有時(shí)可以將大罐奶體細(xì)胞數(shù)降低30%～40%。雖然采用這種辦法可以在短期內(nèi)改善牛奶質(zhì)量，但卻不能代替系統(tǒng)的乳房炎控制計(jì)劃。在有些情況下，例如在感染已經(jīng)治愈但尚未痊愈時(shí)，體細(xì)胞數(shù)仍然會很高。此時(shí)，應(yīng)仔細(xì)鑒別，才能做出準(zhǔn)確診斷。

2.5 細(xì)菌培養(yǎng) 鑒定牛群存在的乳房炎致病微生物，有助于找到傳染源和制訂相應(yīng)的解決方案，這對于充分了解牛群存在的問題、制訂用藥方案以及對個(gè)別奶牛的治療都至關(guān)重要。雖然與檢測每個(gè)乳區(qū)相比，檢測每頭牛各乳區(qū)的混合奶樣的成本較低，但后者無法確定是哪個(gè)乳區(qū)發(fā)生感染，而且在感染細(xì)菌數(shù)量很少時(shí)或確定奶樣污染率時(shí)會出現(xiàn)較大誤差。因此，檢測每個(gè)乳區(qū)的奶樣應(yīng)是首選。在大罐奶體細(xì)胞數(shù)較高的牛群，亞臨床乳房炎感染率通常也很高，此時(shí)選擇CMT計(jì)分或體細(xì)胞數(shù)高的奶牛進(jìn)行微生物培養(yǎng)，是最可靠的診斷方法[13]。對于大罐奶體細(xì)胞數(shù)低但臨床乳房炎發(fā)病率高的牛群，在治療前采集所有臨床乳房炎患病牛的奶樣進(jìn)行微生物培養(yǎng)，比選擇體細(xì)胞數(shù)高的奶牛進(jìn)行微生物培養(yǎng)更有實(shí)際意義。

臨床病例的微生物培養(yǎng)結(jié)果為獸醫(yī)和乳品生產(chǎn)者提供了所有臨床病例及其病因的數(shù)據(jù)記錄，有助于了解牛群的臨床乳房炎問題，有助于早期診斷出牛群中的新感染或嚴(yán)重感染的病例，以便迅速啟動(dòng)控制方案。從臨床病例或體細(xì)胞數(shù)偏高的乳區(qū)中采集的奶樣中，大約30%會檢測不到微生物。在慢性大腸桿菌等細(xì)菌感染的奶樣中，由于細(xì)菌數(shù)很少，使用常規(guī)的培養(yǎng)方法通常無法檢測出來，必須采用特殊的培養(yǎng)方法和/或重復(fù)培養(yǎng)。如果常規(guī)培養(yǎng)結(jié)果始終是陰性，則很有可能是在普通培養(yǎng)基上不能生長的特殊微生物(如支原體等)。一般來說，冷藏24小時(shí)或冷凍保存1個(gè)月內(nèi)的奶樣，均可用于細(xì)菌培養(yǎng)。為了準(zhǔn)確鑒別出需要治療的奶牛(例如無乳鏈球菌感染牛)、需要隔離的奶牛(金黃色葡萄球菌、諾卡氏菌或支原體感染牛)或需要淘汰的奶牛，有時(shí)需要對每頭奶牛都采集奶樣進(jìn)行微生物培養(yǎng)。

在干乳前和產(chǎn)犢后，選擇有代表性的奶牛進(jìn)行奶樣的微生物培養(yǎng)，可用于監(jiān)測干乳期治療方案的效果。從培養(yǎng)物中分離出來的細(xì)菌也可以用于藥敏試驗(yàn)，以指導(dǎo)用藥。

2.6 其他檢測方法 近年來，還出現(xiàn)了一些其他的乳房炎篩查方法和儀器。例如：測量牛奶電導(dǎo)率的自動(dòng)化擠奶設(shè)備或手持儀器、監(jiān)測牛奶中離子濃度(例如鈉、氯和鉀)的儀器、測量N-乙酰-β-D-氨基葡糖苷酶或氯離子濃度的一些化學(xué)檢測方法等。但是，這些方法目前主要用于科研，在奶牛場尚沒有推廣應(yīng)用[14-15]。