羅君琴 王 平 柯甫志 聶振朋 徐建國

（浙江省柑橘研究所 臺州318026）

目前，在我國種植發(fā)展的香酸類柑橘種質(zhì)主要包括檸檬類和香橙類柑橘。檸檬類柑橘品種耐寒適應(yīng)范圍相對較窄，臺州屬于柑橘生產(chǎn)北緣適宜栽培地區(qū)，種植檸檬存在凍害風(fēng)險。香酸類柑橘新種質(zhì)創(chuàng)制研究中，開展香酸類柑橘育種親本種質(zhì)的電導(dǎo)率檢測及耐寒力相關(guān)性考察評價有助于雜種優(yōu)勢育種中目標親本的早期篩選，為新種質(zhì)創(chuàng)制節(jié)約時間和空間，試驗研究意義較大[1]。

1 材料與方法

1.1 供試材料

本研究樣品采集自浙江省柑橘研究所種質(zhì)資源圃收集保存的小萊檬（XLM）、檸檬（01-35）、巴甘檬（BGM）、興津66（XJ66）、尤力克檸檬（YLK）、香橙（XC）、云檸（YN）、北京檸檬（BJ）、德島酸橙（DD）、費姆萊特（FMNL）、卡波蘇（KBS）和棖（Z）共12份香酸類柑橘種質(zhì)（下文均以大寫字母表示種質(zhì)名稱）。

1.2 試驗方法

分別于2016年1月和2月期間，采集長勢較一致的目標柑橘種質(zhì)近稍頂端第3～4節(jié)位葉片約20張，帶回實驗室自來水沖洗干凈，再用去離子水沖洗2遍，濾紙吸干，分別用6mm 規(guī)格的打孔器避開葉片中脈，切取葉片小圓片混合待用。

試驗1：2016年1月，于種質(zhì)資源圃分別采集XLM、01-35、BGM、XJ66、YLK、XC、YN和BJ等12份香酸類柑橘種質(zhì)近稍頂端葉片進行相對電導(dǎo)率比較試驗，試驗2次。每次試驗，分別稱取各種質(zhì)葉片小圓片1±0.002g，裝入烘干的潔凈錐形瓶，分別加入30ml無離子水，包上耐高溫組培瓶封口紙，于震蕩器中搖動6h 后取出測各份種質(zhì)葉片浸出液電導(dǎo)率1；檢測完畢后各處理置于準備好的沸水浴中加熱15min,再次測各處理浸出液電導(dǎo)率2，然后利用公式：相對電導(dǎo)率=電導(dǎo)率1/電導(dǎo)率2×100%，計算分析試驗檢測結(jié)果。每次試驗各種質(zhì)處理重復(fù)2次。

試驗2：2016年2月中旬分別采集01-35、YLK、XC、BJ 四份種質(zhì)近稍頂端葉片開展不同低溫條件下相對電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合試驗[2～4]。試驗時將各種質(zhì)葉片小圓片混合分成6份，每份稱取1±0.002g樣品，分別裝入烘干的潔凈錐形瓶，四份種質(zhì)重復(fù)2次，分別放置于智能低溫培養(yǎng)箱設(shè)定0℃、-2℃、-4℃、-6℃、-8℃、-10℃模擬低溫條件處理6h,再分別加無離子水30ml震蕩均勻后用雷磁電導(dǎo)率儀測各種質(zhì)各低溫處理葉片相對電導(dǎo)率（相對電導(dǎo)率=電導(dǎo)率（室溫）/電導(dǎo)率（沸水）×100%）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

測定數(shù)據(jù)結(jié)合利用Logistic方程、Excel2007趨勢線回歸分析，擬合獲取各被測香酸類種質(zhì)試驗植株的低溫半致死溫度LT50（LT50擬合計算公式=-Lna/b）。

2 結(jié)果與分析

2.112 份香酸類柑橘種質(zhì)冬季葉片相對電導(dǎo)率比較

試驗1中的12份香酸類柑橘種質(zhì)葉片相對電導(dǎo)率結(jié)果如圖1所示，結(jié)果以電導(dǎo)率從大到小排列，被檢測的12份香酸類柑橘種質(zhì)耐寒性強弱順序依次為：DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ、KBS＞BGM、01-35＞XLM，各種質(zhì)之間達到顯著差異（p＜0.05）。其中XLM 相對電導(dǎo)率檢測值最高（93.63%），顯著高于其它11個品種，耐寒性最弱；Z和DD 的相對電導(dǎo)率最低，與其它品種也表現(xiàn)顯著差異，耐寒力最高。

2.24 個香酸類種質(zhì)不同低溫條件下相對電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合試驗

香橙、01-35檸檬、YLK檸檬及BJ檸檬四份種質(zhì)不同低溫處理條件下的葉片相對電導(dǎo)率檢測平均值統(tǒng)計分析結(jié)果分別如表1、表2所示，結(jié)合Excel 趨勢線回歸及Logistic方程數(shù)據(jù)處理，擬合分析各種質(zhì)低溫半致死溫度LT50理論值，結(jié)果分別如圖1至圖4所示。

表1結(jié)合圖2、圖3可擬合分析獲得01-35檸檬、香橙XC 的半致死溫度，預(yù)估值分別為-5.09℃和-9.28℃；同理，表2結(jié)合圖4、圖5可擬合分析獲香YLK檸檬、BJ檸檬的半致死溫度，預(yù)估值分別為-6.63℃和-8.04℃；四份香酸類柑橘種質(zhì)的理論耐寒能力強弱表現(xiàn)為XC＞BJ＞YLK＞01-35。此結(jié)果與2016年春，浙江省柑橘凍害發(fā)生后田間種質(zhì)植株的耐寒表現(xiàn)力調(diào)查結(jié)果基本一致。

表1 香橙、01-35檸檬不同低溫條件下相對電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合

表2 YLK、BJ 檸檬不同低溫條件下相對電導(dǎo)率低溫半致死溫度LT50擬合

圖201 -35檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線性回歸散點圖

圖3 香橙XC利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線性回歸散點圖

圖4 YLK檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線性回歸散點圖

圖5 BJ檸檬利用logistic 方程擬合低溫半致死溫度LT50線性回歸散點圖

3 小結(jié)

當?shù)蜏匕l(fā)生時，植物細胞膜透性增大，電解質(zhì)大量外滲，相對電導(dǎo)率數(shù)據(jù)可初步直觀地反映出植物細胞膜的受傷害程度及其耐寒能力強弱。本試驗研究，初步明確十二份香酸類柑橘種質(zhì)耐寒性強弱順序依次為:DD、Z＞FMNL、YN、XC＞BJ、YLK、XJ＞BGM、01-35＞XLM。

同時，通過低溫人工模擬凍害逆境進行香酸類柑橘種質(zhì)葉片相對電導(dǎo)率檢測，結(jié)合logistic方程、excel 趨勢線回歸數(shù)據(jù)分析，利用目標種質(zhì)葉片電解質(zhì)滲出率隨低溫變化獲得溫度曲線拐點的方法，擬合求取不同目標種質(zhì)的低溫半致死溫度LT50（Semi-lethal temperature）（把低溫曲線拐點作為低溫半致死溫度預(yù)估值）理論值，初步實現(xiàn)了香酸類柑橘種質(zhì)抗寒能力的數(shù)量表達，為香酸類種質(zhì)資源抗寒特性的深入了解及今后的胚搶救育種材料后代耐寒性能的早期篩選提供了一條有效的途徑。