董曉麗，李香串，陳婷婷

(1.山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西 太原 030006；2.山西中醫(yī)藥大學(xué)，山西 太原 030619)

柴胡(BupleurumchinenseDC.)為傘形科柴胡屬植物，是最常用的藥用植物之一。以野生為主，我國主要分布在東北、華北、西北、華中、華東等地區(qū)[1]，性微寒、味苦，具疏散通熱，疏肝解郁，升陽舉氣之功效[2]。目前，商品柴胡以北柴胡為主，其中栽培的占80%以上，野生的不到20%[3]。隨著對柴胡藥材的使用量的增加，我國野生資源逐漸減少，不足以提供市場的需求[4]，人工栽培柴胡的市場占有量越來越大。通過對絳縣迴馬嶺野生和人工栽培柴胡，從性狀、組織結(jié)構(gòu)、有效成分等方面進(jìn)行對比研究，為柴胡資源的開發(fā)利用提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

電子分析天平(上海梅特勒-托利多ME104/02)；高效液相色譜儀(Agilent 1200)；Olympus顯微鏡(BH-2、SZX16)。

1.2 試藥

柴胡皂苷a對照品(批號：110777．201108)，柴胡皂苷d對照品(批號：110778．201208)，對照品均購自中國食品藥品檢定研究院，鹽酸、甲醇、乙醇、氨水均為分析純，乙腈(色譜純)，純水自制。水合氯醛、稀甘油、濃硫酸、硫酸、對二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1∶30)。

1.3 藥材

采自山西省絳縣迴馬嶺村。

2 試驗方法

2.1 藥材性狀鑒別

對人工栽培及野生柴胡，從形狀、大小、顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等方面進(jìn)行詳細(xì)的觀察和描述，并拍照。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 組織切片

取柴胡若干浸泡于蒸餾水中，數(shù)小時后，徒手切成薄片，置于載玻片上滴1～3滴水合氯醛于酒精燈上透化約10 min，再滴1～2滴稀甘油后蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。

2.2.2 粉末鑒別

將柴胡樣品碾成粉末過100目篩，取粉末用水合氯醛和透化片在顯微鏡下進(jìn)行觀察[5]。

2.3 含量測定

以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫。檢測波長為210 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25 ℃[6-7]。

表1 梯度洗脫條件表

取柴胡皂苷a、柴胡皂苷d對照品精密稱定，加甲醇制成每1 mL含柴胡皂苷a 0.4 mg、柴胡皂苷d 0.5 mg的溶液，混勻，即得。取粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加含5%濃氨試液的甲醇溶液25 mL后，密塞，30 ℃水溫超聲處理30 min后，過濾，用甲醇20 mL分兩次洗滌容器和濾渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干后，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。分別用微量進(jìn)樣器精密吸取對照品和供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。按干燥品計算，含柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的總量不得低于0.30%。

3 結(jié) 果

3.1 性狀鑒別

栽培和野生柴胡藥材性狀見圖1～2。

圖1 栽培柴胡藥材性狀

圖2 野生柴胡藥材性狀

由圖1可知：栽培柴胡，根呈圓柱形，根頭部膨大，主根大部分明顯，極少數(shù)不明顯。重0.2～2.2 g，長6.0～18.9 cm，直徑0.10～0.77 cm，頂端殘留0～4個莖基且大部分莖基較少 ，短纖維狀葉基大部分為2個，少部分4個。大部分分枝較多而且分枝較細(xì)。表面黃棕色，具縱皺紋，皮孔較少。質(zhì)脆易折斷，斷面纖維性。氣味香，味微苦。

由圖2可知：野生柴胡，根呈圓柱形，根頭部膨大，主根不明顯，重0.4～9.5 g，長12.1～19.2 cm，直徑0.04～0.77 cm，多分枝，一級分枝為2～14。頂端殘留1～12個莖基，基本無短纖維狀葉基。表面灰棕色，具縱皺紋，皮孔明顯，質(zhì)脆易折斷，斷面纖維性。氣味香，味微苦。

表2 性狀鑒別

由圖1、2及表2可知：人工栽培柴胡與野生柴胡的區(qū)別主要在于：形狀上較順直，分枝較少。表面顏色略淺，皮孔突起不明顯。

3.2 顯微鑒別

3.2.1 組織切片

栽培和野生柴胡橫切面見圖3～4。

圖3 栽培柴胡橫切面

圖4 野生柴胡橫切面

由圖3可知：栽培柴胡根木栓層為數(shù)列細(xì)胞，由3～7層木栓細(xì)胞構(gòu)成，木栓層厚度為270.03～2 211.53 μm；皮層散有油管，少有裂隙；韌皮部有油管，射線較寬；形成層成環(huán)；木質(zhì)部約占三分之一，導(dǎo)管散列；木射線明顯。

由圖4可知：野生柴胡根木栓層為數(shù)列細(xì)胞，由2～6層木栓細(xì)胞構(gòu)成，木栓層厚度224.31～381.04 μm；皮層散有少數(shù)油管；韌皮部有油管，射線較寬；形成層成環(huán)；木纖維明顯。

3.2.2 粉末鑒定

由圖5可知：栽培柴胡粉末為淺灰棕色，木纖維散在，少有成束，長梭形，多斷裂。導(dǎo)管較多，多數(shù)為螺紋導(dǎo)管，少數(shù)為網(wǎng)紋導(dǎo)管。油管少見，有大量黃棕色分泌物。

圖5 栽培柴胡粉末

圖6 野生柴胡粉末

由圖6可知：野生柴胡粉末灰棕色，木纖維散在或成束，長梭形，多斷裂。大量螺紋導(dǎo)未見網(wǎng)紋導(dǎo)管。油管少見，有大量黃色分泌物及分泌管。

3.3 柴胡皂苷a、d含量測定

表3 對照品含量表

圖7 柴胡對照品色譜圖

圖8 柴胡樣品色譜圖

表4 樣品含量表

由圖7、表3和圖8、表4分析可知：人工栽培柴胡和野生柴胡皂苷a+d的含量分別為0、5163%、0.5043%，均高于2015版《中國藥典》規(guī)定的不得少于0.30%的標(biāo)準(zhǔn)，并且人工栽培柴胡指標(biāo)成分含量高于野生柴胡。

4 討 論

性狀及顯微鑒定是中藥鑒定的重要手段之一，在藥材質(zhì)量評價指標(biāo)的選擇上我們采用從性狀、顯微到成分的多重指標(biāo)控制，突破了單一成分控制質(zhì)量的模式，為柴胡的質(zhì)量研究提供合理的依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)人工栽培柴胡與野生柴胡的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀以及內(nèi)含物等特征，差異不大；但人工栽培柴胡在外觀性狀及藥效成分含量上均優(yōu)于野生柴胡，且適生性強，可代替野生柴胡使用，值得在絳縣地區(qū)進(jìn)一步研究并推廣種植。