金蔚，黨勝春

(1.江蘇大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.常熟市第二人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，江蘇 常熟 215500；3.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院 普外科，江蘇 鎮(zhèn)江 212001)

卵巢癌是最致命的婦科腫瘤和第二大癌癥死亡原因，早期手術(shù)切除是卵巢癌有效的治療方法。然而由于卵巢癌早期癥狀不明顯，多數(shù)腫瘤被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)是進(jìn)展期，臨床治療收效甚微[1- 2]。目前雖然對(duì)晚期和轉(zhuǎn)移性卵巢癌的基因靶向治療取得一些進(jìn)步，但療效有限，仍迫切需要確定新的、有效的治療靶點(diǎn)，以改善卵巢癌的預(yù)后。

轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖受體蛋白1(transducin β- like 1 X- linked receptor 1，TBL1XR1)基因產(chǎn)物是大多數(shù)組織中普遍存在的核蛋白，影響腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、進(jìn)展[3- 4]。TBL1XR1的表達(dá)與人類各種癌癥的臨床進(jìn)展及患者生存相關(guān)，在多種惡性腫瘤中TBL1XR1過(guò)表達(dá)，檢測(cè)TBL1XR1有助于預(yù)測(cè)癌癥預(yù)后[5- 6]。

在腫瘤發(fā)生中基因拷貝數(shù)變異(copy number variations，CNV)對(duì)DNA結(jié)構(gòu)變異及基因表達(dá)可產(chǎn)生重要影響。目前美國(guó)癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)已被廣泛用于腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究。本研究利用TCGA及基因型- 組織表達(dá)(genotype- tissue expression，GTEx)等數(shù)據(jù)庫(kù)，研究卵巢癌中轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖受體蛋白1(TBL1XR1)的基因拷貝數(shù)擴(kuò)增情況，探討TBL1XR1參與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制及卵巢癌預(yù)后。

1 數(shù)據(jù)與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源

從cBioPortal(TCGA可視工具h(yuǎn)ttp://www.cbioportal.org/)中“Ovarian Serous Cystad enocarcinoma (TCGA，Provisional)”下載603例卵巢癌患者的多項(xiàng)臨床數(shù)據(jù)，同時(shí)使用GTEx等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行研究。

1.2 數(shù)據(jù)分析

利用cBioPortal分析TBL1XR1的基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與mRNA及蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性。通過(guò)比對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)及GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)，研究TBL1XR1基因在腫瘤與正常組織中表達(dá)之差異，TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與臨床分期、卵巢癌預(yù)后的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

多組TBLIXR1基因表達(dá)比較采用單向方差分析(one- way ANOVA)，進(jìn)一步兩兩比較用SNK法；生存分析采用Kaplan- Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行組間比較；分別計(jì)算Spearman相關(guān)系數(shù)和Pearson相關(guān)系數(shù)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增患者的臨床病理特征

通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)，共收集了594例患者603個(gè)樣本。579例有CNV數(shù)據(jù)，其中166例(28.7%)卵巢癌樣本的TBL1XR1基因拷貝數(shù)發(fā)生擴(kuò)增。TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增患者的年齡為37～87歲，中位年齡為58歲；其中高級(jí)別癌占88.02%，晚期癌占0.82%。

2.2 TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與其mRNA及蛋白表達(dá)的相關(guān)性

樣本的TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與其mRNA表達(dá)[r=0.584(Pearson法)，r=0.590(Spearman法)]及蛋白表達(dá)[r=0.629(Pearson法)，r=0.599(Spearman法)]均呈正相關(guān)，均P<0.01。表明隨著TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增程度的增高，其mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)也隨之升高。

2.3 TBL1XR1基因在腫瘤和正常組織中表達(dá)的差異

對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)426例腫瘤樣本與GTEx數(shù)據(jù)庫(kù)88例組織正常樣本比較后發(fā)現(xiàn)，TBL1XR1基因在卵巢癌組織中表達(dá)顯著高于正常組織(41.63vs. 22.45，P<0.01)。

2.4 TBL1XR1基因表達(dá)與臨床分期的關(guān)系

對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)579例樣本中基因表達(dá)與臨床資料分析發(fā)現(xiàn)，卵巢癌不同臨床分期者TBL1XR1基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.51，P=0.004)，進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，卵巢癌Ⅱ期與Ⅲ期的TBL1XR1基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他臨床分期之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5 TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與卵巢癌患者的生存率及生存時(shí)間的關(guān)系

TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與無(wú)擴(kuò)增者的生存率(OS)及生存時(shí)間見(jiàn)圖1A;TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與無(wú)擴(kuò)增者的無(wú)病生存率(DFS)與無(wú)病生存時(shí)間見(jiàn)圖1B。

A.TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與無(wú)擴(kuò)增者的OS與生存時(shí)間;B.TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增與無(wú)擴(kuò)增者的DFS與無(wú)病生存時(shí)間

圖1TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增對(duì)卵巢癌預(yù)后的影響

不同TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增水平的卵巢癌患者OS差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015 0)；不同TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增水平的DFS的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041 2)。TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增水平高提示預(yù)后不良。

2.6 TBL1XR1基因表達(dá)水平與卵巢癌患者生存率的相關(guān)性

利用在線生存分析平臺(tái)Kaplan- Meier Plotter，結(jié)合TCGA及GEO數(shù)據(jù)庫(kù)TBL1XR1基因表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，不同TBL1XR1基因表達(dá)水平者的OS和DFS差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別P=0.002，P=0.024)，與TBL1XR1低表達(dá)患者相比，高表達(dá)的卵巢癌患者OS和DFS顯著縮短，TBL1XR1基因表達(dá)水平升高提示預(yù)后較差。

3 討 論

臨床上卵巢癌無(wú)特異性癥狀、缺乏有效的篩選方法及可靠的早期診斷方法，因此在發(fā)現(xiàn)時(shí)常常已轉(zhuǎn)移到腹膜腔[7]。盡管目前在手術(shù)和輔助化療方面取得了進(jìn)展，患者的結(jié)局仍然不能令人滿意，晚期患者的OS低于30%。研究卵巢癌新型生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)臨床結(jié)果，為治療提供新的靶點(diǎn)，可以改善卵巢癌的預(yù)后，提高患者的OS。

TBL1XR1是含有F- box/WD40- 重復(fù)的蛋白質(zhì)[8]。人類TBL1XR1基因位于3q26.32，由18個(gè)外顯子組成，長(zhǎng)度為178 119 bps[9]。TBL1XR1作為轉(zhuǎn)錄抑制因子或共抑制因子的交換因子，可影響細(xì)胞生長(zhǎng)、抗凋亡以及調(diào)節(jié)基因抑制和轉(zhuǎn)錄[10- 12]。

研究表明，TBL1XR1在多種人類癌癥的mRNA水平或蛋白質(zhì)水平上表達(dá)升高，TBL1XR1的異常表達(dá)可能有助于癌變和腫瘤進(jìn)展[13]。作為癌癥潛在的預(yù)測(cè)和治療靶點(diǎn)，TBL1XR1蛋白已引起越來(lái)越多的關(guān)注。TBL1XR1可能在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和抗藥性中起重要作用，并且可能是各種癌癥中的后生物標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，隨著TBL1XR1基因拷貝數(shù)擴(kuò)增程度增高，樣本mRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)水平也隨之升高。TBL1XR1基因在卵巢癌組織中表達(dá)顯著高于正常組織，在臨床分期Ⅱ期與Ⅲ期的組織中表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TBL1XR1的基因拷貝數(shù)擴(kuò)增及其基因表達(dá)水平升高，使卵巢癌患者總生存率和無(wú)病生存率降低，提示其是卵巢癌預(yù)后的影響因素。

本研究利用TCGA及GTEx等數(shù)據(jù)庫(kù)，探討TBL1XR1的拷貝數(shù)擴(kuò)增與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系，為研究卵巢癌臨床診治提供了新的分子靶標(biāo)。