成培芳,馬曉芳,云雪艷,王莉梅,胡 健,董同力嘎
(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,內(nèi)蒙古呼和浩特010018)
葡萄屬于葡萄科(Vitaceae),葡萄屬(Vitis L.),是僅次于柑橘的世界第二大漿果類(lèi)水果。葡萄因含有豐富的活性物質(zhì)而具有較高的營(yíng)養(yǎng)和食療價(jià)值,因此,深受廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)[1]。然而由于葡萄果實(shí)皮薄,柔軟且汁液多,因此極易受到微生物的侵害,其中,最常見(jiàn)、危害最嚴(yán)重的病害是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的灰霉病。該病原菌一旦存在,即使在低溫條件下(-0.5℃)也可以迅速傳播并擴(kuò)散至整串葡萄漿果,導(dǎo)致整個(gè)漿果的最終腐敗,從而失去食用價(jià)值和商品價(jià)值。每年因灰霉病造成的葡萄產(chǎn)后損失高達(dá)20%以上[1],成為葡萄采后長(zhǎng)距離貯運(yùn)和貨架保鮮過(guò)程中主要的限制性障礙。
過(guò)去的幾十年,葡萄在采后貯運(yùn)過(guò)程中,常先采用特克多(噻菌靈)等化學(xué)藥劑浸果后再進(jìn)行貯藏[2]。然而,化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用使得病原菌對(duì)農(nóng)藥逐漸產(chǎn)生很強(qiáng)的抗藥性,最終難以徹底有效控制病害的發(fā)生和發(fā)展。同時(shí),隨著消費(fèi)者健康和環(huán)保意識(shí)的不斷增強(qiáng),農(nóng)藥殘留引發(fā)的人體安全問(wèn)題以及農(nóng)藥污染引起的環(huán)境污染問(wèn)題逐漸受到人們的廣泛關(guān)注[3]。世界各國(guó)普遍使用的貯藏方法就是冷藏結(jié)合SO2的熏蒸處理或SO2的逐步釋放等保鮮措施,來(lái)管理和控制灰霉病的發(fā)生[4-5],并且在幾十年的實(shí)踐過(guò)程中發(fā)現(xiàn),SO2氣體對(duì)于灰霉菌有很好的抑制作用[6],例如在密閉環(huán)境中進(jìn)行氣態(tài)SO2熏蒸處理或采用可釋放SO2的保鮮(片材)小袋,均可顯著地控制采后葡萄灰霉病的發(fā)生發(fā)展,但是,對(duì)于一些如紅地球等不耐SO2的葡萄品種來(lái)說(shuō),如果在保鮮過(guò)程中SO2的使用劑量控制不當(dāng),則會(huì)引起葡萄漿果表面不同程度的漂白現(xiàn)象[7],嚴(yán)重的甚至?xí)铀倨咸训拿棺兏癄€。例如,Zoffoli等[8]的研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)氣態(tài) SO2的釋放量超過(guò)3 mL·L-1·h-1,就會(huì)在葡萄漿果表面誘導(dǎo)產(chǎn)生一些用肉眼看不到的縱向微細(xì)裂紋,從而使葡萄在貯藏過(guò)程中汁液不斷滲出,加速葡萄漿果的霉變腐爛,同時(shí)對(duì)葡萄的風(fēng)味也會(huì)產(chǎn)生影響[9]。因此,在使用SO2緩釋墊進(jìn)行葡萄采后灰霉病抑制的過(guò)程中,SO2最佳釋放量的研究,一直是研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。同時(shí),有機(jī)葡萄生產(chǎn)工藝已不再允許SO2和化學(xué)殺菌劑作為葡萄的采后處理方法[10-11]。此外,隨著人們對(duì)無(wú)殘留農(nóng)藥果蔬呼聲的日益高漲以及有機(jī)農(nóng)業(yè)對(duì)SO2化學(xué)保鮮劑的種種限制,研究和開(kāi)發(fā)高效、環(huán)保的可替代SO2型化學(xué)保鮮劑用于控制采后灰霉病的新型保鮮技術(shù)已成為科研人員研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。
本文闡述了葡萄灰霉病特征及葡萄采后灰霉病的發(fā)病癥狀,綜述了SO2替代型生物控制和天然保鮮劑的研究現(xiàn)狀與發(fā)展前景,以期為今后葡萄采后灰霉病的無(wú)公害防治和葡萄貯藏保鮮的實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用提供參考。
葡萄灰霉病主要是由灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)引起的,灰葡萄孢菌是葡萄孢屬中的一類(lèi)絲狀子囊腐植營(yíng)養(yǎng)型真菌,屬半知菌亞門(mén)絲孢目葡萄孢屬[12]。它們以壞死組織為營(yíng)養(yǎng),能殺死植物細(xì)胞,并在植物的壞死組織上生長(zhǎng)發(fā)育,其寄主范圍十分廣泛,能夠引起200多種雙子葉作物和一些觀賞花卉感染灰霉病。灰葡萄孢菌具有多種感染模式,能以菌絲、分生孢子及菌核的形式感染[13]。分生孢子梗具有梗細(xì)長(zhǎng),頂端細(xì)胞可膨大生成許多小梗的特性,而分生孢子是單胞,分布于小梗上而聚集成葡萄果穗狀。因此,當(dāng)菌絲處于不利環(huán)境時(shí),就會(huì)形成菌核,然后在2~25℃條件下萌發(fā)產(chǎn)生分生孢子梗和分生孢子。
灰葡萄孢菌的生長(zhǎng)繁殖具有不確定性和不固定周期性,可在不同生長(zhǎng)時(shí)期、不同溫度下感染不同的植株,感染速度較快,因此,葡萄采后灰霉病的感染存在多種可能,可能是早期果實(shí)的感染所致,也可能是成熟期直接感染,這就給采后灰霉病的防治帶來(lái)了不確定因素,從而增加了防治難度。
貯藏階段,漿果染病早期在果皮上出現(xiàn)直徑2~3 mm的圓形凹陷病斑,果肉仍維持原有硬度,病斑顏色稍淺于周?chē)恼=M織。用手輕擦病斑部位,可見(jiàn)表皮易與果肉分離而發(fā)生局部脫落,如果用手按壓病斑則病處表皮破裂果肉暴露。葡萄一旦染病后病程發(fā)展十分迅速、難以控制。在適宜發(fā)病的環(huán)境條件下幾天后即發(fā)生落粒和果實(shí)軟腐,果皮上開(kāi)始聚積并產(chǎn)生大量灰至淺黃色的菌絲和分生孢子,使果實(shí)完全失去商品價(jià)值。
近年來(lái),為了減少和避免化學(xué)殺菌劑帶來(lái)的健康隱患和環(huán)境污染問(wèn)題,相關(guān)文獻(xiàn)表明,在生物環(huán)境中,利用拮抗微生物進(jìn)行的生物控制技術(shù)在果蔬采后灰霉病的控制方面較傳統(tǒng)的化學(xué)防腐劑有很大的優(yōu)勢(shì)[14-15]。例如,Parafati等[16]研究顯示不同種類(lèi)的酵母菌生物防治劑可不同程度地抑制葡萄漿果采后的發(fā)病率、發(fā)病程度及病變直徑,是一項(xiàng)很有發(fā)展?jié)摿Φ摹盁o(wú)硫”保鮮劑。其中常用的生物防治劑主要有生物真菌和生物細(xì)菌防治劑。生物防治的保鮮機(jī)理主要是微生物可通過(guò)拮抗(Antibiosis)、競(jìng)爭(zhēng)(Competition)、誘導(dǎo)抗性(Induced resistance)等一種或多種機(jī)制聯(lián)合來(lái)抑制其它微生物的生長(zhǎng)[17]。范三紅等[18]的研究表明,洋蔥霍爾德氏菌(Burkholderia contaminans B-1)可有效降低“玫瑰香”葡萄的采后腐爛率,與對(duì)照相比,果梗腐爛率降低69.6%,果肉腐爛指數(shù)降低63.9%。Zahavi等[19]的研究表明,假絲酵母(Candida guilliermondii)對(duì)由灰葡萄孢霉引起的葡萄腐爛具有明顯的抑制作用,與對(duì)照相比,漿果腐爛可減少16%。據(jù)報(bào)道[20],在0℃儲(chǔ)存50 d后,葡萄有孢漢遜酵母(Hansienaspora uvarum)可顯著(p<0.05)降低灰霉病引起的葡萄腐爛率,使自然腐敗從55%降低到15%。此外,如芽孢桿菌對(duì)冷藏條件下的“巨峰”葡萄的采后腐爛率有很好的降低作用,與對(duì)照組相比,在貯藏60 d后可使葡萄的腐爛率降低60.2%。產(chǎn)氣霉菌是一種通過(guò)產(chǎn)生揮發(fā)性化合物而起到防治灰霉病作用的真菌,經(jīng)人工接種的葡萄串置于透氣性好的聚乙烯包裝袋中,在0.5℃的條件下進(jìn)行貯藏,當(dāng)接種劑量分別為5和10 g/kg時(shí),發(fā)病率可分別減小到5%和4%,而未經(jīng)接種處理的葡萄漿果的發(fā)病率為43%[21]。但是,目前生物防治劑使用最大的瓶頸有兩個(gè)方面,一是登記注冊(cè)費(fèi)用和復(fù)雜程度與化學(xué)殺菌劑的使用幾乎相當(dāng),二是生物防治劑的抑菌譜窄,效果緩慢。因此,雖然許多微生物被證實(shí)對(duì)葡萄灰霉病具有拮抗作用,但國(guó)內(nèi)外的這些拮抗菌大多僅僅停留在實(shí)驗(yàn)室研究階段,沒(méi)有實(shí)現(xiàn)真正的商業(yè)化[22]。
以上分別介紹了幾種單獨(dú)用于葡萄采后灰霉病的生物控制抑菌方法,雖然每一種方法都可一定程度地抑制不同品種葡萄的采后灰霉病的發(fā)生發(fā)展,但是相比化學(xué)類(lèi)抗真菌劑的抑菌效果來(lái)說(shuō),兩種或者兩種以上的非化學(xué)抑菌劑的組合使用可能更具競(jìng)爭(zhēng)力。例如Spadaro等[23]的研究發(fā)現(xiàn),在商業(yè)方面,單一的拮抗微生物不能提供令人非常滿意的采后灰霉病抑菌效果,為了達(dá)到較為理想的采后灰霉病抑制效果,一些科研人員嘗試將一些環(huán)境友好的、無(wú)害的化合物與生物拮抗劑組合使用,通過(guò)協(xié)同作用來(lái)控制采后灰霉病的發(fā)?。?4]。Qin 等[25]報(bào)道了采用漢森氏酵母菌結(jié)合水楊酸和碳酸氫鈉對(duì)葡萄進(jìn)行采后處理,并在25℃,相對(duì)濕度90%~95%的條件下進(jìn)行貯藏,相對(duì)于單獨(dú)使用漢森氏酵母菌,漢森氏酵母菌和水楊酸、碳酸氫鈉的結(jié)合使用可顯著抑制采后葡萄灰霉病的發(fā)病率和病斑直徑。
2.2.1 鹽類(lèi) 鹽類(lèi)包括各種金屬的各類(lèi)鹽溶液,在果蔬采前和采后通過(guò)浸漬或噴灑等手段作用于果蔬表面,通過(guò)改變真菌生長(zhǎng)的p H,從而達(dá)到抑菌目的。Qin等[26]研究了采用0.1%~1%不同濃度的以四硼酸鉀形式存在的硼溶液對(duì)鮮食葡萄采后灰霉病的抑制效果,結(jié)果表明,在0℃的條件下貯藏30 d后,1%的四硼酸鉀溶液有最好的抑制效果,可使人工接種的單個(gè)漿果葡萄的腐爛率從40%降低到2%~3%。Gabler[27]采用自來(lái)水作為對(duì)照,分別用不同濃度的碳酸鈉,碳酸氫鈉,碳酸鉀,碳酸氫鉀和碳酸氫銨對(duì)分離的葡萄漿果進(jìn)行處理,研究不同鹽類(lèi)對(duì)不同品種接種漿果的灰霉病發(fā)病率的抑制情況,結(jié)果表明,對(duì)于接種的“來(lái)特”漿果葡萄,在15℃條件貯藏7 d后,碳酸氫銨顯示出最好的抑制效果,可使灰霉病的發(fā)病率由36.8%降低至2.4%。Konuk等[28]的研究表明,采用藻朊酸鹽對(duì)鮮食葡萄進(jìn)行采后涂膜處理,可以顯著地抑制灰霉病的發(fā)生,同時(shí)可以保持更高的總酚含量和抗氧化活性。但是,對(duì)于采用鹽類(lèi)溶液進(jìn)行葡萄采后處理,一個(gè)不容忽視的問(wèn)題就是鹽類(lèi)在漿果表面的殘留問(wèn)題,較為理想的效果是表面的殘留溶液在視覺(jué)上不可見(jiàn),否則會(huì)影響感官評(píng)價(jià)結(jié)果。
2.2.2 殼聚糖 殼聚糖作為一種天然的可食性保鮮材料,由于其有較好的成膜性、氣體選擇透過(guò)性和抗菌性,被廣泛地用做葡萄的采前和采后保鮮包裝處理。Romanazzi等[29]的研究發(fā)現(xiàn),用乙酸溶解的殼聚糖溶液,不管是對(duì)15℃貯藏條件下的單個(gè)漿果,還是0℃貯藏的整小串葡萄簇,在貯藏60 d后,均對(duì)葡萄采后灰霉病具有顯著的抑制效果。Shiri等[30]用0.5%和1%的兩種濃度的殼聚糖對(duì)葡萄進(jìn)行涂膜處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照相比,在0℃的條件下貯藏60 d后,0.5%的殼聚糖溶液可使葡萄的腐爛率降低68.6%,而1%的殼聚糖溶液可降低腐爛率65.1%,由此可見(jiàn),在低溫條件下貯藏,殼聚糖濃度在0.5%~1%范圍內(nèi)變化時(shí),對(duì)葡萄采后由灰霉病引起的腐爛率的抑制沒(méi)有形成顯著差異。
2.2.3 蘆薈膠 蘆薈膠作為一種新型的有效的綠色處理劑被廣泛用于多種果蔬的商業(yè)涂膜保鮮包裝中[31],其保鮮效果與其組成有密切的關(guān)系[32]。蘆薈膠富含多種生物活性物質(zhì),如維生素、酶類(lèi)、礦物質(zhì)、木質(zhì)素、皂苷、水楊酸及酸胺。采用Serrano的專(zhuān)利配方組成,不論是采前還是采后處理,蘆薈膠對(duì)鮮食葡萄的灰霉菌有顯著的抑制效果[33]。Farahi等[34]研究發(fā)現(xiàn)不同體積比的蘆薈膠對(duì)葡萄采后霉變有不同程度的抑制作用,其中體積比為2∶1的蘆薈膠處理組可顯著降低葡萄采后灰霉病的發(fā)病率,同時(shí)也可減少葡萄的失重率和保持較好的感官品質(zhì)。葡萄串在采摘前1 d用蘆薈膠溶液進(jìn)行噴灑處理,然后在2℃下貯藏35 d時(shí),葡萄漿果的爛果率僅為1%,顯著低于對(duì)照組的15%。
2.2.4 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是一類(lèi)與植物激素具有相似生理和生物學(xué)效應(yīng)的物質(zhì),包括人工合成的具有與天然植物激素相似作用的化合物和從生物中提取的天然植物激素,通常主要用來(lái)調(diào)整植株生長(zhǎng)、促進(jìn)坐果和促使果實(shí)膨大。但是,一般使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑后都會(huì)不同程度地降低葡萄的抗病性,并且如果反復(fù)多次使用,有可能會(huì)使灰霉病對(duì)經(jīng)調(diào)節(jié)劑處理后的葡萄結(jié)構(gòu)產(chǎn)生一定的敏感性。例如,當(dāng)Zoffoli對(duì)“湯姆森無(wú)籽”葡萄兩次使用赤霉酸后,葡萄灰霉病的發(fā)病率為1%,但是8次使用赤霉酸并加大使用劑量時(shí),灰霉病的發(fā)病率將會(huì)增加到12%,其主要原因是葡萄漿果對(duì)多次使用的植物調(diào)節(jié)劑赤霉酸產(chǎn)生了敏感性,使葡萄產(chǎn)生不同程度的落粒和裂果,主要表現(xiàn)為漿果表面的微小細(xì)裂紋以及漿果的分裂,另外還會(huì)使果粒膨大,果梗變粗變硬,從而增加灰霉病害的發(fā)病幾率[35]。
2.2.5 植物提取物 植物提取物是以植物為原料,根據(jù)最終提取物的用途,經(jīng)過(guò)物理化學(xué)提取分離過(guò)程,定向獲取和濃集植物中的某一種或多種有效成分,而不改變其有效成分結(jié)構(gòu)而形成的產(chǎn)品。按照提取植物的成分不同,形成甙、酸、多酚、多糖、萜類(lèi)、黃酮、生物堿等;按照性狀不同,可分為植物油、浸膏、粉、晶狀體等。
關(guān)于采用植物提取物來(lái)抑制葡萄采后灰霉病的相關(guān)研究有很多報(bào)道,其中主要集中在各種植物香辛料和中草藥研究上。Xu等[36]的研究發(fā)現(xiàn),采后鮮食葡萄簇采用葡萄柚籽提取物溶液浸泡處理后,以未經(jīng)任何處理組為對(duì)照,在0℃下貯藏4周后,葡萄漿果感染率為6粒/kg,而對(duì)照組為19粒/kg,當(dāng)人工接種灰霉菌后,采用葡萄柚籽提取物處理組的漿果腐爛率為18粒/kg,而對(duì)照組增加到65粒/kg。對(duì)于人為傷害并接種灰霉菌的單個(gè)漿果來(lái)說(shuō),通常用開(kāi)始出現(xiàn)灰霉病癥狀的時(shí)間來(lái)評(píng)價(jià)處理組的抑菌效果。利用這種方法,Tripathi等[37]的研究發(fā)現(xiàn),采用羅勒油、桃李屬和生姜三種不同的香精油進(jìn)行處理后,葡萄漿果開(kāi)始出現(xiàn)灰霉病癥狀的時(shí)間分別為8、9和10 d,而對(duì)照組在4 d就開(kāi)始出現(xiàn)灰霉癥狀。Valero分別采用丁香酚和百里香酚精油對(duì)葡萄簇進(jìn)行浸泡處理,然后在1℃下貯藏56 d后發(fā)現(xiàn),漿果的腐爛率較空白組的50%分別降低了80%和56%[37]。香芹酚對(duì)灰霉菌也有一定的抑制作用,Martínez等[38]研究發(fā)現(xiàn)0.05、0.2、0.5、1.0 mL/L四種不同濃度的香芹酚蒸汽均可完全抑制灰霉菌在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)繁殖,且對(duì)單個(gè)葡萄漿果進(jìn)行貯藏發(fā)現(xiàn),當(dāng)采用最高濃度1.0 mL/L的香芹酚蒸汽處理后,在25℃下貯藏4 d,可使?jié){果的腐爛率由空白組的93%降低到6%。Melgarejo等[39]采用三種不同形式、不同濃度的肉桂葉油研究其對(duì)采后葡萄漿果灰霉菌的抑菌效果,研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)肉桂葉油乳液形式浸泡處理(濃度為5 g·L-1),可顯著降低葡萄漿果的腐爛率;采用肉桂葉油蒸汽噴灑處理較乳液浸泡處理有更好的抑制效果,所有試驗(yàn)濃度均可顯著抑制葡萄漿果的腐爛;而如果采用涂膜處理方式,則在貯藏15 d后,葡萄漿果的腐爛率為0。由此可見(jiàn),肉桂葉油采用蒸汽或涂膜這兩種處理方式可顯著抑制由灰霉菌引起的采后葡萄漿果的腐爛。Gatto等[40]通過(guò)對(duì)不同草本植物提取物的活性進(jìn)行體外和體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),小地榆(Sanguisorba minor)提取液處理對(duì)灰霉菌顯示出最好的抑制效果,其次是園齒木荷提取液;另外,采用花葉滇苦菜(Sonchus asper)提取物對(duì)紅提葡萄進(jìn)行采后處理,相對(duì)于空白組,可使葡萄漿果灰霉病的發(fā)病率降低42.6%。呂明珠等[41]采用0.1%、0.5%、1%三種不同濃度的肉桂精油保鮮液對(duì)紅提葡萄進(jìn)行噴灑處理后置于不同的溫濕度條件下進(jìn)行貯藏發(fā)現(xiàn),肉桂精油保鮮液的抑菌作用在2℃低溫、90%RH的高濕條件下發(fā)揮更充分,經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為1.0%的肉桂精油處理可顯著降低紅提葡萄的爛果率,具有較好的抑菌效果。
由葡萄孢屬引起的灰霉病是葡萄貯運(yùn)過(guò)程中最致命的病害之一,由于其具有腐生性強(qiáng)、寄主范圍廣、潛伏期長(zhǎng)等特點(diǎn),因此,采用化學(xué)殺真菌劑和SO2類(lèi)保鮮劑進(jìn)行防腐保鮮,是目前采后灰霉病防治的主要途徑。然而,隨著有機(jī)葡萄產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展和消費(fèi)者對(duì)化學(xué)殺菌劑在水果表面殘留問(wèn)題的廣泛關(guān)注,高效、安全、環(huán)保的新型SO2替代型保鮮劑的研究與開(kāi)發(fā)成為葡萄采后灰霉病抑制的主要研究方向。生物防治技術(shù)作為一種新型的用于葡萄灰霉病控制的無(wú)公害防治技術(shù),由于存在試驗(yàn)菌株有限、試驗(yàn)場(chǎng)所單一(實(shí)驗(yàn)室或田間),抗菌效果不穩(wěn)定和成本較高等缺陷,因此,很大程度上限制了其在葡萄采后商業(yè)化方面的大量應(yīng)用。今后的研究方向應(yīng)著力于對(duì)現(xiàn)有的生物防治劑進(jìn)行改良處理,篩選種類(lèi)更多的菌株,并通過(guò)建立影響生物活性基因的菌株庫(kù),采取導(dǎo)入基因的方法來(lái)延長(zhǎng)生物防治劑的活性,進(jìn)而提高灰霉病的抗菌效果。
對(duì)于非化學(xué)抑菌劑,通常是一些天然抗菌劑,抑菌效果有限,并且大多數(shù)的非化學(xué)抑菌劑的研究?jī)H停留在實(shí)驗(yàn)研究階段,因此要實(shí)現(xiàn)SO2替代型保鮮劑的廣泛使用,應(yīng)從以下三個(gè)方面努力:一是在使用手段上,將非化學(xué)抑菌劑的采前預(yù)處理作為葡萄采后抑菌的主要手段,同時(shí)加快開(kāi)發(fā)更加有效穩(wěn)定的抑菌劑的研究進(jìn)程,著力于天然保鮮劑的組合或復(fù)配工藝的研究和使用,并通過(guò)進(jìn)行大規(guī)模的活體抑菌實(shí)驗(yàn),逐步擴(kuò)大其實(shí)際商業(yè)化應(yīng)用范圍,提高針對(duì)性和適用性;二是提高消費(fèi)者和零售商的無(wú)農(nóng)藥殘留意識(shí),并加大有機(jī)葡萄產(chǎn)業(yè)的監(jiān)管力度,逐步減少或禁止SO2類(lèi)化學(xué)保鮮劑的使用;三是逐步提高社會(huì)對(duì)SO2替代型保鮮劑商業(yè)化應(yīng)用的接受程度。
SO2替代型保鮮技術(shù)專(zhuān)業(yè)在我國(guó)才剛剛起步,然而,隨著非化學(xué)抑菌劑對(duì)葡萄體外和活體內(nèi)研究的不斷深入,葡萄采后灰霉病防治技術(shù)將日臻完善,發(fā)展?jié)摿薮?,有望最終取代傳統(tǒng)的SO2抑菌技術(shù)。