楊靜雯， 周演根??， 黃 銘， 熊瑩槐， 王 芳,2， 高勤峰,2， 孫大江， 董雙林,2

(1．海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國海洋大學(xué))，山東 青島 266003； 2．青島海洋科學(xué)與技術(shù)國家實(shí)驗(yàn)室，海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266235)

鮭鱒魚類是人工養(yǎng)殖的名貴肉食性魚類，是重要水產(chǎn)養(yǎng)殖種類之一[1]。我國鮭鱒魚類養(yǎng)殖已有五十來年歷史，但目前主要集中在山區(qū)和高原的水庫如龍羊峽水庫或山區(qū)淡水池塘養(yǎng)殖[2-5]。我國海水工廠化養(yǎng)殖鮭鱒魚類則處于初步階段[4，6]。據(jù)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)資料顯示，2014年我國鮭鱒魚養(yǎng)殖產(chǎn)量3.91萬t，我國鮭鱒魚類的進(jìn)口量達(dá)到6萬t左右，國內(nèi)產(chǎn)能占比只為39%，國內(nèi)產(chǎn)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國內(nèi)的消費(fèi)需求。

由于我國海域夏季溫度過高，不存在大型鮭鱒魚類的天然分布，也不適于利用傳統(tǒng)網(wǎng)箱開展養(yǎng)殖。但是，我國黃海中部洼地存在一個(gè)巨大的夏季冷水團(tuán)，面積約13萬km2，底層水溫不高于10 ℃，溶氧充足，水質(zhì)優(yōu)良[7]，可以利用此條件開展大型鮭鱒等魚類規(guī)?；B(yǎng)殖。目前我國科技工作者已開始在開放的黃海冷水團(tuán)海域養(yǎng)殖包括大西洋鮭(Salmosalar)、洄游型硬頭鱒(Oncorhynchusmykiss)和虹鱒(Oncorhynchusmykiss)等鮭鱒魚類。

根據(jù)我國海水溫度變化和分批上市的市場(chǎng)需求，適時(shí)、安全地將淡水中培育的魚種馴化移入海水養(yǎng)殖是鮭鱒魚類養(yǎng)殖的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。Boeuf 等綜述了多種魚類適宜鹽度耐受范圍及最佳生長鹽度范圍[8]。不同種類和不同年齡的魚對(duì)鹽度刺激強(qiáng)度和刺激時(shí)間長短的應(yīng)激反應(yīng)存在差異。鹽度對(duì)魚類生理活動(dòng)的直接作用是影響其滲透壓調(diào)節(jié)，魚類滲透壓調(diào)節(jié)是通過魚體各個(gè)組織器官協(xié)同作用，如消化系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等[9-11]。研究表明，鹽度促進(jìn)或抑制鋸蓋魚(Centropomusparallelus)、瘤背石磺(Onchidiumstruma)、鯔魚(Mugilcephalus)等魚類的消化酶活性來影響其對(duì)食物的消化吸收，從而影響魚類的生長發(fā)育[12-15]。鹽度變化往往引起活性氧的產(chǎn)生，為了防止產(chǎn)生的過量活性氧損害生物體，生物體形成了抗氧化酶防御系統(tǒng)，其主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)等[10, 16-19]。研究表明，虹鱒在海水環(huán)境中肝臟SOD和GSH-PX活性高于淡水環(huán)境，而CAT活性低于淡水環(huán)境[20]，在非最適鹽度范圍內(nèi)，日本鰻鱺(Anguillajaponica)、斜帶石斑魚(Epinepheluscoiodies)等魚類可以通過提高抗氧化酶活性來保護(hù)魚體免受氧化損傷[21- 22]。當(dāng)生物體內(nèi)活性氧自由基攻擊生物膜的多不飽和脂肪酸時(shí)，會(huì)引發(fā)脂質(zhì)過氧化，并最終降解產(chǎn)生MDA[11, 18, 22-23]。黃姑魚(Nibeaalbiflora)、云紋石斑魚(Epinehelusmoara)等在受到鹽度脅迫時(shí)，產(chǎn)生的過量活性氧破壞生物膜結(jié)構(gòu)，使體內(nèi)MDA含量明顯升高。丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)物，它能使膜蛋白等發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，增加膜的通透性，導(dǎo)致生物體的細(xì)胞損傷，因此MDA水平可以判定機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度[11, 18, 23]。

之前研究表明，7～15 g的虹鱒和硬頭鱒在鹽度14和19下獲得更好的生長性能[24]。大麻哈魚(Oncorhynchusketa)幼魚在低鹽度(鹽度0和5)下肝細(xì)胞會(huì)部分破裂，肝組織空泡化嚴(yán)重[25]。與生活在海水相比較而言，牙鲆(Paralichthysolivaceus)短暫暴露在鹽度為10的環(huán)境時(shí)胰蛋白酶活性減弱[13]。鋸蓋魚(C.parallelus)在鹽度15養(yǎng)殖時(shí)堿性蛋白酶和淀粉酶活性更高，具有更好的消化和營養(yǎng)吸收能力[14]，而有關(guān)比較鹽度對(duì)虹鱒和硬頭鱒幼魚消化酶和抗氧化酶活性等的研究尚未見報(bào)道。

熊瑩槐等[26]研究表明，3.6 g左右硬頭鱒滲透調(diào)節(jié)能力強(qiáng)于虹鱒，經(jīng)過逐漸馴化它們最適生長鹽度分別為10和5。目前關(guān)于不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚消化和抗氧化方面的比較研究尚未見報(bào)道，本研究比較分析了不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚腸道和胃組織消化酶和肝臟抗氧化酶活性，以此探究2種鮭鱒魚類對(duì)不同鹽度耐鹽能力的生理變化。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)用虹鱒和硬頭鱒均采自日照市萬澤豐漁業(yè)有限公司鮭鱒魚繁育基地，孵化自丹麥進(jìn)口的三倍體受精卵。實(shí)驗(yàn)虹鱒和硬頭鱒初始體重分別為(3.55±0.03)和(3.57±0.07)g，體長分別為(6.87 ± 0.38)和(6.87 ± 0.35) cm，均為健康活潑個(gè)體。將實(shí)驗(yàn)魚在淡水中暫養(yǎng)14 d，使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)設(shè)置了0、5、10、15、20、25和30共7個(gè)鹽度處理組，分別以S0、S5、S10、S15、S20、S25和S30表示。每個(gè)鹽度處理分別設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)8尾魚。

本實(shí)驗(yàn)在21個(gè)缸(57 L,55 cm×29 cm×36 cm)中進(jìn)行，每缸用氣泵連續(xù)24 h充氧。實(shí)驗(yàn)用水由經(jīng)過沉淀的自然海水(鹽度為30)和淡水(鹽度為0)調(diào)配而成，以每天升高鹽度1～2的速率，分別馴化至5、10、15、20、25和30，至目標(biāo)鹽度后穩(wěn)定7 d進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)期間每天換水一次，日換水率為100%。每天8:00和16:00兩次投喂人工飼料。實(shí)驗(yàn)期間水溫為(16.0±0.5)℃，光照周期L∶D=12∶12。實(shí)驗(yàn)周期為40 d。

1.3 樣品的采集與制備

樣品采集前停食24 h，用麻醉劑MS-222將魚麻醉，之后將魚置于冰盤上解剖，取出腸道、胃組織和肝臟，剔除內(nèi)容物和脂肪，經(jīng)液氮迅速冷凍后于-80 ℃超低溫冰箱保存。測(cè)定前準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量(g)∶體積(mL)= 1∶9的比例加入預(yù)冷生理鹽水，冰浴條件下勻漿，所得勻漿液4 ℃下以3 500 r/min離心10 min，取腸道和胃組織勻漿液的上清液用于消化酶的活力測(cè)定，取肝臟組織勻漿液的上清液用于抗氧化酶活力及丙二醛(MDA)含量的測(cè)定。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

淀粉酶(Amylase)活力定義：組織中每毫克蛋白在37 ℃與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位。脂肪酶(Lipase)活力定義：在37 ℃條件下，每克組織蛋白在本反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活力單位。胰蛋白酶(Trypsin)活力定義：在pH=8.0，37 ℃條件下，每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分鐘變化0.003即為1個(gè)酶活力單位。胃蛋白酶(Pepsin)活力定義：每毫克組織蛋白37 ℃每分鐘分解蛋白生成1 μg氨基酸相當(dāng)于1個(gè)酶活力單位。

超氧化物歧化酶(SOD)用WST-1法測(cè)定，在450 nm處比色測(cè)定吸光度值計(jì)算其活力，活力單位定義為：在本反應(yīng)體系中SOD抑制率達(dá)50% 時(shí)所對(duì)應(yīng)的酶量為一個(gè)SOD活力單位。過氧化氫酶(CAT)用可見光法測(cè)定，在405 nm處測(cè)定H2O2減少的量，活力單位定義為：每毫克組織蛋白每秒鐘分解1 μmol的H2O2的量為一個(gè)活力單位。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活力通過測(cè)定在412 nm波長下谷胱甘肽(GSH)的消耗量計(jì)算得出，活力單位定義：每毫克蛋白質(zhì)，每分鐘扣除非酶反應(yīng)的作用，使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個(gè)酶活力單位。

BCA總蛋白定量：取上清液再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%組織勻漿，待測(cè)。

酶活力、丙二醛及組織總蛋白含量的測(cè)定均用南京建成生物研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有數(shù)據(jù)采用SAS 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, USA)進(jìn)行分析，采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，用Tukey比較組間差異 (Steel and Torrie，1980)。以P<0.05作為差異顯著水平。數(shù)據(jù)采用雙因素方差(Two-way ANOVA)，以確定不同品種和鹽度之間是否存在顯著差異和相互作用。

2 結(jié)果

2.1 比較不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚腸道消化酶活力

腸道中淀粉酶活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒腸道淀粉酶活力變化見圖1a。虹鱒腸道淀粉酶活力隨著鹽度的升高呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢(shì)，在S5組達(dá)到最大值，且顯著高于其它組(P<0.05)。硬頭鱒腸道淀粉酶活力隨著鹽度的升高呈現(xiàn)先升高再降低的趨勢(shì)，在S10組達(dá)到最大值，且顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒腸道淀粉酶在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。在S10、S15、S25和S30組，硬頭鱒腸道淀粉酶活力顯著高于虹鱒(P<0.05)。

表1 鹽度和魚種類對(duì)腸道和胃組織消化酶影響的雙因素分析P值Table 1 P value of two-way ANOVAs for the effects of salinity and species on digestive enzymes in the intestines and stomach

腸道中脂肪酶活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒腸道脂肪酶活力變化見圖1b。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒腸道脂肪酶活力均表現(xiàn)為先升高后降低，分別在S5和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒腸道脂肪酶活力在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。在S10、S15、S25和S30組中，硬頭鱒腸道脂肪酶活力顯著高于虹鱒(P<0.05)。

腸道中胰蛋白酶活力受鹽度的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)，受魚種類的影響作用不顯著(P<0.05)，受兩者的交互作用影響顯著(P<0.05)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒腸道胰蛋白酶活力變化見圖1c。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒腸道胰蛋白酶活力均為先升高后降低，分別在S5和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒腸道胰蛋白酶活力在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。在S10、S20、S25和S30組中，硬頭鱒腸道胰蛋白酶活力顯著高于虹鱒(P<0.05)。

2.2 比較不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚胃組織消化酶活力

胃組織中淀粉酶活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒胃組織淀粉酶活力變化見圖2a。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒胃組織淀粉酶活力均表現(xiàn)為先升高后降低，分別在S5和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒胃組織淀粉酶活力在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒胃組織淀粉酶活力在S10組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

胃組織中脂肪酶活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒胃組織脂肪酶活力變化見圖2b。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒胃組織脂肪酶活力均為先升高后降低，分別在S5和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒胃組織脂肪酶活力在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒胃組織脂肪酶活力在S10組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

胃蛋白酶活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表1)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒胃蛋白酶活力變化見圖2c。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒胃蛋白酶活力均為先升高后降低的變化趨勢(shì)，分別在S5和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒胃蛋白酶活力在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒胃蛋白酶活力在S10和S20組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

(“”表示同一鹽度下虹鱒和硬頭鱒之間差異顯著(P<0.05)，不同小寫字母表示虹鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，大寫字母表示硬頭鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，下同。 Stars () denote a significant difference between rainbow and steelhead trout under corresponding salinity (P<0.05). Different lower-case letters represent significant difference among rainbow trout treatments, while different capital letters denote the significant difference among steelhead trout treatments (P<0.05), the same below.)

圖1 不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚腸道消化酶活力
Fig.1 The digestive enzyme activity in intestine of rainbow and steelhead trout at different salinities

2.3 比較不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚肝臟抗氧化酶活力

肝臟中的SOD活力受鹽度的影響作用顯著(P<0.05)(見表2)，受魚種類的影響作用不顯著(P<0.05)，受兩者的交互作用影響顯著(P<0.05)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒肝臟SOD活力見圖3a。隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒肝臟的SOD活力呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)，且都在S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒肝臟的SOD活力在S5和S15組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒肝臟SOD活力在S25和S30組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

(“”表示同一鹽度下虹鱒和硬頭鱒之間差異顯著(P<0.05)，不同小寫字母表示虹鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，大寫字母表示硬頭鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，下同。Stars () denote a significant difference between rainbow and steelhead trout under corresponding salinity (P<0.05). Different lower-case letters represent significant difference among rainbow trout treatments, while different capital letters denote the significant difference among steelhead trout treatments (P<0.05), the same below.)

圖2 不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚胃組織消化酶活力Fig.2 The digestive enzyme activity in stomach of rainbow and steelhead trout at different salinities

肝臟中的CAT活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表2)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒肝臟CAT活力見圖3b。虹鱒肝臟的CAT活力隨著鹽度的升高先升高后降低，在S5組達(dá)到最大值，除S10組外，S5組CAT活力顯著高于其它組(P<0.05)。硬頭鱒肝臟的CAT活力隨著鹽度的升高先升高后降低，在S10組達(dá)到最大值，除S5組外，S10組CAT活力顯著高于其它組(P<0.05)。硬頭鱒肝臟CAT活力在S20、S25和S30組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

肝臟中的GSH-PX活力受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表2)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒肝臟GSH-PX活力見圖3c。虹鱒肝臟的GSH-PX活力隨著鹽度的升高先降低后升高，而后又降低，在S15組達(dá)到最大值，且顯著高于其它組(P<0.05)。硬頭鱒肝臟的GSH-PX活力隨著鹽度的升高先降低后升高，而后又降低，在S0組達(dá)到最大值，除S5組之外，顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒肝臟的GSH-PX活力在S15和S20組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒肝臟GSH-PX活力在S25和S30組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

(“”表示同一鹽度下虹鱒和硬頭鱒之間差異顯著(P<0.05)，不同小寫字母表示虹鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，大寫字母表示硬頭鱒不同鹽度間差異顯著(P<0.05)，下同。Stars () denote a significant difference between rainbow and steelhead trout under corresponding salinity (P<0.05). Different lower-case letters represent significant difference among rainbow trout treatments, while different capital letters denote the significant difference among steelhead trout treatments (P<0.05), the same below.)

圖3 不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒幼魚肝臟抗氧化酶活力
Fig.3 The antioxidant enzyme activity in liver of rainbow and steelhead trout at different salinities

肝臟中的MDA含量受鹽度、魚種類及其交互作用的影響作用顯著(P<0.05)(見表2)。不同鹽度下虹鱒和硬頭鱒肝臟MDA含量見圖3d。虹鱒肝臟的MDA含量隨著鹽度的升高先升高后降低，在S5組達(dá)到最大值，除S10組外，顯著高于其它組(P<0.05)。硬頭鱒肝臟的MDA含量隨著鹽度的升高先升高后降低，在S10組達(dá)到最大值，且顯著高于其它組(P<0.05)。虹鱒肝臟的MDA含量在S5組顯著高于硬頭鱒(P<0.05)。硬頭鱒肝臟的MDA含量在S20、S25和S30組顯著高于虹鱒(P<0.05)。

3 討論

消化酶主要是由消化腺和消化系統(tǒng)分泌的具有促進(jìn)作用的酶類。在消化酶中，依消化對(duì)象的不同大致可分為蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等幾種[27]，糖類、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入消化道后在消化酶的作用下消化分解，吸收進(jìn)入血液循環(huán)，而后被生物體利用[28]。鹽度變化最直接的影響是引起魚體滲透壓的變化[10, 29-32]，同時(shí)也影響其魚類腸胃消化能力。因此，監(jiān)測(cè)其消化酶活力的變化，可查明不同鹽度下魚體的消化狀態(tài)。研究表明，真鯛(Pagrosomusmajor)幼魚的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶在不同鹽度下的變化趨勢(shì)基本一致，均在鹽度25時(shí)達(dá)到最大值，鹽度的升高或降低，消化酶比活力都隨之下降，其中，鹽度對(duì)脂肪酶的活力影響更大[33]。

在本實(shí)驗(yàn)中，虹鱒和硬頭鱒幼魚腸道和胃組織的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶隨著鹽度的逐漸升高呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，分別在S5組和S10組達(dá)到最大值，均顯著高于其它組?？赏茰y(cè)S5和S10組分別為虹鱒和硬頭鱒消化能力最好的鹽度處理組，補(bǔ)充了用于滲透調(diào)節(jié)的能量，增加了可用于魚體生長的能量。有研究表明，在高于或低于等滲點(diǎn)的環(huán)境中，一定能量必須被消耗來維持與魚體的水鹽平衡，導(dǎo)致餌料和營養(yǎng)分配的利用效率降低，并影響到魚類的生長和發(fā)育[21, 34]。在本實(shí)驗(yàn)中，虹鱒和硬頭鱒幼魚的消化酶分別在S5和S10組達(dá)到最大值，可能是鹽度5和10分別接近虹鱒和硬頭鱒的等滲點(diǎn)，在接近等滲點(diǎn)的鹽度下，滲透調(diào)節(jié)消耗的能量最少，餌料和營養(yǎng)的利用效率增高，消化酶活性也相應(yīng)地升高來加快消化，獲取生長所需的能量。而對(duì)于S25和S30組的虹鱒和硬頭鱒幼魚來說，腸淀粉酶、胃脂肪酶和胃蛋白酶活性都顯著低于其它組，可能是在鹽度25和30時(shí)，需要消耗過多的能量用于維持魚體的水鹽平衡，導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)利用效率很低，消化酶活性因而處于低水平。再者，長期的高鹽脅迫導(dǎo)致魚體的消化組織代謝紊亂，無法通過消化酶活性的調(diào)節(jié)維持正常的消化功能；或是因水體中過高的離子濃度對(duì)消化酶起了抑制作用。有研究表明，許多無機(jī)離子是消化酶的激活劑或抑制劑[35]，無機(jī)離子可直接對(duì)消化酶起作用[36-37]。一定的鹽度刺激可激活消化酶活力，但隨著鹽度的逐漸升高，魚體對(duì)滲透調(diào)節(jié)負(fù)荷加重，進(jìn)而抑制消化酶活性[11, 15, 22]。對(duì)大麻哈魚(Oncorhynchusketa)的研究表明，pH和無機(jī)離子直接對(duì)酶產(chǎn)生作用是鹽度影響消化酶活性的主要原因[25]。而對(duì)洄游型魚類，尤其是廣鹽性生理機(jī)制的太平洋鮭類來說，鹽度作用表現(xiàn)出來的結(jié)果相當(dāng)復(fù)雜，具有較大的個(gè)體差異性[38]。通過對(duì)S20、S25和S30組這些高鹽處理組虹鱒和硬頭鱒腸消化酶活性的對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，除腸脂肪酶的S20組外，其他硬頭鱒腸消化酶活性均顯著高于虹鱒。通過對(duì)高鹽度組(20～30)虹鱒和硬頭鱒胃消化酶活性的對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，只有鹽度20的環(huán)境下，硬頭鱒的胃蛋白酶活性顯著高于虹鱒。由此可以看出，硬頭鱒幼魚在高鹽環(huán)境下的消化能力優(yōu)于虹鱒，可能是在高鹽度下硬頭鱒的滲透調(diào)節(jié)能力強(qiáng)于虹鱒，硬頭鱒抵抗高鹽脅迫表現(xiàn)地更積極，從而會(huì)有更多能量用于消化和生長，這與以往研究中溯河型鮭科魚類滲透調(diào)節(jié)能力強(qiáng)于陸封型種類的結(jié)論相符[39]。與熊瑩槐等[26]研究表明相一致，虹鱒、硬頭鱒幼魚分別在鹽度5和10用于滲透調(diào)節(jié)的能量較少，生長較好；且硬頭鱒滲透調(diào)節(jié)能力強(qiáng)于虹鱒。硬頭鱒作為溯河型鮭科魚類，與陸封型的虹鱒相比，具有更強(qiáng)的鹽度耐受性，所以硬頭鱒消化性能最好的鹽度范圍要比虹鱒高。

肝臟是魚類重要的新陳代謝器官，參與魚體中抗氧化、糖原合成等重要的生理過程[16-18, 40-42]。SOD的功能是將機(jī)體內(nèi)活性氧分解成H2O2和O2，CAT可以將產(chǎn)生的H2O2進(jìn)一步分解為H2O和O2，GSH-PX也能通過催化GSH的氧化偶聯(lián)而除去H2O2，魚體內(nèi)這3種抗氧化酶可以保護(hù)細(xì)胞免受損傷[17, 19, 22, 40, 43]。在本實(shí)驗(yàn)中，虹鱒和硬頭鱒肝臟的SOD活性和CAT活性均先升高后降低，虹鱒和硬頭鱒肝臟的SOD活性均在S10組達(dá)到峰值，且顯著高于其它組，而虹鱒肝臟的CAT活性在S5組達(dá)到最大值，硬頭鱒幼魚肝臟的CAT活性在S10組達(dá)到最大值。而GSH-PX活性隨鹽度的變化與CAT剛好相反，虹鱒和硬頭鱒肝臟的GSH-PX活性隨鹽度的升高，先降低后升高，隨后又降低，在S15組達(dá)到最大值。這可能是隨著鹽度的升高，魚體進(jìn)行滲透調(diào)節(jié)，代謝加快，體內(nèi)產(chǎn)生大量的活性氧自由基，SOD活性升高以清除產(chǎn)生的活性氧，而清除活性氧過程中生成的H2O2由升高的CAT清除，以保護(hù)魚體免受自由基的傷害。在低鹽度組(0～10)，SOD和CAT足以清除產(chǎn)生的活性氧，因此，GSH-PX活性會(huì)降低。隨著鹽度升高，SOD和CAT不足以清除魚體產(chǎn)生的大量活性氧，虹鱒和硬頭鱒會(huì)利用GSH-PX活性升高以清除產(chǎn)生的大量活性氧。對(duì)條石鯛(Oplegnathusfasciatus)幼魚[17]、云紋石斑魚(Epinehelusmoara)[23]和長江刀鱭(Coilianasus)幼魚[10]的研究也發(fā)現(xiàn)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果肝臟中SOD、CAT和GSH-PX活力的變化相似。在高鹽度組(25～30)，SOD、CAT和GSH-PX活性均受到了抑制，可能是鹽度超過了魚體的耐受范圍，過多的活性氧對(duì)魚類的組織造成損害，或是長期的高鹽度脅迫導(dǎo)致魚體內(nèi)的自由基代謝紊亂，進(jìn)而影響其正常的生理活動(dòng)。不同鹽度處理日本鰻鱺(Anguillajaponica)[21]、暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)[19]和條石鯛(Oplegnathusfasciatus)[17]時(shí)，其體內(nèi)SOD活力出現(xiàn)先升高后降低，最后能回到對(duì)照組水平。然而，本實(shí)驗(yàn)中鹽度25和30處理后，其酶活性無法恢復(fù)到淡水組水平，可能是虹鱒和硬頭鱒幼魚難以適應(yīng)高鹽度環(huán)境，在高鹽脅迫下產(chǎn)生的過量活性氧對(duì)魚體造成了不可逆轉(zhuǎn)的損傷，導(dǎo)致魚體代謝紊亂，無法進(jìn)行正常的抗氧化調(diào)節(jié)，影響了魚體正常的生命活動(dòng)。

當(dāng)生物體內(nèi)活性氧自由基攻擊生物膜的多不飽和脂肪酸時(shí)，會(huì)引發(fā)脂質(zhì)過氧化，并最終降解產(chǎn)生MDA[11, 18, 23]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，隨著鹽度的升高，虹鱒和硬頭鱒肝臟的MDA含量呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢(shì)，可看出隨著鹽度的升高引發(fā)的脂質(zhì)過氧化，從而降解產(chǎn)生的MDA含量增多。在本實(shí)驗(yàn)中，MDA含量的變化趨勢(shì)與SOD和CAT活性變化趨勢(shì)相似，在25或30高鹽度組，虹鱒和硬頭鱒肝臟中MDA含量明顯降低，可能是虹鱒和硬頭鱒幼魚的抗氧化系統(tǒng)遭到了損害，已威脅到其健康。對(duì)比虹鱒和硬頭鱒肝臟中三種抗氧化酶和MDA含量可以看出，硬頭鱒對(duì)高鹽的抗氧化反應(yīng)更加積極，說明在高鹽環(huán)境(25～30)下，硬頭鱒比虹鱒幼魚更能調(diào)動(dòng)抗氧化系統(tǒng)來保護(hù)其健康免受損害。

4 結(jié)論

虹鱒和硬頭鱒幼魚分別在鹽度5和10消化酶活性最高，消化能力最好。虹鱒和硬頭鱒幼魚在高鹽環(huán)境下(25～30)的消化和抗氧化能力均較低，但硬頭鱒幼魚在高鹽環(huán)境下的消化和抗氧化能力都強(qiáng)于虹鱒。