李勇，楊小芳，張曉云，王蓉，丁萬隆*

1.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京100193；2.中國中醫(yī)科學院 中藥研究所，北京 100700

人參PanaxginsengC.A.Meyer為五加科Araliaceae人參屬Panax多年生藥用植物，我國傳統(tǒng)名貴中藥材[1]。由鏈格孢菌AlternariapanaxWhetz引起的黑斑病是人參主要病害之一[2]。人參黑斑病造成葉片早期脫落、植株枯萎、不結實、參根和參籽減產，常年發(fā)病率20%～30%，嚴重地塊發(fā)病率超過90%[3]。人參病害防治目前仍主要依賴化學殺菌劑。迄今，農業(yè)部已登記備案可用于人參病害防治的殺菌劑共計18種(http：//www.chinapesticide.gov.cn)，其中嘧菌酯、醚菌酯、異菌脲、代森錳鋅等9種可用于人參黑斑病防治[4]。

中藥材人參農藥殘留問題較為突出，參農盲目選擇殺菌劑，超劑量、超頻次用藥是導致人參農殘超標的根源[5-6]。開展低毒、低殘留化學殺菌劑篩選及其降解規(guī)律研究，擴大殺菌劑的可選范圍，降低每種殺菌劑的使用頻次和累計用量，結合微生物殺菌劑的使用，將有助于人參農殘超標問題的解決。為此，本試驗選取已在農作物黑斑病防治上完成農藥登記的4種殺菌劑，室內開展人參黑斑菌抑菌作用研究，為人參黑斑病田間防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

致病菌：人參黑斑菌AlternariapanaxWhetz，由

吉林農業(yè)大學中藥材學院提供，中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所植保室保存。

殺菌劑：共計9種。其中嘧菌酯、苯醚甲環(huán)唑、代森錳鋅、多菌靈等5種殺菌劑已在人參病害防治上農藥登記，在此作為對照；其余4種殺菌劑已在農作物病害防治上完成農藥登記，但尚未在人參病害防治上登記(表1)。

表1 供試化學殺菌劑

注：SC-懸浮劑；WP-可濕性粉劑；WG-水分散粒劑；?-已在人參病害防治上農藥登記。

1.2 病菌活化及菌餅制備

從斜面培養(yǎng)基挑取少量菌絲接種于PDA平板中心，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)4 d。再從菌落邊緣挑取少量菌絲重新接種到PDA培養(yǎng)基，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)7 d。用φ 5 mm打孔器在靠近菌落邊緣處打取菌餅，用于殺菌劑抑菌活性檢測。

1.3 含藥平板制備

將供試藥劑梯度稀釋成10 000、1000、100、10 μg·mL-1懸浮液，待滅菌后PDA培養(yǎng)基冷卻至50 ℃～55 ℃時，將殺菌劑稀釋液與PDA培養(yǎng)基按1∶99充分混勻后制成含藥平板，加等量無菌水作為空白對照。每種處理4～6次重復。

1.4 抑菌活性測定

采用生長速率法測定殺菌劑的抑菌活性。將病菌接種于含藥平板中心，25 ℃恒溫倒置培養(yǎng)6 d后，十字交叉法測量菌落直徑，并根據(jù)公式計算抑菌率：

(1)

將抑菌率換算成的機率值作為變量‘Y’，質量濃度轉換成質量濃度對數(shù)作為自變量‘X’，求毒力回歸方程Y=bX+a，再根據(jù)公式計算殺菌劑EC50值。

1.5 統(tǒng)計分析

Excel 2007用于試驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

2.1供試殺菌劑對人參黑斑菌的抑菌效果

由表2可知，供試殺菌劑中，新益甲托、多菌靈和金萬霉靈對人參黑斑菌的抑菌效果最佳，100 μg·mL-1時病菌抑制率達100%，10 μg·mL-1時抑制率為71.8%～100%。代森錳鋅、世高、氟菌唑、阿西米達和安泰生對人參黑斑菌也有抑制作用，100 μg·mL-1時病菌抑制率為47.3%～84.3%，10 μg·mL-1時抑制率為19.2%～51.5%。其余供試殺菌劑對人參黑斑菌的抑制效果欠佳。

2.2 供試殺菌劑對人參黑斑菌的毒力

根據(jù)毒力回歸方程，求得供試殺菌劑的EC50值如表3所示。多菌靈、金萬霉靈和新益甲托對人參黑斑菌的毒力最高，EC50值分別為199.5、181.97和96.83 μg·mL-1；其次為世高、代森錳鋅和阿米西達，EC50值分別為1 258.9、2 041.7和3162.3 μg·mL-1。其余殺菌劑的EC50值均偏高。

表2 供試殺菌劑對人參黑斑菌的抑菌效果

注：?表示正在人參病害防治上農藥登記；標題行不同數(shù)值代表菌劑濃度(mg·L-1)；同行不含相同字母表示在P<0.05水平差異具有統(tǒng)計學意義。

表3 供試殺菌劑對人參黑斑菌的毒力檢測結果

3 討論

化學殺菌劑濫用是導致人參農殘超標的根源。篩選高效、低毒、低殘留化學殺菌劑，與環(huán)境友好的微生物殺菌劑配合使用，是降低人參農藥殘留，確保人參產量和品質的有效途徑。本研究對9種已登記備案的高效低毒殺菌劑開展人參黑斑菌室內抑菌活性測定發(fā)現(xiàn)，多菌靈、金萬霉靈、世高、代森錳鋅和阿米西達均對人參黑斑病有較好抑菌效果，這與前人研究報道相符[7-9]。新益甲托盡管對人參黑斑菌有理想的抑菌效果，但其尚未在人參病害上登記備案；多菌靈雖在人參病害上有登記，但防治對象為人參銹腐病和人參灰霉病。因此，需深入開展殺菌劑田間防效及農藥降解動態(tài)等研究，以最終確認其用于防治人參黑斑病的可行性。

另據(jù)研究報道，啶菌惡唑、氟硅唑、嘧霉胺對人參黑斑菌也有較好的田間防病效果[10]。此外，還從人參根際土壤、根、葉中分離到多株對人參黑斑菌有抑菌活性的生防菌株[3，11-13]。上述研究結果更是拓寬了人參黑斑病防治的可選范圍。因此，一方面應加快促成上述有較高毒力的化學殺菌劑在人參黑斑病防治上的合法化使用，將其與已登記殺菌劑輪換使用，盡量降低特定殺菌劑的使用頻次和累積用量；另外還應加快人參黑斑病專用生防菌劑研發(fā)進度，將不同類型殺菌劑的組合使用，確保人參產量及品質前提下，有效降低人參農藥殘留及病菌抗(耐)藥性風險。