高效液相色譜法測定青蒿中東莨菪內(nèi)酯含量

陳虹潔 梁巧

摘 要：東莨菪內(nèi)酯作為一種天然香豆素類化合物，是一種天然的具有明顯的抗炎、祛風(fēng)、止痛和祛痰等功能的物質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥保健等領(lǐng)域。研究發(fā)現(xiàn)，青蒿中也存在東莨菪內(nèi)酯。我國是青蒿比較豐富的國家，因此研究從青蒿中提取東莨菪內(nèi)酯，從資源利用角度和經(jīng)濟(jì)方面具有重要意義。

本文在超聲提取青蒿中東莨菪內(nèi)酯的過程中，建立了以超聲時間、超聲溫度、溶劑濃度以及料液比四個單因素為基礎(chǔ)，進(jìn)行了4因素3水平的正交試驗設(shè)計與綜合分析，并利用高效液相色譜法對最佳工藝條件下提取青蒿中東莨菪內(nèi)酯含量進(jìn)行檢測，為規(guī)?；崛〖兓瘱|莨菪內(nèi)酯提供可以借鑒的資料。

關(guān)鍵詞：青蒿；東莨菪內(nèi)酯；超聲提??；高效液相色譜法

1東莨菪內(nèi)酯的提取與測定

東莨菪內(nèi)酯是一種香豆素類化合物，因為在有機(jī)溶劑中溶解度比較大，所以本試驗利用有機(jī)溶劑提取法從青蒿中提取東莨菪內(nèi)酯，以青蒿為原料，對超聲時間、超聲濃度、溶劑濃度及料液比四因素[1]，利用正交設(shè)計，獲取最佳提取工藝條件，用HPLC法測定東莨菪內(nèi)酯的含量[2]。

1.1樣品中東莨菪內(nèi)酯的提取

利用藥品粉碎機(jī)將青蒿藥材粉碎成粉末狀，過80目篩后，存放于燒杯中。根據(jù)因素水平表1.1所對應(yīng)的超聲時間、超聲溫度、甲醇濃度及料液比，進(jìn)行回流提取，再用中速定量濾紙過濾，濾液承接于25mL容量瓶中，重復(fù)沖洗濾渣后，將溶液定容至25mL，至于避光處存放。

1.1.1標(biāo)準(zhǔn)樣品東莨菪內(nèi)酯含量的測定

分別移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2.0mL，0.062g/L的東莨菪內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液于25mL比色管中，利用甲醇（AR）溶液稀釋至10mL刻度線，搖勻。因為東莨菪內(nèi)酯在306nm處有一特征峰，因此在分光光度計上測定各溶液在306nm波長下的吸收值[3]。

1.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以所測吸光度值A(chǔ)306為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。同樣條件下測定樣品溶液的吸光度A306，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算東莨菪內(nèi)酯的含量[4]。

1.1.3最佳提取條件的確定

以東莨菪內(nèi)酯提取率作為考察指標(biāo)，對數(shù)據(jù)作方差分析，獲得最佳提取工藝方案（最佳超聲時間、最佳超聲溫度、最佳甲醇濃度及最佳料液比）。

1.2 HPLC法測定青蒿提取液中東莨菪內(nèi)酯的含量

①色譜條件

1）色譜柱：Hypersil-ODS2色譜柱（4.6mm*250mm，5um）

2）流動相：（1：4）甲醇（色譜純）

3）檢測波長：306nm

4）壓力：8.0MPa

5）流速：0.9 ml/min

②待測樣品的HPLC測定：

移取1mL東莨菪內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液至10mL容量瓶中，用甲醇（GR）溶液稀釋至刻度線，然后分別精密吸取東莨菪內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液1，3，5，10，15，20μL進(jìn)行HPLC測定，得到峰面積，根據(jù)待測樣品的總體積計算出東莨菪內(nèi)酯的總含量并根據(jù)待測物的原始質(zhì)量計算東莨菪內(nèi)酯百分比。

1.3提取結(jié)果分析

在本實驗過程中對超聲提取中影響青蒿中東莨菪內(nèi)酯的提取率的超聲溫度、超聲時間、甲醇濃度和料液比四個因素進(jìn)行單因素試驗。通過單因素試驗發(fā)現(xiàn)，每個提取參量對青蒿中東莨菪內(nèi)酯的提取率的影響并非是線性的。因此在單因素試驗的基礎(chǔ)上，以青蒿中東莨菪內(nèi)酯的百分含量為試驗的實驗指標(biāo)，利用L9（34）即4因素3水平進(jìn)行正交試驗設(shè)計分析方法，對青蒿中東莨菪內(nèi)酯的超聲提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。又通過極差分析，確定了各個因素對提取率影響大小的順序為：料液比>超聲溫度>甲醇濃度>超聲時間。結(jié)合影響的主要和次要因素，經(jīng)過驗證實驗發(fā)現(xiàn)，當(dāng)實驗條件為超聲溫度50℃，超聲時間30min，甲醇濃度60%，料液比1：48時，東莨菪內(nèi)酯的提取率為最高。隨后通過對標(biāo)準(zhǔn)品以及樣品溶液進(jìn)行精密度、線性關(guān)系、穩(wěn)定性以及重復(fù)性試驗[5]發(fā)現(xiàn)，不管是標(biāo)準(zhǔn)品或是樣品溶液均可利用HPLC可靠并順利的完成樣品溶液濃度的測定。

2 總結(jié)與討論

2.1總結(jié)

本實驗通過以青蒿為原料，采用以超聲時間、超聲溫度、料液比及甲醇濃度為四因素三水平的正交實驗，其中四因素均為可優(yōu)化東莨菪內(nèi)酯的理化極限的條件，使得正交實驗數(shù)據(jù)更為可靠，得到超聲提取東莨菪內(nèi)酯的最佳工藝條件：超聲溫度30℃，超聲時間30min，甲醇濃度60%及料液比1：48。在高效液相色譜法檢測過程中，通過對精密度、重復(fù)性、線性回歸以及穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)該色譜條件下精密度、穩(wěn)定性以及重復(fù)性均良好，且線性關(guān)系較好，得到青蒿中東莨菪內(nèi)酯的含量高至0.0819mg/g。

2.2討論

提取東莨菪內(nèi)酯時，易志彪[6]、林永德[7]、張紫佳[8]等研究者多以提取方法、提取次數(shù)、提取溶劑、提取前水解時間、水解溫度等因素考慮。對比本實驗方案發(fā)現(xiàn)，甲醇是提取較好的提取溶劑；超聲提取為操作最簡單、可行性最強(qiáng)的提取方法；在以超聲提取為前提下，料液比、超聲時間、超聲溫度及甲醇濃度為最具影響的四因素。

HPLC法測定東莨菪內(nèi)酯時，易志彪[6]、林永德[7]、劉偉[9]等使用的流動相大多為不同比例的水、冰醋酸及乙腈，但觀察發(fā)現(xiàn)，（1：4）甲醇為流動相時，分離情況良好，出峰情況良好。

用紫外分光光度法測定東莨菪內(nèi)酯，雖然方便快速，但精確度不夠，只能作為參考，尤其是大批量從數(shù)據(jù)篩選的時候，用高效液相檢測的分辨率和靈敏度高，重復(fù)性好，應(yīng)該范圍相對廣[10]。在實驗中，采用HPLC法，通過比較標(biāo)準(zhǔn)樣品的圖譜，可以很直觀的鑒定出東莨菪內(nèi)酯是否存在以及含量。

參考文獻(xiàn)：

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作者簡介：

第一作者，陳虹潔，（1989.4-）女，漢族，重慶市，本科，重慶科技學(xué)院，助教，食品安全與衛(wèi)生，重慶輕工職業(yè)學(xué)院。

第二作者，梁巧，（1988.1）女，漢族，重慶市，本科，重慶大學(xué)，助教，食品安全與衛(wèi)生，重慶輕工職業(yè)學(xué)院。