薛穎+高峰+張克勤+肖鳳艷

摘要：本試驗(yàn)以總黃酮的提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)法篩選烏腺金絲桃總黃酮超聲提取最佳工藝。結(jié)果表明：超聲提取總黃酮的影響因素順序?yàn)橐掖紳舛?溫度>超聲功率>提取時(shí)間>料液比，最佳工藝條件是用樣品22倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇，采用超聲功率120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

關(guān)鍵詞：烏腺金絲桃;總黃酮;超聲提取;正交設(shè)計(jì)

基金項(xiàng)目：吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目（2015008）

中圖分類號(hào)： S567 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? DOI編號(hào)： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.043

烏腺金絲桃是藤黃科草本植物，功效為鎮(zhèn)痛、止血、通乳，主要應(yīng)用于吐血、子宮出血、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、神經(jīng)痛、跌打損傷、乳腺炎[1]。研究表明，其具有治療心臟病、抗腫瘤等作用，主要藥效物質(zhì)為黃酮類化合物[2，3]。黃酮類化合物因其具有抗菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、保肝、利尿、調(diào)節(jié)血管滲透性、延緩衰老、防護(hù)紫外線損傷等廣譜的藥理作用引人矚目[4]。鑒于烏腺金絲桃總黃酮提取工藝的研究少見報(bào)道[5]，且用超聲法從烏腺金絲桃中提取總黃酮的研究未見文獻(xiàn)報(bào)道，筆者在本試驗(yàn)中采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)影響其提取率的多個(gè)因素進(jìn)行了考察，以期優(yōu)選出超聲法提取烏腺金絲總黃酮的最佳工藝。

1 材料

1.1 試劑與材料

本試驗(yàn)材料為烏腺金絲桃葉，于2015年9月采自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院左家校區(qū)烏腺金絲桃試驗(yàn)田，鼓風(fēng)烘干（50℃）備用。金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品;無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉。

1.2 儀器

電熱鼓風(fēng)干燥箱、 電子分析天平、循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗器、紫外可見分光光度計(jì)。

2方法

2.1試驗(yàn)流程

樣品稱重超聲提取抽濾濾液濃縮定容離心測(cè)定含量計(jì)算提取率。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

精密稱取金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品3.8毫克，溶解于甲醇中，制成濃度為380微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)品母液。

2.3 空白溶液的配制

取甲醇0.5毫升，加入5% NaNO2溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，加入10% Al（NO3）3溶液0.3毫升，搖勻，放置6分鐘，再加入4% NaOH溶液3毫升，搖勻，放置15分鐘，即為空白對(duì)照液[3]。

2.4測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

對(duì)2份樣品和金絲桃苷對(duì)照品經(jīng)顯色后，在350～700nm范圍內(nèi)掃描。金絲桃苷對(duì)照品的λmax=530nm處，樣品提取液的λmax=525～527nm，故選擇顯色后在527nm處測(cè)定吸光度。

2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取母液稀釋得系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別取各濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5毫升，按2.3項(xiàng)操作，離心，在527nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，金絲桃苷濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程y=0.0006x+0.00765（R2=0.99905），線性范圍是5.93～380微克 /毫升。

2.6樣品溶液的制備和總黃酮提取率的計(jì)算

取藥材粗粉2.0克，精密稱取，用乙醇溶液超聲提取。提取液抽濾濃縮，用甲醇定容并依據(jù)試驗(yàn)情況適當(dāng)稀釋，精密量取溶液0.5毫升，按按2.5項(xiàng)操作，測(cè)定吸光度（A），計(jì)算總黃酮的含量及總黃酮的提取率，提取率=樣品中總黃酮的量/藥材重量×100%。

2.7單因素考察

平行條件分別考察乙醇濃度、溫度、提取時(shí)間、料液比、超聲功率在不同水平下對(duì)烏腺金絲桃中總黃酮提取效果的影響。

2.8正交試驗(yàn)

采用L9（34）正交試驗(yàn)安排表進(jìn)行試驗(yàn)，以考察多因素對(duì)提取過程的交互影響，從而篩選出超聲提取最佳工藝。因素及水平設(shè)置見表1。

3 結(jié)果與分析

表1超聲提取法的L9（34）正交因素水平表

表2單因素考察結(jié)果

3.1單因素考察結(jié)果

單因素考察結(jié)果見表2，結(jié)果表明，乙醇濃度、溫度、提取時(shí)間、超聲功率對(duì)總黃酮提取效果有影響，料液比對(duì)提取效果影響不大，確定提取時(shí)料液比為1∶22。依據(jù)結(jié)果確定正交試驗(yàn)各因素的合理水平。

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 ?超聲法提取的正交試驗(yàn)結(jié)果

極差分析結(jié)果的R值大小表明，四種因素對(duì)烏腺金絲桃中總黃酮提取影響程度A>B>D>C，即乙醇濃度>溫度>超聲功率>提取時(shí)間，說明因素A為影響烏腺金絲桃中總黃酮提取率的主要因素;四種因素的K值表明各因素水平的影響程度是A1>A2>A3，B2>B3>B1，C3> C1>C2，D2>D3>D1，綜上所述，理論最佳的工藝條件是A1B2C3D2，即樣品用60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，見表3。

3.3 驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果

按照上述確定的最佳條件，取5份樣品做了5次平行試驗(yàn)，總黃酮平均提取率8.15%，算得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.77%<3%，進(jìn)一步說明正交試驗(yàn)所得的最佳條件為提取烏腺金絲桃總黃酮較為理想的工藝。

4 結(jié)語(yǔ)

以總黃酮提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)的正交試驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇濃度對(duì)烏腺金絲桃中總黃酮的提取影響程度顯著，提取溫度與超聲功率影響次之、提取時(shí)間與料液比影響程度較小;正交試驗(yàn)分析及驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果表明，烏腺金絲桃中總黃酮超聲提取最佳工藝條件是樣品用22倍量的體積分?jǐn)?shù)為60%乙醇采用超聲功率為120W在超聲溫度60℃條件下提取50分鐘，在此條件下總黃酮提取率是8.15%。

參考文獻(xiàn)

[1]周繇.中國(guó)長(zhǎng)白山植物資源志[M].北京：中國(guó)林業(yè)出版社，2010：304.

[2]馬育軒，王艷麗，周海純，等.烏腺金絲桃的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40（06）：125-126.

[3]高彥宇.烏腺金絲桃對(duì)缺血性心臟病模型動(dòng)物的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)理的研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2008.

[4]曹緯國(guó)，劉志勤，邵云，等.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào)，2003，23（12）：2241-2247.

[5]王秀麗，宋志堅(jiān)，王小東，等.正交試驗(yàn)優(yōu)化穩(wěn)心草總黃酮提取工藝[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào)，2012，（22）：192，194.

作者簡(jiǎn)介：薛穎，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，在讀本科生，研究方向：中藥學(xué)。

通訊作者：肖鳳艷，碩士，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院/長(zhǎng)白山動(dòng)植物資源利用與保護(hù)吉林省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，副教授，研究方向：中藥資源開發(fā)。