劉曉玲，梁曉東，崔楊，王婷婷，劉琳，丁銀春，周化，范石虎

曲咪新乳膏是由醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑、硫酸新霉素組成的復(fù)方制劑，每克乳膏含有醋酸曲安奈德1 mg，硝酸咪康唑10 mg，硫酸新霉素3 000 U。適應(yīng)證：用于濕疹、接觸性皮炎、脂溢性皮炎、神經(jīng)性皮炎、體癬、股癬及手足癬等。曲咪新乳膏的已有國家標(biāo)準(zhǔn)[1]中，只制訂了醋酸曲安奈德的含量測定。該方法采用氯仿提取，四氮唑鹽比色法[2]使用紫外分光光度計(jì)測定[3]。其中樣品前處理過程繁瑣，溫度、光照、空氣均會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，且未對硝酸咪康唑的含量[4-5]進(jìn)行測定。本文采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)同時測定兩組分含量[6-9]，試樣前處理簡單且樣品穩(wěn)定，比已有標(biāo)準(zhǔn)更具優(yōu)勢。

1 試藥與儀器

1.1試劑與藥品醋酸曲安奈德對照品(中國食品藥品檢定研究院，生產(chǎn)批號100125-201406)；硝酸咪康唑?qū)φ掌?中國食品藥品檢定研究院，生產(chǎn)批號100213-201406)；硫酸新霉素(宿州億帆藥業(yè)有限公司提供，生產(chǎn)批號 151109)；甲醇(色譜純，美國Tedia)，乙酸銨(分析純，國藥集團(tuán))，水為娃哈哈純凈水；曲咪新乳膏(宿州億帆藥業(yè)有限公司)3批(生產(chǎn)批號：151101、 151102、151103)。

1.2儀器島津LC-20A高效液相色譜儀，安捷倫1260高效液相色譜儀，Agilent SB-C18色譜柱，METTLER TOLEDO MS105DU電子天平。

2 方法和結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent SB-C18(150 mm×4.6 mm，5.0 μm)；流動相：A甲醇∶0.05%乙酸銨(85∶15)，B甲醇∶0.05%乙酸銨(75∶25)，按表1進(jìn)行梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

表1 梯度表

2.2溶液的配制

2.2.1對照品溶液的制備 精密稱取醋酸曲安奈德對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，作為貯備液。精密稱取硝酸咪康唑?qū)φ掌芳s10 mg、移取10 mL醋酸曲安奈德對照品貯備液均置25 mL量瓶中，加入甲醇稀釋定容至刻度，作為對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 精密稱取乳膏約2.0 g，置燒杯中，加甲醇30 mL，置80 ℃水浴中5 min，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在冰浴中冷卻2 h，迅速濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3陰性溶液的制備 取除醋酸曲安奈德及硝酸咪康唑之外的原輔料按配比制成空白基質(zhì)，照“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性溶液。

2.3色譜行為分別精密量取“2.2.1”、“2.2.2”、“2.2.3”項(xiàng)下對照品、供試品、陰性對照溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見圖1。

結(jié)果表明，加入硫酸新霉素的空白基質(zhì)在此液相條件下對主藥峰無干擾，主藥峰拖尾因子均在0.95～1.05之間，理論塔板數(shù)醋酸曲安奈德為2 960，硝酸咪康唑?yàn)?4 686。

2.4線性關(guān)系與范圍配制含醋酸曲安奈德0.1 mg/mL，硝酸咪康唑1 mg/mL的混合對照溶液。

對照品溶液

供試品溶液

陰性溶液

精密量取混合對照溶液1、2、3、4、6 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度。分別吸取20 μL進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以峰面積均值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑的回歸方程分別為Y=39 686.578 1X+5.439 7(r=1.000 0)，Y=2 539.434 6X+34.297 4(r=0.999 6)。

結(jié)論：醋酸曲安奈德在0.01～0.06 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；硝酸咪康唑在0.1～0.6 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12 h取樣，量取20 μL注入液相色譜儀，記錄醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的峰面積。

結(jié)果表明，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑兩組分峰面積的RSD分別為0.34%、0.56%，說明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按照“2.2.2”項(xiàng)下方法配制6份樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的峰面積。

結(jié)果表明，醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑兩組分峰面積的RSD分別為0.18%、0.26%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.7精密度實(shí)驗(yàn)取線性考察項(xiàng)下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算6次的峰面積RSD。

結(jié)果：醋酸曲安奈德RSD=0.16%，硝酸咪康唑RSD=0.21%，精密度良好。

2.8定量限和檢測限取混合對照貯備液定量稀釋，按“2.1” 項(xiàng)下方法測定，以S/N=10計(jì)算，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的定量限分別為0.28 ng、0.8 ng，按S/N=3計(jì)算，醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的定量限分別為0.084 ng、0.2 ng。

2.9回收率實(shí)驗(yàn)配制含醋酸曲安奈德0.408 mg/mL，硝酸咪康唑4.032 mg/mL的混合對照貯備液。

稱取空白基質(zhì)各2.0 g置各燒杯中，再精密量取混合對照儲備液4、5、6 mL加入燒杯，照“2.2”項(xiàng)下方法配制含醋酸曲安奈德、硝酸咪康唑?yàn)闃?biāo)示量注80%、100%、120%的樣品溶液，每個濃度各3份，結(jié)果見表2。

表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：醋酸曲安奈德平均回收率100.52%，RSD=0.62%，硝酸咪康唑平均回收率99.93%，RSD=0.86%。

曲咪新乳膏的標(biāo)示量為每克乳膏含有醋酸曲安奈德1 mg，硝酸咪康唑10 mg。

2.10含量測定取三批次樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理樣品，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按照外標(biāo)法計(jì)算樣品中醋酸曲安奈德和硝酸咪康唑的含量，結(jié)果見表3。

表3 三批含量測定結(jié)果

3 結(jié)論

由于醋酸曲安奈德與硝酸咪康唑均可溶于甲醇，醋酸曲安奈德在0.01～0.06 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，硝酸咪康唑在0.1～0.6 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，所以醋酸曲安奈德與硝酸咪康唑檢查項(xiàng)中的供試品可以共用。

由于曲咪新乳膏中的基質(zhì)在甲醇中溶解，甲醇提取物中不可避免的殘留有部分基質(zhì)而影響被測成分分析，還可能會污染色譜柱，故將樣品處理過程中置于冰浴中2 h，既可除去基質(zhì)對樣品的影響，還可避免污染色譜柱，試驗(yàn)表明冰浴2 h后迅速使用微孔濾膜濾過，樣品中的乳膏基質(zhì)大部分可以除去，能夠滿足分析需要。

醋酸曲安奈德在藥典[10]中有使用甲醇∶水(60∶40)作為流動相進(jìn)行含量測定的，但該方法保留時間較長且不能同時對兩組分進(jìn)行含量測定，本文中的方法增加了硝酸咪康唑的含量分析，使得曲咪新乳膏的測定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步完善，可以更為準(zhǔn)確靈敏地控制乳膏質(zhì)量。