趙麗霞 張新新 劉浩 陳賽娟 高曉磊 吳雅清 朱秀同 趙玉龍
1.瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司
2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)山區(qū)研究所
雞毒支原體病是由雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum,MG)引起的一種以呼吸道感染和氣囊炎為主要癥狀的慢性呼吸道疾病,可以通過(guò)水平和垂直兩種方式傳播,且常繼發(fā)或并發(fā)新城疫、傳染性支氣管炎、大腸桿菌病等傳染病,造成很大的經(jīng)濟(jì)損失,目前疫苗免疫是防控該疾病的主要措施。
雞毒支原體活疫苗可以最大限度地降低支原體引起的產(chǎn)蛋損失,并取代多種日齡蛋雞同場(chǎng)飼養(yǎng)的雞場(chǎng)中的支原體野毒株,不僅能有效地預(yù)防產(chǎn)蛋損失,而且能防止野毒株在雞群中的定植,因此,雞毒支原體活疫苗免疫接種在禽業(yè)生產(chǎn)中占有重要的地位。本文就市場(chǎng)在售的4種雞毒支原體活疫苗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)對(duì)比,通過(guò)CCU測(cè)定和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),對(duì)疫苗質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)估,為市場(chǎng)應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持。
1.疫苗:購(gòu)自國(guó)內(nèi)不同廠家的雞毒支原體活疫苗(F36株)3家,進(jìn)口疫苗1家,分別標(biāo)記疫苗A、B、C、D。
2.培養(yǎng)基:CM2培養(yǎng)基,配制方法參照中國(guó)獸藥典2015版。
3.SPF雞:購(gòu)自斯派福瑞SPF雞。
4.SPF雞飼養(yǎng)隔離器:瑞普公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1.活菌滴度測(cè)定。按照疫苗說(shuō)明書(shū)對(duì)疫苗進(jìn)行復(fù)溶,每100羽份疫苗加3.0 mL CM2培養(yǎng)基稀釋后,用于活菌滴度測(cè)定。
(1)CCU測(cè)定:取10支內(nèi)裝1.8 ml CM2培養(yǎng)基的圓底試管,在第1管中加入0.2 ml稀釋好的疫苗,充分震蕩混勻后從第1管中吸出0.2 ml加入第2管,做10倍系列稀釋,直至第12管;另取1管裝有2.0 ml的CM2培養(yǎng)基做為陰性對(duì)照。放置生化培養(yǎng)箱37℃靜置培養(yǎng)。每日觀察培養(yǎng)基顏色變化情況,10 d后進(jìn)行結(jié)果判定,培養(yǎng)基顏色由紅色變?yōu)槌赛S色(pH值下降≥0.5)的最后一稀釋管作為CCU測(cè)定的結(jié)果。每種疫苗做3個(gè)平行,取最低的CCU值為最終測(cè)定結(jié)果。
(2)CCU50測(cè)定:方法類CCU測(cè)定,取稀釋好的疫苗0.2 ml至裝有1.8 ml CM2培養(yǎng)基的圓底試管中做10倍系列稀釋至10-11,再分別從10-7、10-8、10-9、10-10、10-11管中各取 0.2 ml加入至裝有 1.8 mlCM2培養(yǎng)基的小管中,每個(gè)稀釋度設(shè)6個(gè)重復(fù),放置生化培養(yǎng)箱37℃靜置培養(yǎng)。每日觀察培養(yǎng)基顏色變化情況,10 d后進(jìn)行結(jié)果判定,統(tǒng)計(jì)每個(gè)稀釋度培養(yǎng)基顏色變化(pH值下降≥0.5)的小管數(shù),按照Reed Muench法計(jì)算半數(shù)變化單位(CCU50)。
2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
(1)安全檢驗(yàn):每種疫苗按10羽份/只,免疫7日齡SPF雞,10只/組,觀察14 d。免疫前與免疫后14 d剖檢前逐只稱重,記錄體重及剖檢時(shí)氣囊癥狀。每種疫苗免疫組雞單獨(dú)放置一臺(tái)隔離器內(nèi)飼養(yǎng)。
(2)效力檢驗(yàn):每種疫苗按1羽份/只,免疫7日齡SPF雞,8只/組,同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組(6只SPF雞免疫滅菌生理鹽水),免疫5周后進(jìn)行MG R株強(qiáng)毒的氣溶膠攻毒;攻毒后14 d剖檢,觀察氣囊病變,并進(jìn)行病變記分,記分標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)獸藥典2015版。每種疫苗免疫組雞單獨(dú)放置一臺(tái)隔離器內(nèi)飼養(yǎng)。
進(jìn)口疫苗D的活菌計(jì)數(shù)結(jié)果最高,比國(guó)產(chǎn)苗高約2個(gè)滴度。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表1。
(1)安全檢驗(yàn):各組疫苗免疫雞只均無(wú)明顯臨床癥狀,剖檢時(shí)氣囊均無(wú)病理?yè)p傷。10倍劑量免疫后,其中疫苗C組的雞只日增重量最大,對(duì)雞生長(zhǎng)影響最小。增重實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
(2)效力檢驗(yàn):攻毒后從第8天起,陰性對(duì)照組雞只開(kāi)始出現(xiàn)啰音,疫苗免疫組均無(wú)啰音癥狀出現(xiàn);兩周后剖檢,記錄氣囊發(fā)病情況,對(duì)照組有5只雞的氣囊出現(xiàn)2分以上的病變,實(shí)驗(yàn)成立。計(jì)算每組的平均氣囊保護(hù)率,其中進(jìn)口疫苗D的攻毒保護(hù)率為62.5%,在4組中最低。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。
表1 各組疫苗活菌計(jì)數(shù)結(jié)果
表2 各組疫苗對(duì)免疫雞增重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表3 各組疫苗攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果
通過(guò)CCU及CCU50的測(cè)定,3種國(guó)產(chǎn)雞毒支原體活疫苗(F36株)均低于進(jìn)口疫苗,但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,在抵抗強(qiáng)毒攻擊方面進(jìn)口疫苗明顯遜于國(guó)產(chǎn)苗。雞毒支原體活疫苗(F36株)能有效的抵抗強(qiáng)毒的攻擊,但不同廠家的疫苗對(duì)雞只的增重影響有差異,綜合評(píng)價(jià),疫苗C的質(zhì)量最優(yōu)。
5-30日齡是雛雞最容易感染雞毒支原體的日齡,雞毒支原體感染對(duì)雛雞造成的危害比成雞嚴(yán)重得多,早期免疫接種非常重要,雞毒支原體引起的氣囊病變大多是不可逆的,早期感染給后期康復(fù)帶來(lái)長(zhǎng)期的不利影響。用雞毒支原體F株接種的雞可有效預(yù)防野毒的感染,弱毒F株能逐步取代雞場(chǎng)中的野毒,從而達(dá)到清除野毒支原體的目的。因此,為了預(yù)防雞毒支原體的早期感染,對(duì)小日齡雛雞接種雞毒支原體F株活疫苗非常必要。