瑤藥過墻風的化學成分研究

羅 迪，黃云峰，謝集照，黃清泉，邱 莉

（1.廣西醫(yī)科大學藥學院，廣西 南寧 530021；2.廣西中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022；3.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，廣西 南寧 530021）

過墻風為馬鞭草科大青屬植物臭茉莉（Clerodendrum philippinum Schauer var. simplex Moldenke）的全株，別名臭芙蓉、臭屎茉莉等，主要分布在廣西、貴州等地區(qū)，廣西瑤族群眾長期使用過墻風的根、枝葉入藥，具有祛風除濕、活血止痛、清熱解毒等功效［1］。相關文獻表明過墻風枝葉中主要含有黃酮類、萜類及甾醇類成分，具有抗氧化、護肝、抑菌等生物活性［2-6］。為了進一步闡明過墻風的化學成分，本課題組對過墻風的乙醇提取物進行了分離純化，從中分離鑒定了8個化合物，所有化合物均為首次從過墻風中分離得到，現(xiàn)將結果報道如下。

1 儀器與材料

Bruker Avance Ⅲ-600 型核磁共振儀（Bruker 公司）；分析型HPLC 為島津LC-20A，色譜柱為WondaSil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm，日本GL Science公司），檢測器為PDA；制備型HPLC 為島津LC-6AD，色譜柱為YMC-Pack ODS-A（250 mm×20 mm，10 μm，日本YMC公司），檢測器為SPD-20A；Sephadex LH-20（美國Pharmacia 公司）；MCI（75～150 μm，日本Mitsubishi 公司）；ODS（40～63 μm，德國Merck公司）；柱色譜用硅膠（200～300目，青島海洋化工有限公司）；其他試劑均為分析純。

過墻風新鮮枝葉于2016 年采自廣西壯族自治區(qū)賀州市八步區(qū)蓮塘鎮(zhèn)，經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定為馬鞭草科大青屬臭茉莉Clerodendrum philippinum Schauer var.simplex Moldenke 的枝葉，藥材標本（GQF-01）存放于廣西醫(yī)科大學藥學院天然藥物化學實驗室。

2 提取與分離

將干燥的過墻風莖葉13.8 kg 用10 倍量的80%乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮得乙醇提取物2.0 kg。乙醇提取物經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇梯度洗脫），按TLC檢測，合并洗脫液得到7個組分Fr.1～7。Fr.2（49.6 g）經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-乙酸乙酯100∶0→0∶100）分離得到10 個組分Fr.2A～2J。Fr.2C 經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯40∶0.5∶0.8→0∶0∶1）、Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離得到化合物6（21.4 mg）。Fr. 2E（9.3 g）經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離得到2 個組分Fr.2E1～2E2。Fr. 2E2（4.2 g）經(jīng)硅膠柱色譜（環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯50∶5∶8→5∶5∶8）分離得到3 個組分Fr.2E2A～2E2C。Fr.2E2C用甲醇重結晶后得到化合物2（34.3 mg）。Fr. 2F（1.5 g）經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離得到3 個組分Fr. 2F1～2F3。Fr. 2F3 用甲醇重結晶后得到化合物1（57.5 mg）。Fr.2G（9.5 g）經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）分離得到4 個組分Fr. 2G1～2G4。Fr. 2G2（2.4 g）經(jīng)ODS 柱色譜（甲醇-水10∶90→100∶0）分離得到5 個組分Fr. 2G2A～2G2E。Fr. 2G2B（478.3 mg）經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇）、半制備HPLC（甲醇-水40∶60）分離得到化合物8（16.1 mg，tR= 22 min）。Fr. 2G2C（384.7 mg）經(jīng)半制備HPLC（甲醇-水65∶35）分離得到化合物3（30.8 mg，tR=15 min）。Fr.2G2D（606.5 mg）經(jīng)Sephadex LH-20 柱色譜（甲醇）、半制備HPLC（乙腈-水55∶45）分離得到化合物4（18.6 mg，tR=50 min）、化合物5（85.6 mg，tR=62 min）。Fr.2H（11.3 g）經(jīng)MCI 柱色譜（甲醇-水10∶90→100∶0）、Sephadex LH-20 柱色譜（氯仿-甲醇1∶1）、ODS柱色譜（甲醇-水5∶95→100∶0）及反復硅膠柱色譜（環(huán)己烷-乙酸乙酯10∶1）分離得到化合物7（97.5 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：淡黃色針狀結晶（氯仿-甲醇）。1HNMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 12.93（1H，s，5-OH），10.85（1H，brs，7-OH），8.04（2H，d，J = 8.9 Hz，H-2'，6'），7.11（2H，d，J=8.9 Hz，H-3'，5'），6.68（1H，s，H-3），6.51（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），3.86（3H，s，4'-OCH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ： 163.3（C-2），103.5（C-3），181.8（C-4），161.4（C-5），98.9（C-6），164.2（C-7），94.0（C-8），157.3（C-9），103.7（C-10），122.8（C-1'），128.3（C-2'，6'），114.6（C-3'，5'），162.3（C-4'），55.5（4'-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［7］，故鑒定化合物1為刺槐素。

化合物2：黃色針狀結晶（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：13.09（1H，s，5-OH），10.78（1H，brs，7-OH），8.08（2H，d，J=8.9 Hz，H-2'，6'），7.15（2H，d，J=8.9 Hz，H-3'，5'），6.91（1H，s，H-3），6.66（1H，s，H-8），3.91（3H，s，6-OCH3），3.81（3H，s，4'-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：163.3（C-2），103.0（C-3），182.1（C-4），152.7（C-5），131.4（C-6），157.3（C-7），94.3（C-8），152.4（C-9），104.1（C-10），122.8（C-1'），128.3（C-2'，6'），114.6（C-3'，5'），162.2（C-4'），59.9（6-OCH3），55.5（4'-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］報道基本一致，故鑒定化合物2為柳穿魚黃素。

化合物3：黃色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 13.07（1H，s，5-OH），10.51（1H，brs，7-OH），10.35（1H，brs，4'-OH），7.92（2H，d，J = 8.8 Hz，H-2'，6'），6.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-3'，5'），6.78（1H，s，H-3），6.59（1H，s，H-8），3.75（3H，s，6-OCH3）；13CNMR（150 MHz，DMSO-d6）δ： 163.8（C-2），102.4（C-3），182.1（C-4），152.7（C-5），131.3（C-6），157.3（C-7），94.2（C-8），152.4（C-9），104.0（C-10），121.2（C-1'），128.4（C-2'，6'），115.9（C-3'，5'），161.1（C-4'），59.9（6-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［9］，故鑒定化合物3為粗毛豚草素。

化合物4：淡黃色晶體（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ： 13.33（1H，s，14-OH），5.01（1H，s，11-OH），4.97（1H，m，H-16），3.64（1H，m，H-17a），3.57（1H，m，H-17b），3.36（1H，m，H-1a），3.10（1H，dd，J=15.3，9.7 Hz，H-15a），2.92（1H，dd，J=15.4，7.1 Hz，H-15b），2.66（1H，dd，J=17.0，14.7 Hz，H-6a），2.39（1H，dd，J=17.2，2.5 Hz，H-6b），1.67（1H，dd，J=14.6，2.5 Hz，H-2a），1.67（1H，dd，J=14.6，2.5 Hz，H-5），1.47（1H，m，H-2b），1.42（1H，m，H-3a），1.30（3H，s，20-CH3），1.23（1H，m，H-3b），1.19（1H，m，H-1b），0.91（3H，s，19-CH3），0.90（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：35.8（C-1），18.6（C-2），40.7（C-3），32.9（C-4），49.7（C-5），34.9（C-6），204.2（C-7），109.3（C-8），140.9（C-9），40.3（C-10），131.7（C-11），154.5（C-12），110.8（C-13），157.8（C-14），28.1（C-15），85.7（C-16），62.8（C-17），33.1（C-18），21.4（C-19），17.3（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［10］，故鑒定化合物4為Villosin B。

化合物5：黃色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：13.92（1H，s，14-OH），6.82（1H，s，H-15），4.73（2H，s，H-17），3.34（1H，m，H-3a），2.66（2H，m，H-6），1.84（1H，dd，J=12.4，5.0 Hz，H-5），1.75（1H，m，H-2a），1.60（1H，m，H-2b），1.50（1H，m，H-1a），1.45（1H，m，H-3b），1.41（3H，s，19-CH3），1.29（1H，dt，J=13.7，3.9 Hz，H-1b），0.98（3H，s，20-CH3），0.96（3H，s，18-CH3）；13CNMR（150 MHz，CDCl3）δ： 40.9（C-1），19.2（C-2），37.0（C-3），41.0（C-4），50.0（C-5），35.9（C-6），206.6（C-7），111.2（C-8），135.0（C-9），33.7（C-10），131.8（C-11），155.7（C-12），116.2（C-13），154.0（C-14），103.8（C-15），150.9（C-16），57.7（C-17），33.3（C-18），18.7（C-19），21.8（C-20）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［11］，故鑒定化合物5為12，17-epoxy-11，14，16-trihydroxy-17（15→16）-abeo-abieta-8，11，13，15-tetraen-7-one。

化合物6：白色片狀晶體（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 5.34（1H，m，H-6），5.24（1H，dd，J=15.2，8.2 Hz，H-22），5.17（1H，dd，J=15.2，7.6 Hz，H-23），4.69（2H，m，H-27），3.52（1H，m，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 37.4（C-1），31.8（C-2），72.0（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.1（C-7），32.1（C-8），50.3（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.8（C-12），42.5（C-13），57.0（C-14），24.5（C-15），28.9（C-16），56.0（C-17），12.2（C-18），19.6（C-19），40.3（C-20），21.0（C-21），137.2（C-22），130.2（C-23），52.1（C-24），148.8（C-25），20.4（C-26），109.7（C-27），25.9（C-28），12.3（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［12］，故鑒定化合物6為3β-stigmasta-4，22，25-trien-3-ol。

化合物7：淡黃色蠟狀固體（環(huán)己烷-乙酸乙酯）。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ： 5.72（1H，s，H-4），5.23（1H，dd，J=15.3，8.2 Hz，H-22），5.18（1H，dd，J=15.2，7.3 Hz，H-23），4.70（1H，s，H-26a），4.69（1H，s，H-26b），1.65（3H，s，27-CH3），1.18（3H，s，19-CH3），1.01（3H，d，J=6.6 Hz，21-CH3），0.83（3H，t，J=7.4 Hz，29-CH3），0.72（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ： 35.9（C-1），34.1（C-2），199.7（C-3），123.9（C-4），171.7（C-5），33.1（C-6），32.2（C-7），35.8（C-8），54.0（C-9），38.8（C-10），21.2（C-11），39.7（C-12），42.5（C-13），56.1（C-14），24.4（C-15），28.8（C-16），56.0（C-17），12.3（C-18），17.5（C-19），40.3（C-20），20.9（C-21），137.1（C-22），130.4（C-23），52.1（C-24），148.7（C-25），109.7（C-26），20.4（C-27），25.9（C-28），12.3（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［13］，故鑒定化合物7為（22E，24R）-stigmasta-4，22，25-trien-3-one。

化合物8：黃色粉末（甲醇）。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：9.88（1H，s，3-CHO），8.14（1H，d，J=7.7 Hz，H-5），8.08（1H，s，H-2），7.46（1H，d，J=8.0 Hz，H-8），7.26（1H，td，J=8.2，1.4 Hz，H-7），7.22（1H，td，J=7.5，1.1 Hz，H-6）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ： 139.7（C-2），120.1（C-3），187.4（3-CHO），123.6（C-4），122.4（C-5），125.0（C-6），113.1（C-7），125.7（C-8），138.9（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致［14-15］，故鑒定化合物8為3-吲哚甲醛。

4 討 論

本實驗運用各種色譜分離手段對廣西瑤藥過墻風的化學成分進行了研究，從其乙醇提取物中分離鑒定得到8個化合物，包括3個黃酮類化合物（1～3）、4個萜類化合物（4～7）和1 個吲哚類化合物（8）?；衔?、2具有抗腫瘤活性［16-17］，化合物3、4對癌細胞具有一定的細胞毒性［10，18］。本課題組對過墻風化學成分的研究結果可為進一步開展過墻風生物活性的研究提供參考。