◆作者：郝燕娟 劉麗英 黃佳吟 洪英達(dá)

◆單位：廣州匯標(biāo)檢測(cè)技術(shù)中心，廣東廣州510670

乳酸（學(xué)名：2-羥基丙酸），分子式是C3H6O3。它是一個(gè)含有羥基的羧酸，分子結(jié)構(gòu)式為CH3CH（OH）COOH，有自聚合性。乳酸作為一種重要的有機(jī)酸，廣泛應(yīng)用于食品、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、醫(yī)藥、飼料、日用品、化工等領(lǐng)域。

在常溫狀態(tài)下，兩個(gè)乳酸分子中的羥基和羧基會(huì)發(fā)生聚合，形成乳酸酐，如果不水解用液相的方法檢測(cè)乳酸的結(jié)果會(huì)有差異，原因就是乳酸自聚合形成酸酐。在酸度調(diào)節(jié)劑檢測(cè)乳酸含量的液相方法檢測(cè)中，需要水解把聚合的乳酸酐打開(kāi)形成游離的乳酸之后進(jìn)行檢測(cè)，如果沒(méi)有進(jìn)行水解直接檢測(cè)，只檢測(cè)的是游離乳酸，不代表實(shí)際產(chǎn)品中真實(shí)的乳酸含量，檢測(cè)的結(jié)果不準(zhǔn)確。本文將乳酸原料以及乳酸產(chǎn)品（酸度調(diào)節(jié)劑）進(jìn)行水解處理，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方法，建立酸度調(diào)節(jié)劑中乳酸檢測(cè)方法，為企業(yè)檢測(cè)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器），萬(wàn)分之一分析天平，超聲波清洗儀。

1.1.2 試劑與藥品

純水（符合GB/T 6682一級(jí)水的要求）、乙腈（色譜純）、磷酸（優(yōu)級(jí)純）、乳酸對(duì)照品（Dr.Ehrenstorfer，CAS 號(hào) 50-21-5），純度≥89.9%。乳酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

圖1 乳酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1.1.3 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)使用的樣品為市面均可購(gòu)得的酸度調(diào)節(jié)劑以及80%的乳酸原料。按GB/T 14699.1的規(guī)定抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取樣。然后按照GB/T 20195的規(guī)定制備樣品，混勻，裝入磨口瓶中，備用。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試劑配置

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配置

準(zhǔn)確稱取乳酸標(biāo)準(zhǔn)品20mg（精確至0.1mg），加水溶解并定容至10mL棕色容量瓶，此為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4℃保存，保存期為一個(gè)月。

1.2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液的配置

取乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水逐級(jí)稀釋成約為 100、250、500、1000、2000μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 水解處理

準(zhǔn)確稱量試樣1 g（精確至0.0001 g）于100 mL小燒杯中，加入10mL水和20mL1mol/L NaOH溶液于沸水浴中水浴5min（或煮沸5min），冷卻至室溫，用（1+3）鹽酸調(diào)節(jié) pH約為2.1～2.3，轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過(guò)濾。取濾液稀釋，使最后稀釋液乳酸的濃度落在工作曲線之內(nèi)。取部分稀釋液過(guò)0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測(cè)定。

1.3.2 不水解處理

準(zhǔn)確稱量試樣1 g（精確至0.0001 g）于100 mL容量瓶中，加入60mL水，在50℃水浴中超聲提取20min，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，過(guò)濾。取濾液稀釋，使最后稀釋液乳酸的濃度落在工作曲線之內(nèi)。取部分稀釋液過(guò)0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測(cè)定。

1.4 色譜條件

1.4.1 色譜柱

Hypersil GOLD aQ(4.6×250mm，5μm)或相當(dāng)者。

1.4.2 色譜條件

流動(dòng)相：0.1%磷酸：乙腈=97.5：2.5

流速：1.0mL/min

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：20μL

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，在210nm處的色譜圖見(jiàn)圖2與圖3，按1.4色譜條件下，乳酸的理論塔板數(shù)分別為21526、23186，供試品溶液中的分離度大于1.5，乳酸得到很好的分離。

2.2 線性關(guān)系

配制濃度為97.763、244.4075、488.815、977.63、1955.26μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾后供液相色譜儀測(cè)定。以乳酸色譜峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得線性方程為Y=0.0076x-0.0063。結(jié)果顯示，乳酸在 97.763～1955.26μg/mL 范 圍內(nèi)的線性良好，相關(guān)系數(shù)（R2）為1.0000。

圖2 對(duì)照品溶液1000μg/mL

圖3 供試品溶液

2.3 精密度試驗(yàn)

本文以濃度為 500μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液對(duì)儀器進(jìn)行精密度的測(cè)試，按1.4色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，乳酸的保留時(shí)間和峰面積基本穩(wěn)定，保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.54%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.35%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

表1 80%乳酸原料試驗(yàn)結(jié)果

表2 酸度調(diào)節(jié)劑試驗(yàn)結(jié)果

2.4 比較試驗(yàn)

2.4.1 取市售80%乳酸原料6份，按1.3.1項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進(jìn)樣測(cè)定含量。另取市售80%乳酸原料6份，按1.3.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

2.4.2 取酸度調(diào)節(jié)劑6份，按1.3.1項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進(jìn)樣測(cè)定含量。另取酸度調(diào)節(jié)劑6份，按1.3.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果詳見(jiàn)表2。

3 討論與小結(jié)

結(jié)果表明乳酸由于其特殊性，如果不進(jìn)行水解處理，其檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際配方值差異較大，而且不進(jìn)行水解的結(jié)果回收率不穩(wěn)定，可能會(huì)因不同的產(chǎn)品的加工工藝而受影響。而進(jìn)行水解處理的產(chǎn)品，無(wú)論是原料還是加工后的產(chǎn)品，結(jié)果都比較接近標(biāo)準(zhǔn)值，結(jié)果也相對(duì)穩(wěn)定，回收率均能達(dá)90%以上，能滿足檢測(cè)的需求。如果沒(méi)有進(jìn)行水解直接檢測(cè)，只檢測(cè)的是游離乳酸，不代表實(shí)際產(chǎn)品中真實(shí)的乳酸含量，檢測(cè)的結(jié)果不準(zhǔn)確，由此可能會(huì)引起含量不達(dá)標(biāo)的一系列糾紛。因此在該液相色譜條件下，乳酸原料或是添加了乳酸的酸度調(diào)節(jié)劑的產(chǎn)品，應(yīng)該選用水解的前處理進(jìn)行檢測(cè)，才能保證數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。本文方法操作簡(jiǎn)便、快速、可作為制定酸度調(diào)節(jié)劑中乳酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。