劉 娜，張曉林，彭嘉宜，劉 芳

（佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥工程學(xué)院，廣東佛山528000）

納米生物技術(shù)是利用現(xiàn)代多種學(xué)科技術(shù)加工成納米粒徑物質(zhì)用來研究生命現(xiàn)象的技術(shù)。納米材料粒徑大多在1～100 nm范圍，當(dāng)物質(zhì)到達(dá)納米尺寸后，其性能發(fā)生突變，出現(xiàn)特殊性能，如小尺寸效應(yīng)、表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)等。其生物學(xué)特性便于它們高效攜帶各類小分子物質(zhì)，如核酸、蛋白質(zhì)、小分子藥物等，且納米材料的大小、形狀及表面特性可以依照需要來設(shè)計(jì)與調(diào)整。隨著對(duì)新型納米材料的深入研究以及納米顆粒在腫瘤檢測(cè)、診斷、治療方面的持續(xù)研究應(yīng)用，納米醫(yī)學(xué)經(jīng)歷了前所未有的發(fā)展，甚至產(chǎn)生了新學(xué)科，即納米腫瘤學(xué)［1-2］。本文探討納米生物技術(shù)在淋巴瘤方面的研究情況。

1 淋巴瘤的現(xiàn)狀

惡性淋巴瘤（malignant lymphoma，ML）是源于淋巴造血系統(tǒng)的一大類腫瘤，大體可分為霍奇金淋巴瘤（Hodgkin Lymphoma，HL）和非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin Lymphoma,NHL）。在國內(nèi)，非霍奇金淋巴瘤所占比例遠(yuǎn)高于霍奇金淋巴瘤，其中B細(xì)胞淋巴瘤最常見，占據(jù)85%，且發(fā)病率呈增高趨勢(shì)。

淋巴瘤的診斷同其他腫瘤一樣，一般是首先由臨床醫(yī)生依據(jù)臨床表現(xiàn)以及血液、骨髓、超聲等實(shí)驗(yàn)室檢查疑是該病，然后通過病變組織的病理檢驗(yàn)而確診。但是淋巴瘤的早期臨床表現(xiàn)并不典型，尋求早期診斷方法或標(biāo)志物成為研究熱點(diǎn)。

目前惡性淋巴瘤的臨床治療主要包括手術(shù)、聯(lián)合化療、造血干細(xì)胞移植等。大多數(shù)非霍奇金淋巴瘤的一線治療方案是R-CHOP方案為主的綜合治療，即利妥昔單抗聯(lián)合環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿、潑尼松化療，完全緩解率較高，但易產(chǎn)生較嚴(yán)重毒副作用，且淋巴瘤的異質(zhì)性高，仍有相當(dāng)多患者復(fù)發(fā)/耐藥［3-4］。因此復(fù)發(fā)/難治性使得常見的B細(xì)胞淋巴瘤成為當(dāng)前基礎(chǔ)與治療研究的焦點(diǎn)和熱點(diǎn)。

淋巴瘤細(xì)胞表面表達(dá)標(biāo)志性分子，為治療提供了理想靶點(diǎn)，如CD20、CD22、CD30等。CD20是一類表達(dá)于所有成熟B細(xì)胞以及成熟B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，目前利妥昔單抗是第Ⅰ代抗CD20單抗，第Ⅱ代CD20單抗處在臨時(shí)試用階段。CD22只選擇性表達(dá)于正常和惡性的成熟B淋巴細(xì)胞，60%～80%的B細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)CD22。

2 納米生物材料的類型

隨著研究的深入，納米生物材料的種類越來越多，分類方法復(fù)雜，大體可分為兩大類。1）以有機(jī)分子作為主要材料，如脂質(zhì)體、樹枝狀大分子等。脂質(zhì)體在許多腫瘤研究中被用作藥物遞送載體［5-6］。在核磁共振成像中用作造影劑的樹枝狀分子已經(jīng)起到了重要輔助作用,負(fù)載藥物或靶標(biāo)分子的樹枝狀分子又有望成為藥物遞送載體和腫瘤的選擇性成像［7-8］。2）以無機(jī)材料作為納米顆粒的中心，如磁性顆粒、金屬、二氧化硅等，中心外面依據(jù)需要修飾多種有機(jī)物質(zhì)，如多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸等。

另外，量子點(diǎn)是一種由Ⅱ-Ⅵ族元素（如 CdTe，CdSe，ZnS等）或Ⅲ-Ⅴ族元素（如 InP，InAs等）組成的粒徑在1～10 nm之間的熒光半導(dǎo)體納米材料，與有機(jī)熒光染料相比，其光譜特征優(yōu)良和光化學(xué)穩(wěn)定，從而引起生物醫(yī)藥領(lǐng)域的廣泛關(guān)注［9-10］。

3 納米技術(shù)與淋巴瘤

3.1 納米技術(shù)與淋巴瘤的成像檢測(cè)

腫瘤的早期精確診斷是提高治愈率的關(guān)鍵。影像學(xué)尤其是分子影像學(xué)的快速發(fā)展在疾病的早期診斷、藥物篩選、實(shí)時(shí)評(píng)價(jià)治療效果以及診療一體化等方面發(fā)揮著越來越重要的作用。分子影像學(xué)的核心之一是高特異性、高親和力、安全的影像探針。相對(duì)于傳統(tǒng)的分子形探針，納米探針具有影像信號(hào)強(qiáng)度大、靶向效果好、代謝動(dòng)力學(xué)可控等顯著的優(yōu)點(diǎn)，近年來得到了飛速發(fā)展［11］。

Zhong H等［12］制備了一種DNA-量子點(diǎn)籠型細(xì)胞探針，可用于快速定性、精確定量分析B淋巴瘤細(xì)胞，與通常的細(xì)胞標(biāo)記法相比，該探針顯示更高的熒光強(qiáng)度，且此種功能材料可長時(shí)間保存不變質(zhì)。馬旭妍等［13］利用免疫性磁性納米球?qū)崿F(xiàn)了對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌病人淋巴結(jié)穿刺物中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞的快速高效準(zhǔn)確檢測(cè)，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。韓青林等［14］將碘化物近紅外熒光染料復(fù)合到介孔硅納米顆粒中得到一種增強(qiáng)型近紅外介孔硅納米顆粒，腫瘤中持續(xù)至少10 d還可檢測(cè)到熒光信號(hào)，在體內(nèi)外淋巴瘤成像中具有良好的溶解性和代謝穩(wěn)定性。體外實(shí)驗(yàn)時(shí)該納米顆粒還可通過滯留效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤。Christina等［15］利用PEG-藕聯(lián)表面增強(qiáng)拉曼散射染料標(biāo)記金納米顆粒，可以同時(shí)檢測(cè)到3種惡性B細(xì)胞的特異表面蛋白，有助于提高流式細(xì)胞儀檢測(cè)白血病和淋巴瘤等血液腫瘤的特異性和敏感性。Soubhagya等［16］利用磁性納米顆粒藕聯(lián)抗CD20抗體實(shí)現(xiàn)特異性循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)與有效分離。

3.2 納米材料作為抗淋巴瘤藥物的載體

納米載體能很好地?cái)y帶、穩(wěn)定釋放淋巴瘤常用化療藥物。目前許多材料被用來構(gòu)建遞送抗淋巴瘤藥物的納米顆粒，如石墨烯、金屬納米顆粒、介孔二氧化硅、脂質(zhì)體、DNA等。

Ander等［17］利用負(fù)載依地福新的脂質(zhì)納米顆?？擅黠@減輕藥物的溶血毒性，延長藥物血漿濃度，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中提高藥物在淋巴結(jié)富集濃度，減慢腫瘤的生長速度。Du L等［18］將阿霉素負(fù)載于石墨烯-聚乙二醇獲得納米復(fù)合物，其阿霉素的載藥率接近于100%，水溶性與穩(wěn)定性較好，體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)提示該復(fù)合物未降低阿霉素對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的毒性。單永鋒等［19］利用聚左旋乳酸和聚乙烯醇作為膜殼材料，制備包裹阿霉素和油酸修飾的氧化鐵納米顆粒，它可提高體外磁共振及超聲顯像效果，其聯(lián)合超聲可增強(qiáng)阿霉素對(duì)DLBCL細(xì)胞株SU-DHL4的細(xì)胞毒作用，從而誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡，對(duì)ML診療一體化具有潛在應(yīng)用價(jià)值。

唐亞芳［20］等制備了靶向淋巴瘤細(xì)胞的DNA折紙載體，載體載藥后提高了阿霉素的穩(wěn)定性并延緩其釋放，與游離阿霉素相比，折紙載藥系統(tǒng)明顯提高了K299細(xì)胞的凋亡率，且能抑制細(xì)胞增殖。

3.3 納米材料提高抗淋巴瘤藥物的靶向性

為使載藥納米顆粒能更有效地靶向腫瘤組織，并減輕毒副作用，研究人員嘗試用特異性的靶向治療分子負(fù)載于納米顆粒。

3.3.1 CD20分子靶向

CD20分子是治療B細(xì)胞淋巴瘤理想的靶抗原?？笴D20抗體在體內(nèi)的半衰期短，效果溫和，但是多次用藥后易耐藥。此外，由于免疫檢查點(diǎn)的存在，腫瘤細(xì)胞容易發(fā)生免疫逃逸。因此，從抗體作用機(jī)制和腫瘤微環(huán)境出發(fā)，構(gòu)建多功能抗體提高療效是臨床抗體靶向治療亟待解決的問題。近年來，基于納米技術(shù)、材料的特點(diǎn)與發(fā)展，納米載體技術(shù)的遞送系統(tǒng)為解決上述問題提供了完美的解決方案。

Nevala W K等［21］利用白蛋白、紫杉醇和利妥昔單抗制成CD20抗體靶向納米遞送系統(tǒng)，提高了B細(xì)胞淋巴瘤的靶向性和化療藥物的療效。Song L等［22］利用PEG修飾磁性Fe304納米顆粒，修飾后的納米顆粒水溶液穩(wěn)定性、生物相容性良好。又偶聯(lián)多個(gè)利妥昔單抗美羅華，形成多價(jià)納米探針，多價(jià)探針明顯促進(jìn)CD20陽性淋巴瘤細(xì)胞的凋亡，且促凋亡作用隨抗體數(shù)的增加而增加。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示，小鼠生存期明顯延長。腫瘤生長速度較為緩慢，小鼠體重可維持在一定范圍內(nèi)。多價(jià)納米探針在72 h時(shí)仍然累積于腫瘤區(qū)域，說明此探針具有良好的體內(nèi)靶向效果，為臨床淋巴瘤分子成像提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

Zhou S等［23］利用Amine-PEG2000-Biotin修飾介孔二氧化硅納米顆粒（MSNs）為載體基礎(chǔ)，聯(lián)接抗CD20的利妥昔單抗，并負(fù)載細(xì)胞毒性藥物多柔比星制成納米復(fù)合體，其生物相容性好，毒副作用小，其載藥率和包封率分別是約25%、45%，具有pH值響應(yīng)性的控釋藥物性能，在酸性環(huán)境中促進(jìn)藥物釋放，對(duì)于CD20+B細(xì)胞淋巴瘤具有特異性的靶向性功能、增強(qiáng)的抗腫瘤活性以及較強(qiáng)的凋亡誘導(dǎo)能力。Li H等［24］應(yīng)用納米技術(shù)將兩種不同類型的CD20抗體（I型和II型）用聚乙烯亞胺載體交聯(lián)，構(gòu)建一種抗CD20納米抗體梳，同游離的抗體藥物相化，該納米抗體梳能顯著延長荷瘤小鼠的總體生存率和中位生存時(shí)間，降低荷瘤小鼠的腫瘤負(fù)荷。更為重要的是，該納米抗體梳對(duì)利妥昔單抗耐藥的非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞仍然具有很好的殺傷效果。

3.3.2 CD20和PD-L1分子雙靶向

程序性死亡受體-1（programmeddeath 1，PD-1）是T細(xì)胞表面表達(dá)的共刺激分子，抑制T細(xì)胞在免疫應(yīng)答反應(yīng)中的激活，可能為腫瘤細(xì)胞提供免疫逃逸導(dǎo)致腫瘤發(fā)生［25］。以PD-1為靶點(diǎn)的免疫調(diào)節(jié)可喚起機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，對(duì)抗腫瘤治療具有重要的意義。

Wand J等［26］利用高分子聚乙烯亞胺構(gòu)建CD20和PD-L1分子雙靶向納米抗體團(tuán)簇，發(fā)現(xiàn)納米抗體團(tuán)簇可以更長時(shí)間的結(jié)合在靶細(xì)胞表面，持續(xù)作用時(shí)間更持久，對(duì)Daudi細(xì)胞除了具有增殖抑制和細(xì)胞毒性作用外，還具有抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用和程序性細(xì)胞死亡作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究表明，抗體團(tuán)簇組比單抗組具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果，減輕腫瘤負(fù)荷效果好。其機(jī)制可能是抗體團(tuán)簇通過抗CD20抗體特異性靶向腫瘤細(xì)胞，抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路，恢復(fù)CTL細(xì)胞的抗腫瘤活性，兩種抗體協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用。

3.3.3 CD22分子靶向

CD22是免疫球蛋白超家族中的成員，限制性地表達(dá)于成熟B細(xì)胞和大多數(shù)B淋巴瘤細(xì)胞表面，以CD22為靶點(diǎn)，進(jìn)行腫瘤免疫治療已經(jīng)成為免疫研究熱點(diǎn)之一。

張美嬌等［27］利用PEG聚合物、唾液酸等修飾量子點(diǎn)，負(fù)載CD22得到了功能性納米熒光材料，其粒徑分布均勻，熒光性能良好，低生物毒性，對(duì)細(xì)胞表面跨膜糖蛋白 CD22具有較強(qiáng)的靶向性，但未做體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。Chen W C等［28］利用負(fù)載阿霉素的靶向CD22的脂質(zhì)體納米顆粒,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該納米顆粒具有作為治療B細(xì)胞惡性腫瘤的替代方法的潛力。

3.4 納米抗體/藥物與淋巴瘤

納米抗體是由駱駝科動(dòng)物缺失輕鏈的天然重鏈抗體的可變區(qū)組成的單域基因工程抗體，相對(duì)分子量僅為15×103。與傳統(tǒng)抗體相比，其具有穩(wěn)定性強(qiáng)、可溶性好、易表達(dá)，免疫原性低、穿透力強(qiáng)等特點(diǎn)［29］。

孫赟等課題組［24，30］利用納米技術(shù)將I和Ⅱ型兩種抗CD20抗體偶聯(lián)制備納米抗體團(tuán)簇。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與游離抗體相比，抗體團(tuán)簇誘導(dǎo)凋亡能力大大增強(qiáng)，后期又同時(shí)將I型抗CD20抗體與具溫敏功能的高分子長鏈（PI-4-R）連接而構(gòu)建成納米抗體。相比游離單克隆抗體，它能夠賦予母代抗體不具備凋亡誘導(dǎo)功能，并通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性作用和抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用等發(fā)揮作用，且該作用能夠被納米粒子所特有的EPR效應(yīng)進(jìn)一步協(xié)同增強(qiáng)，從而具有更強(qiáng)大的體內(nèi)外抗腫瘤作用。

雄黃在腫瘤治療中的應(yīng)用日益為人們所關(guān)注,但是臨床中用到的雄黃復(fù)方制劑是粒徑在微米級(jí)的雄黃，存在臨床用藥量大、生物利用度低等缺點(diǎn)。采用納米技術(shù)解決難溶性雄黃的生物利用度、降低毒副作用等問題是目前雄黃研究熱點(diǎn)之一。姜爽等［31］研究發(fā)現(xiàn)，相比水飛雄黃，相同劑量的納米雄黃在相同作用時(shí)間下，可明顯抑制B細(xì)胞淋巴瘤Raji細(xì)胞的增殖，破壞其亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)而引起其凋亡。

3.5 納米技術(shù)與淋巴瘤的熱療

腫瘤熱療是利用物理能量加熱人體全身或局部，利用正常組織和腫瘤細(xì)胞對(duì)熱敏感性的差異，使腫瘤組織溫度上升到有效治療溫度，并維持一定時(shí)間，達(dá)到既能使腫瘤細(xì)胞凋亡、又不損傷正常組織的治療目的。熱療法主要包括磁熱療、熱療法等，對(duì)于手術(shù)與放、化療等治療手段有明顯的增效和補(bǔ)充作用。納米材料尤其是納米金屬材料具有良好的熱學(xué)性能和能量吸收聚集作用，以它作為介質(zhì)，同時(shí)負(fù)載抗腫瘤藥物，在外界物理刺激的作用下，可以顯著提高熱療法對(duì)淋巴瘤的效果以及靶向性。

X Qu等［32］研究發(fā)現(xiàn)光熱治療霍奇金淋巴瘤細(xì)胞時(shí)，引起結(jié)合負(fù)載CD30抗體納米金顆粒的癌細(xì)胞廣泛損傷，對(duì)照組細(xì)胞只有輕微少量的損傷。Kouji Tanaka等［33］利用磁鐵陽離子脂質(zhì)體作為人工高熱的加熱介質(zhì)，與單獨(dú)高溫治療相比，顯著提高了熱療效率。

鉑納米顆粒對(duì)熱療的作用就不同。鉑納米顆粒具有抗腫瘤活性，且抗氧化性能好。Yoko等［34］利用鉑納米顆粒預(yù)處理人類骨髓單核細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞和人類皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞，后再熱療。發(fā)現(xiàn)納米鉑顆粒以劑量依賴性方式顯著抑制熱療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。表明納米鉑和熱療的組合可導(dǎo)致熱療脫敏。

3.6 納米技術(shù)與淋巴瘤的基因治療

基因治療歷經(jīng)30多年的研究，新的編輯技術(shù)出現(xiàn)極大推動(dòng)了基因治療的發(fā)展，基因治療取得成功，還需要理想的基因載體，目前所用的載體主要分為病毒載體和非病毒載體兩大類。病毒載體的轉(zhuǎn)染效率較高，但副作用較大，并且有可能引起基因損傷，限制了其治療中的應(yīng)用。納米載體作為非病毒載體，具有獨(dú)特的物理和化學(xué)性質(zhì)，在介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染方面有一些潛在的優(yōu)勢(shì)［35］，如生物相容性良好、粒徑小、相對(duì)容易制備，結(jié)構(gòu)可控，易于修飾，可實(shí)現(xiàn)基因的靶向遞送、具有較高的電勢(shì)和比表面積，所以基因載量較大，并能有效防止基因被機(jī)體內(nèi)的核酸酶降解等。

Christopher等［35］利用脂質(zhì)納米顆粒將靶向Mcl-1的siRNA遞送到套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。Martucci等［37］的研究表明藕聯(lián)特異免疫型肽的硅基納米顆粒生物相容性好、靶向性的B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞攝入率高，成功負(fù)載bcl-2-siRNA并表達(dá)。Uckun等［38］設(shè)計(jì)多肽納米顆粒遞送靶向CD22ΔE12的siRNA，證明他們的CD22ΔE12siRNA-納米顆?？梢郧玫虲D22ΔE12并抑制B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞生長。耶魯大學(xué)Imran等［39］研究人員構(gòu)建一種包封抗miRNA-155的聚乳酸乙醇酸納米顆粒，在體內(nèi)它能安全、有效地沉默基因，體外能有效遞送重組RNA，并能抑制miR-155的表達(dá)和減慢前體B細(xì)胞腫瘤的體內(nèi)生長。

雖然納米材料作為基因治療的載體仍處于研究發(fā)展的早期階段，但目前的研究結(jié)果已提示基于納米顆粒的靶向基因遞送系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)，表明對(duì)于淋巴瘤臨床使用的治療有巨大潛力，為進(jìn)一步提高基因治療的靶向性和療效提供了可能。

4 小結(jié)

目前發(fā)現(xiàn)納米技術(shù)在淋巴瘤的應(yīng)用研究中，具有提高淋巴瘤細(xì)胞快速精確檢測(cè)、具有緩釋藥物、精確靶向、增強(qiáng)藥物療效以及減低毒副作用等作用。雖然納米技術(shù)在淋巴瘤應(yīng)用研究大部分仍限于體外細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，距離臨床應(yīng)用中還有一段路要走。但是，納米生物技術(shù)在腫瘤領(lǐng)域中所展現(xiàn)的優(yōu)越性預(yù)示著它在淋巴瘤等腫瘤中的應(yīng)用前景很廣闊。