周俊

【摘要】目的：探討莪術(shù)揮發(fā)油對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的可能作用機(jī)制。方法：采用RT-PCR法，檢測(cè)在不同劑量組下VEGF-C和VEGFR-2的mRNA的表達(dá)。結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示：莪術(shù)油高、中劑量組VEGF-CmRNA較陰性對(duì)照組顯著降低;莪術(shù)油高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA較陰性對(duì)照組顯著增加。結(jié)論：莪術(shù)油能抑制宮頸癌hela的增殖，可能與其降低VEGF-C和VEGFR-2的mRNA的表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 莪術(shù)油;? hela細(xì)胞;?? 血管生成

【中圖分類號(hào)】R715【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】2095-6851（2019）02-248-01

腫瘤微生態(tài)系統(tǒng)理論認(rèn)為， 腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為是腫瘤微生態(tài)系統(tǒng)重建其系統(tǒng)內(nèi)營(yíng)養(yǎng)聯(lián)系的結(jié)果， 而腫瘤的血管化是其重建營(yíng)養(yǎng)聯(lián)系的一種表現(xiàn)。因此， 干擾腫瘤的血管化過(guò)程是抑制腫瘤的有效途徑。而開(kāi)發(fā)血管生成抑制劑治療腫瘤已經(jīng)成為當(dāng)前抗腫瘤研究領(lǐng)域的一大熱點(diǎn) 。莪術(shù)油可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管生成，促進(jìn)機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)等，可較好地直接干預(yù)或輔助治療惡性腫瘤 [1]。本課題通過(guò)體外培養(yǎng)人宮頸癌 Hela 細(xì)胞，初步探討莪術(shù)油有效提取物體外抗腫瘤血管生成的可能性機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株、動(dòng)物及藥物：人宮頸癌Hela細(xì)胞株，購(gòu)自武漢大學(xué)保藏中心。溫莪術(shù)藥材購(gòu)于四川雙流縣溫郁金基地，經(jīng)鑒定為姜科植物溫郁金的干燥根莖。采取壓榨粗油經(jīng)水蒸汽精制法制備莪術(shù)揮發(fā)油。超純RNA提取試劑盒、HiFi-MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒，購(gòu)于CWbio.Co.Ltd。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1Real Time PCR法檢測(cè)VEGF-C、VEGFR-2mRNA的表達(dá)將Hela細(xì)胞給予藥物干預(yù)，分組如下：陰性對(duì)照組、莪術(shù)油組：根據(jù)IC50的計(jì)算結(jié)果，設(shè)計(jì)出高、中、低劑量，繼續(xù)分別培養(yǎng) 72 小時(shí)。提取組織樣本中總RNA并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。采用2-△△CT法進(jìn)行數(shù)據(jù)的相對(duì)定量分析，其中△△CT=（Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因）-（Ct陰性對(duì)照基因-Ct內(nèi)參基因）。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS17.0軟件系統(tǒng)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行分析，計(jì)量資料用表示，各組間兩兩比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，P<0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1VEGF-C mRNA表達(dá)結(jié)果莪術(shù)油高、中劑量組 VEGF-C mRNA與陰性對(duì)照組比較顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;莪術(shù)油低劑量組VEGF-C mRNA與陰性對(duì)照組比較略微下降，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（表1）。

3.2VEGFR-2 mRNA表達(dá)結(jié)果莪術(shù)油高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA與陰性對(duì)照組比較顯著降低，且呈一定的計(jì)量依賴關(guān)系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（表2）。

4討論

腫瘤血管生成、切斷腫瘤組織獲得營(yíng)養(yǎng)途徑已經(jīng)成為新的抗腫瘤治療靶點(diǎn)，而且也成為抗腫瘤治療中熱門的研究?jī)?nèi)容[2]。腫瘤新生血管與正常組織器官的血管相比，其血管少或無(wú)平滑肌成分，對(duì)神經(jīng)調(diào)控、血管活性物質(zhì)的反應(yīng)明顯下降，血管組織內(nèi)缺乏控制血管生成的調(diào)控機(jī)制等不足的表現(xiàn)[3]。宮頸癌組織中發(fā)現(xiàn)有VEGF-C 及其受體VEGFR-2（ KDR） 的表達(dá)。VEGF-C作用于腫瘤細(xì)胞上的VEGFR-2（ KDR），可能直接影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為。宮頸癌復(fù)發(fā)者中VEGF/VEGFR-2途徑通過(guò)新生血管的形成增加腫瘤的轉(zhuǎn)移[4]。本次研究中，莪術(shù)油高、中劑量組 VEGF-C mRNA與陰性對(duì)照組比較顯著降低，同時(shí)，高、中、低劑量組VEGFR-2mRNA與陰性對(duì)照組比較顯著降低。兩者的結(jié)果呈正相關(guān)性，表明莪術(shù)油可能通過(guò)下調(diào)VEGF這條信號(hào)通路，達(dá)到抗腫瘤血管生成的目的?？鼓[瘤血管生成藥物的優(yōu)勢(shì)在于針對(duì)新生血管，具有特異性， 其作用于運(yùn)動(dòng)的及增殖的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞， 一般不造成骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)或脫發(fā)等副作用。因此對(duì)抗腫瘤血管生成藥物方向的研究具有重要的臨床意義。

參考文獻(xiàn)：

[1]宋愛(ài)莉，許振國(guó).莪術(shù)油對(duì)大鼠乳腺癌癌前病變組織中VEGF mRNA 表達(dá)的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30（4）：679-681.

[2]陳錫強(qiáng)，侯海榮，劉可春等.天然產(chǎn)物抗血管生成的研究進(jìn)展[J].山東科學(xué)，2010，23（6）：34-38.

[3]杜雪，糜若然.VEGF-C 對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展，2011，20（11）：877-855.

[4]趙淑萍，王澤華.宮頸癌中VEGF—C及其受體mRNA的表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)癌癥雜志，2006，16（4）：290-294.