吳 廣，王蕊蕊，熊翅鴻，郭春暉，楊振德

（廣西大學(xué)林學(xué)院，南寧 530004）

川硬皮腫腿蜂（Scleroderma sichuanensis）隸屬于膜翅目（Hymenoptera）腫腿蜂科（Bethyli?dae），是繼管氏腫腿蜂（S.guauiXiao et Wu）后于1994年在四川瀘縣發(fā)現(xiàn)的寄生天牛及其他一些鉆蛀性害蟲的優(yōu)勢外寄生蜂，能在寄生過程中永久性麻痹寄主，具有重要的生物防治價值[1-6]。川硬皮腫腿蜂寄主范圍廣，搜索、攻擊能力強(qiáng)，寄生率高，發(fā)育周期短，繁殖力強(qiáng)，目前已成功地實現(xiàn)利用替代寄主——黃粉蟲（Tenebrio molitor）大規(guī)模繁殖腫腿蜂，初步具有了規(guī)模化生產(chǎn)的能力[7-8]，并展開了一系列防治試驗和應(yīng)用研究，在云斑天牛（Batocera horsfieldi）[9]、銹斑楔天牛（Saperda balsamifera Motschulsky）[10]等部分天牛防治上已取得良好的成效，同時，通過與致病菌結(jié)合進(jìn)行攜菌防治[11]等應(yīng)用研究上也具有較快地發(fā)展。雖然關(guān)于利用黃粉蟲蛹人工繁育川硬皮腫腿蜂及管式腫腿蜂的研究報道較多，但對于如何處理黃粉蟲蛹繁殖川硬皮腫腿蜂的報道尚少見，并且不同蛹齡黃粉蟲蛹最佳乙醇處理時長、替代寄主不同低溫處理及其處理時長等對腫腿蜂寄生效果的影響尚不清楚[12-14]。本文研究乙醇處理不同蛹齡黃粉蟲蛹及不同低溫處理黃粉蟲初化蛹對繁育川硬皮腫腿蜂的影響，旨在找出黃粉蟲蛹乙醇和低溫處理的最佳條件，為利用黃粉蟲蛹高效繁殖川硬皮腫腿蜂提供參考。

1 材料與方法

1.1 寄主和蜂種

黃粉蟲幼蟲購于廣西南寧花鳥市場，在實驗室內(nèi)用麥麩飼養(yǎng)，以少量水果皮補(bǔ)充水分，飼養(yǎng)至3代以上，待幼蟲化蛹時挑出蟲蛹，電子天平稱重，挑選體重大體一致的蟲蛹用于試驗。

川硬皮腫腿蜂（簡稱腫腿蜂）蜂種來源于廣西林業(yè)科學(xué)研究院。選擇健壯、有光澤、活力強(qiáng)的無翅雌蜂作為種蜂。腫腿蜂放在4℃的冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法

1.2.1 乙醇處理不同蛹齡黃粉蟲蛹對繁育腫腿蜂的影響

取若干蛹齡分別為0、12、24、48 h的黃粉蟲蛹分別在75%乙醇中浸泡2 h，將處理后的黃粉蟲蛹取出，用濾紙吸干蛹體表面乙醇，濾紙上放置5 min后，按照腫腿蜂與黃粉蟲蛹2∶2的比例用毛筆將2頭腫腿蜂接入放有黃粉蟲蛹的玻璃指形管（14 mm×75 mm）中，塞好棉塞，置于溫度28℃、相對濕度75%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中。每24 h觀察記錄寄生情況、產(chǎn)卵量、產(chǎn)卵位置并及時取出發(fā)霉的黃粉蟲蛹，持續(xù)觀察30 d左右。

出蜂后代放置到其他處理好的指形管中繼續(xù)飼養(yǎng)，觀察。以蒸餾水處理相應(yīng)蛹齡的黃粉蟲蛹為對照，每個處理20次重復(fù)。

1.2.2 乙醇處理黃粉蟲蛹對繁育腫腿蜂的影響

根據(jù)1.2.1的試驗結(jié)果，節(jié)省成本，選擇將黃粉蟲蛹齡為12 h的黃粉蟲蛹用75%乙醇分別浸泡1、2、3、4 h。處理后，將黃粉蟲蛹取出，用濾紙吸干蛹體表面乙醇，濾紙上放置5 min后，分別以2∶2蟲蜂比接蜂。接蜂方法與1.2.1相同，每個處理20次重復(fù)。

1.2.3 低溫處理黃粉蟲蛹對繁育腫腿蜂的影響

將蛹齡為0 h的黃粉蟲蛹分別置于-6、0、6℃的冰箱中處理6、12、24、36、48 h。將處理結(jié)束后的黃粉蟲蛹在常溫下放置5 min，用吸水紙吸干蛹體表面水分，分別以2∶2蟲蜂比接蜂。接蜂方法與1.2.1相同，每個處理20次重復(fù)。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用IBM SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)統(tǒng)一進(jìn)行Levene方差齊性檢驗，若出現(xiàn)方差不齊（P＜0.05）的情況，對數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換，直至通過方差齊性檢驗（P＞0.05）；產(chǎn)蜂量采用單因素或雙因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇處理2 h對腫腿蜂寄生效果的影響

不同蛹齡的黃粉蟲蛹對腫腿蜂寄生效果影響明顯（表1）。在蒸餾水處理的條件下，黃粉蟲蛹齡小于24 h，出蜂率達(dá)10%以上，蛹齡大于48 h時，出蜂率為0，即腫腿蜂無法寄生2日齡及以后的黃粉蟲蛹。在黃粉蟲蛹相同蛹齡前提下，與對照相比，用75%乙醇處理，可以顯著提高腫腿蜂對黃粉蟲蛹的寄生效果，出蜂率和產(chǎn)蜂量都有明顯提高。用乙醇處理后，腫腿蜂也能寄生2日齡的黃粉蟲蛹。

2.2 不同乙醇處理時間對繁育腫腿蜂的影響

75%乙醇浸泡蛹齡為12 h的黃粉蟲蛹3 h后再進(jìn)行接蜂，腫腿蜂的出蜂率及產(chǎn)蜂量最高，出蜂率為50%，平均產(chǎn)蜂量為27.6頭（表2）。各處理時長之間的產(chǎn)蜂量均有顯著差異（P＜0.05）。黃粉蟲蛹被浸泡處理時間越長，接蜂后的腫腿蜂寄生效果越好；但浸泡處理時間達(dá)到4 h時腫腿蜂寄生效果下降。

2.3 不同低溫和貯藏時長對腫腿蜂繁育的影響

當(dāng)貯藏時長一致時，腫腿蜂產(chǎn)蜂量隨著貯藏溫度的升高有逐漸降低的趨勢；低溫對腫腿蜂產(chǎn)

表1 不同蛹齡黃粉蟲蛹對產(chǎn)蜂率、產(chǎn)蜂量的影響Tab.1 Effect of different ages of Tenebrio molitor pupae on the emergence rate and yield of offspring parasitoids

表2 75%乙醇處理黃粉蟲蛹不同時長對出蜂率、產(chǎn)蜂量的影響Tab.2 Effectofdifferenthourswith75%ethanolforTenebriomolitorpupaeonemergencerateandyieldofoffspringparasitoids

同列數(shù)據(jù)（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）后不同小寫字母表示同一蛹齡不同處理間差異顯著（P＜0.05）。Different lowercase letters（mean±SD）in the same column indicate significant difference among different treatments at the same age（P＜0.05）.蜂數(shù)有顯著影響（P＜0.05），其中，以-6℃處理黃粉蟲蛹的效果最好，平均產(chǎn)蜂量達(dá)18.43頭（表3）。當(dāng)溫度一致時，腫腿蜂產(chǎn)蜂量先隨蟲蛹貯藏時間增加而增多，超過24 h之后，又隨之減少；貯藏時長小于24 h時，各貯藏時長處理后的腫腿蜂產(chǎn)蜂量間存在顯著差異（P＜0.05），超過24 h之后，各處理間的產(chǎn)蜂量間差異不顯著，處理時長為24 h時，腫腿蜂平均產(chǎn)蜂量達(dá)最高值18.46頭。在15種不同蟲蛹處理中，腫腿蜂的寄生效果以-6℃凍藏24 h黃粉蟲蟲蛹的處理方式為最佳，顯著高于其他14種不同蟲蛹處理后的腫腿蜂寄生效果，平均產(chǎn)蜂量達(dá)最大值21.5頭。

表3 不同低溫和貯藏時長處理黃粉蟲蛹對腫腿蜂產(chǎn)蜂數(shù)的影響Tab.3 Effects of different low temperatures and storage duration on the yield of offspring parasitoids

3 結(jié)論與討論

在合適的環(huán)境條件下，腫腿蜂能否成功寄生寄主很大程度上取決于寄主類型及齡期。本試驗結(jié)果表明，黃粉蟲蛹的蛹齡對人工繁育川硬皮腫腿蜂有明顯的影響。腫腿蜂對不同蛹齡的黃粉蟲蛹寄生效果不同，蛹齡越大，寄生效果越差，而且腫腿蜂不能寄生2日齡黃粉蟲蛹。用75%乙醇處理不同蛹齡的黃粉蟲蛹2 h可以顯著提高腫腿蜂對黃粉蟲蛹的寄生效果。

腫腿蜂作為一種活體寄生蜂，對寄主的寄生與寄主的發(fā)育狀態(tài)有密切的關(guān)系。如果寄主死亡，腫腿蜂會放棄在寄主體表產(chǎn)卵，導(dǎo)致繁殖失敗。在適于腫腿蜂寄生活動的環(huán)境條件下，黃粉蟲蛹的發(fā)育及體壁硬化較快，代謝活動強(qiáng)，呼吸損耗營養(yǎng)物質(zhì)多，不利于腫腿蜂寄生。通過低溫和乙醇處理可以延緩黃粉蟲蛹的發(fā)育，提高腫腿蜂的寄生效果[15-16]。本研究中75%乙醇處理蛹齡12 h黃粉蟲蛹最佳乙醇處理時長為3 h，腫腿蜂出蜂率可達(dá)50%，平均產(chǎn)蜂量可達(dá)27.6頭，寄生效果與楊希等[14]報道黃粉蟲1日齡蛹經(jīng)過75%乙醇浸泡，可顯著提高子代蜂產(chǎn)量一致。不同低溫貯藏黃粉蟲初蛹及其貯藏時長對腫腿蜂寄生效果有明顯影響，其中，以-6℃凍藏黃粉蟲蛹24 h為最佳，平均產(chǎn)蜂量達(dá)最大值21.5頭，與胡鎮(zhèn)杰等[13]報道低溫處理黃粉蟲蛹24 h的寄生效果相似。本實驗中的低溫和酒精處理可以延緩黃粉蟲的發(fā)育，使腫腿蜂能夠很好的寄生繁殖，但在腫腿蜂規(guī)?；斯し庇校S粉蟲蛹最佳處理方式仍有待進(jìn)一步的研究。