席冬麗

隨著對(duì)動(dòng)物檢疫工作的發(fā)展與完善，僅依靠獸醫(yī)的經(jīng)驗(yàn)檢查已經(jīng)不能滿足現(xiàn)今動(dòng)物疫病診斷的需求，因此，病理化驗(yàn)室開始發(fā)揮重要作用。如藍(lán)耳病的病原學(xué)檢測方式需要采集病豬的扁桃體、淋巴結(jié)、肺、肝、脾等，利用10%的中性福爾馬林進(jìn)行固定，經(jīng)過石蠟切片、HE染色之后使用光鏡對(duì)樣本進(jìn)行病理學(xué)組織檢查得出結(jié)論，又如豬瘟的病理學(xué)檢查方式主要有免疫熒光實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、核酸探針技術(shù)、基因芯片檢測技術(shù)等。筆者通過對(duì)口蹄疫、豬丹毒、旋毛蟲、巴氏桿菌、豬鏈球菌等病原學(xué)檢測進(jìn)行詳細(xì)描述，著重分析集中常見動(dòng)物疫病的化驗(yàn)室診斷過程。

1豬丹毒化驗(yàn)室診斷方式

1.1涂片鏡檢

采集相關(guān)檢測組織之后將其用瑞氏染色法、革蘭氏染色法進(jìn)行染色，鏡檢過程中可在組織上發(fā)現(xiàn)細(xì)小的桿菌，桿菌菌體呈現(xiàn)或彎或直的狀態(tài)，常單獨(dú)、成對(duì)或大量聚集，尤其在白細(xì)胞內(nèi)或白細(xì)胞周圍常能發(fā)現(xiàn)大量菌體，具有較為明顯的診斷意義。采集動(dòng)物的腎臟、脾臟組織制作抹片檢查出菌體的概率最高。

1.2分離培養(yǎng)

采集新鮮組織之后可將其直接接種于血液瓊脂或血清瓊脂培養(yǎng)基礎(chǔ)上，保持培養(yǎng)溫度在37°C左右，培養(yǎng)時(shí)間約為24～48小時(shí)，培養(yǎng)后明顯可見培養(yǎng)基表面出現(xiàn)透明的露滴狀微小菌落，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長狀態(tài)較為貧瘠。在肉湯內(nèi)表現(xiàn)出程度較輕的渾濁狀態(tài)，會(huì)出現(xiàn)少量的灰白色粘稠狀沉淀物，明膠不會(huì)液化，生長狀態(tài)呈現(xiàn)試管刷狀態(tài)生長。

1.3動(dòng)物接種

采集新鮮組織加生理鹽水制作成為組織懸液，比例為1：10，還可利用肉湯培養(yǎng)物接種，主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為鴿子或小白鼠。組織懸液在鴿子胸肌注射量為0.5ml～1.0ml，小白鼠皮下注射量為0.2ml;純菌液在鴿子胸肌的注射量為0.5ml，在小白鼠皮下的注射量為0.1ml。接種時(shí)間為3～4小時(shí)之后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)死亡狀態(tài)。將死亡動(dòng)物的心臟血液或臟器組織制作成為涂片鏡檢，若發(fā)現(xiàn)豬丹毒桿菌即可確診該疫病。

2旋毛蟲化驗(yàn)室檢測方式

2.1采集樣品

從死亡動(dòng)物身上采集左右橫膈膜肌角，重量在20g以上，使其編碼與死亡動(dòng)物的尸體保持一致，將樣品送入化驗(yàn)室進(jìn)行檢查。

2.2觀察（肉眼）

送來的樣品首先使用肉眼進(jìn)行檢查，如在樣品上課件淡白色、灰白色呈微塵狀的小點(diǎn)，則認(rèn)為該組織疑有旋毛蟲，需要對(duì)病變組織制片進(jìn)行鏡檢。

2.3制片

用化驗(yàn)室內(nèi)的弓形剪刀沿樣品肌理取下可疑部位，并在其他部位取下其他小樣，每種越需要12塊（共24塊），將所取小樣粘貼在夾壓器的玻璃板上，蓋上蓋玻片壓扁并保證螺旋扭緊固定，使壓片保持能看到報(bào)紙上小字的狀態(tài)。

2.4鏡檢

將已準(zhǔn)備好的壓片放置在50～70倍放大的低倍顯微鏡下，或使用旋毛蟲檢驗(yàn)器對(duì)其進(jìn)行觀察，仔細(xì)檢查每一個(gè)小肉塊，絕對(duì)不能漏下任何一個(gè)樣品。

3巴氏桿菌病化驗(yàn)室檢測方式

3.1涂片鏡檢

使用無菌手段從得病或死亡動(dòng)物身上采集新鮮組織作為檢查樣品。血液制作成推片或涂片，其他部分制作觸片或涂片，使用瑞氏染色法、美蘭染色法完成染色工作，若樣品內(nèi)含有巴氏桿菌，鏡檢后可發(fā)現(xiàn)組織內(nèi)存在卵圓形或球桿狀的菌體，菌體兩端染色較濃，呈現(xiàn)出兩級(jí)著色狀態(tài)，若使用革蘭氏染色法則為陰性。

3.2分離培養(yǎng)

將選擇的樣品組織置于鮮血瓊脂平板、瓊脂斜面與普通的肉湯（溫度保持在37°C）中，培養(yǎng)時(shí)間為24小時(shí)。培養(yǎng)后血瓊脂平板上出現(xiàn)細(xì)小、濕潤、圓整且微帶閃光的灰白色露滴狀菌落，在45°折射光線低倍鏡檢查后呈現(xiàn)藍(lán)綠色，且該菌落會(huì)呈現(xiàn)微微的金光，菌落周邊若呈現(xiàn)紅黃光帶則為FG型菌落。瓊脂斜板上會(huì)出現(xiàn)光滑濕潤的灰白色菌落，肉湯內(nèi)則會(huì)出現(xiàn)程度較輕的渾濁狀態(tài)。若菌株較粗糙則會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。

3.3動(dòng)物接種

從得病或死亡動(dòng)物身上采集的新鮮組織與生理鹽水混合，制成1：5或1：10的乳劑，吸取定量上清液或肉湯培養(yǎng)物接種在接受實(shí)驗(yàn)的小動(dòng)物肌肉中、皮下，劑量大約為0.5ml～1ml，以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體型為準(zhǔn)。豬巴氏桿菌對(duì)小白鼠、兔子表現(xiàn)出感染性，注射后約18～24小時(shí)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)死亡;雞巴氏桿菌對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均表現(xiàn)出強(qiáng)烈的感染性，注射后10～24小時(shí)內(nèi)會(huì)出現(xiàn)死亡;牛便是桿菌對(duì)兔子與小白鼠有感染性，但僅表現(xiàn)在腹腔注射，注射后18～24小時(shí)之內(nèi)死亡;羊巴氏桿菌對(duì)兔子的感染性最強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受影響死亡之后，應(yīng)采集其心臟血液或其他器官制作涂片進(jìn)行檢查或?qū)ζ浣M織進(jìn)行分離培養(yǎng)，一旦滿足上述情況，便可確診為巴氏桿菌。

4豬鏈球菌病化驗(yàn)室檢測方式

4.1涂片鏡檢

從得病或死亡動(dòng)物身上采集的新鮮組織使用革蘭氏染色法進(jìn)行染色，之后對(duì)其鏡檢，若該動(dòng)物已患有鏈球菌病，會(huì)出現(xiàn)大量單獨(dú)、成對(duì)或三五相連的革蘭氏陽性球菌，甚至?xí)?0～70個(gè)單球相接后呈長鏈狀。若使用瑞氏染色法可看見菌體周圍出現(xiàn)明顯的莢膜。

4.2分離培養(yǎng)

從得病或死亡動(dòng)物身上采集的新鮮組織至于培養(yǎng)基中，普通瓊脂的斜面上會(huì)出現(xiàn)生長狀態(tài)較為貧瘠，灰白色半透明狀的露滴菌落;血液瓊脂上則出現(xiàn)粘稠狀、光滑且邊緣整齊的半透明露滴菌落，該菌落周圍出現(xiàn)明顯的B型溶血環(huán);馬丁肉湯內(nèi)最開始表現(xiàn)出較為均勻的渾濁狀態(tài)，約48小時(shí)左右之后渾濁物開始下降，而液體逐漸變得清亮。

4.3動(dòng)物接種

將從得病或死亡動(dòng)物身上采集的新鮮組織制作成為5～10倍的生理鹽水懸液，或使用純菌液接種在兔子、小白鼠身上。生理鹽水懸液在兔子腹腔內(nèi)注射的劑量為1.0ml～2.0ml，在皮下注射的劑量為2ml;生理鹽水懸液在小白鼠身上注射的劑量為0.2～0.3ml;純菌液在兔子身上注射的劑量為0.5ml～1ml，皮下注射劑量為1ml。接種后，兔子在12～26小時(shí)之內(nèi)死亡，而小白鼠于18～24小時(shí)之內(nèi)死亡。接種動(dòng)物死亡之后，對(duì)其心臟血液、腹水、肝臟抹片、脾臟抹片等會(huì)進(jìn)行鏡檢，若發(fā)現(xiàn)有大量單獨(dú)、成對(duì)或三五相連的球菌，則為鏈球菌病。

（作者單位：474350河南省南陽市內(nèi)鄉(xiāng)縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）