廣金錢草和金錢草不同部位總黃酮含量研究

1.桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，廣西 桂林 541199；2.桂林醫(yī)學(xué)院，廣西 桂林 541199

廣金錢草為豆科植物廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osb.) Merr.的干燥地上部分，具有利濕退黃、利尿通淋的功效，用于黃疸尿赤、熱淋、石淋、小便澀痛等。金錢草為報(bào)春花科植物過(guò)路黃LysimachiachristinaeHance.的干燥全草，具有利濕退黃、利尿通淋、解毒消腫的功效，用于濕熱黃疸、石淋、熱淋、小便澀痛等[1]。由此可見(jiàn)，廣金錢草和金錢草臨床功效相似，而兩者都含有黃酮類成分[2-3]，本研究以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法對(duì)廣金錢草和金錢草不同部位的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定，考察兩種藥材以及不同藥用部位總黃酮含量，可以對(duì)廣金錢草和金錢草進(jìn)行更好的開(kāi)發(fā)利用，為臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV1100紫外分光光度儀(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；梅特勒托利多EL204電子天平；KQ5200DB超聲儀(昆山市超聲儀器)。

1.2 材料 蘆丁對(duì)照品(批號(hào)：100416-201607，中國(guó)食品藥品檢定研究院)。金錢草采自廣西桂林，廣金錢草采自廣東廉江，均經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院蔡小琳主任中藥師鑒定為報(bào)春花科植物過(guò)路黃和豆科植物廣金錢草。95%乙醇，六水合氯化鋁，三水合乙酸鈉和醋酸等試劑均為分析純。

1.3 材料處理 將干燥廣金錢草和金錢草莖，葉分離備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品0.0109 g(蘆丁含量為97.5%)，用50%乙醇溶液溶解并定容至50 mL容量瓶中，搖勻，得對(duì)照品溶液(2.1255×10-4g/mL)。

2.2 供試品溶液制備 分別精密稱定金錢草和廣金錢草全草0.5 g，葉0.4 g，莖1.0 g置50 mL具塞錐形瓶中，加30 mL 50%乙醇溶液超聲提取30 min[5]，過(guò)濾，并將濾液用50%乙醇溶液定容至50 mL容量瓶中，即得供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品溶液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL分別置于25 mL容量瓶中，分別加入0.1 moL/L三氯化鋁1.0 mL，pH醋酸-醋酸鈉緩沖液1.0 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，在波長(zhǎng)272 nm處測(cè)定吸收值[4]。以濃度X為橫坐標(biāo)，以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，得到回歸方程Y=1167X+0.010，r2=0.999。表明蘆丁在4.251×10-6g/mL～3.4008×10-5g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品溶液1.0 mL，重復(fù)測(cè)定5次，測(cè)得吸光度值，計(jì)算RSD=0.32%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取廣金錢草和金錢草供試品溶液(全草)1 mL，按2.3項(xiàng)加入顯色劑，于0、10、20、30、40、50、60、90 min分別測(cè)定吸光度值，RSD分別為1.13%和0.94%。表明供試品溶液90 min內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好。見(jiàn)表1。

表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

2.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱定已知含量廣金錢草和金錢草供試品溶液(全草)0.5 g，按2.2項(xiàng)下制得供試品溶液，分別加入蘆丁對(duì)照品溶液 0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、3.0 mL，經(jīng)過(guò)顯色反應(yīng)后測(cè)定吸光值。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

表2 廣金錢草加樣回收率實(shí)驗(yàn)

表3 金錢草加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.7 金錢草和廣金錢草各部位總黃酮含量測(cè)定 分別取廣金錢草和廣金錢草莖，葉和全草，按2.2項(xiàng)下制得供試品溶液，經(jīng)過(guò)顯色反應(yīng)，測(cè)得總黃酮含量。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 廣金錢草和金錢草不同部位總黃酮含量測(cè)定

3 結(jié)論

上述研究中發(fā)現(xiàn)，廣金錢草莖、葉和全草的含量分別為0.78%、3.84%和2.33%；金錢草莖、葉和全草的含量分別為0.24%、3.15%和1.61%。由此可見(jiàn)，總黃酮含量在金錢草和廣金錢草各部位含量為廣金錢草葉>金錢草葉>廣金錢草全草>金錢草全草>廣金錢草莖>金錢草莖。廣金錢草各部位的總黃酮含量分別大于金錢草各部位總黃酮含量，而廣金錢和金錢草葉的總黃酮含量最大，其次是全草，莖最小。

本研究使用乙醇做提取溶劑，毒性較小，對(duì)環(huán)境污染較其他試劑少，提取率較高；選用紫外分光光度法做為檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)成本較低。研究中線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、加樣回收率均符合含量測(cè)定要求，采用的總黃酮含量檢測(cè)方法可靠可行。廣金錢草和金錢草中葉的總黃酮含量均最大，莖的含量最小，而廣金錢草葉比金錢草葉的總黃酮含量大。

《中國(guó)藥典》中以夏佛塔苷作為廣金錢草含量測(cè)定指標(biāo)，以槲皮素和山奈素作為金錢草含量測(cè)定指標(biāo)[1]。夏佛塔苷，槲皮素和山奈素均屬于黃酮類成分，而廣金錢草和金錢草藥理作用有相似之處[6]，故本研究測(cè)定廣金錢草和金錢草不同部位總黃酮含量，研究結(jié)果可以為其資源開(kāi)發(fā)和臨床使用提供一定的研究依據(jù)。