接骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王冰華

【摘 要】采用顯微、薄層色譜進(jìn)行鑒別;高效液相色譜測定制劑的含量。大黃、土鱉蟲以顯微鑒別法鑒別;當(dāng)歸、紅花以薄層色譜法鑒別;異補(bǔ)骨脂素在1.023～20.046μg/ml的濃度范圍線性關(guān)系良好，（R2=0.9997）;建立的含量測定方法專屬性、精密度、重現(xiàn)性、準(zhǔn)確性均符合方法學(xué)驗(yàn)證的要求。建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法穩(wěn)定、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于接骨膠囊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】接骨膠囊;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類號】? R715? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 B【文章編號】 1672-3783（2019）05-03-249-01

接骨膠囊是煙臺象楠中醫(yī)整骨醫(yī)院制劑，由土鱉蟲、煅自然銅等10余味中藥組成，具有化瘀消腫，止痛療傷的功效，療效確切可靠。為控制制劑的質(zhì)量，確保用藥安全有效，參考相關(guān)文獻(xiàn)[1，2]，進(jìn)行了質(zhì)量方法的研究，為制劑的質(zhì)量控制提供了科學(xué)的檢測方法。

1 儀器及試藥

生物顯微鏡（上海浦東物理光學(xué)儀器廠）;島津高效液相色譜儀（二元泵，紫外檢測器，LC色譜工作站）。甲醇（天津市永大化學(xué)試劑有限公司）;乙酸乙酯（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司）;乙醇、乙醚（煙臺市雙雙化工有限公司）;甲醇（色譜純，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別 取本品，顯微鏡下觀察：草酸鈣蔟晶粗大（大黃）。體壁碎片深棕色或黃色，其上著生短粗或細(xì)長剛毛（土鱉蟲）。

2.2 薄層鑒別

2.2.1 當(dāng)歸 取樣品4g，加乙醚20ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。取除當(dāng)歸的原料藥，參照供試品溶液的制備方法制備，即得陰性樣品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材0.5g，同法制備，即得對照藥材溶液。吸取上述三種溶液各7μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。

2.2.2 紅花 取樣品內(nèi)容物4g，加80%丙酮溶液20ml，密塞，振搖15分鐘，取上清液，作為供試品溶液。參照上述供試品溶液的制備方法制備，即得陰性樣品溶液。另取紅花對照藥材0.5g，同法制備，即得對照藥材溶液。吸取上述三種溶液各7～8μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。

2.3 含量測定

2.3.1 含量測定藥味的選擇

參考《中藥制劑分析》中的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定原則[3]，處方土鱉蟲、自然銅藥典中原料藥及成方制劑中均沒有含量測定項(xiàng)目，臣藥補(bǔ)骨脂在成方制劑中[4]的檢測項(xiàng)目較多，一般只用甲醇提取即可測定，說明檢測方法成熟，檢測靈敏度高，方法專屬性較好，故擬選定補(bǔ)骨脂為含量測定指標(biāo)進(jìn)行研究。

2.3.2 色譜條件 色譜柱：Techmate C18（250mm×4.6mm）;柱溫：35℃;流動(dòng)相：甲醇-0.1mol/L的磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)至7）（425：575）;流速：1.0ml.min;進(jìn)樣量：20μl;檢測波長：246nm。

2.3.3 線性關(guān)系 精密稱取異補(bǔ)骨脂素對照品10.23mg至100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液，精密量取對照品儲備液5ml置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液1 ml、2 ml、3 ml置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，再取不稀釋的對照品儲備液、對照品儲備液10ml置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見下圖。

接骨膠囊 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

結(jié)論：異補(bǔ)骨脂素在1.023～20.046μg/ml的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.4 供試品溶液的制備 取本品取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理45分鐘，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.5 專屬性 取除補(bǔ)骨脂以外的其它藥材，照[2.3.4]項(xiàng)下制備，制得陰性對照溶液，按[2.3.2]項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，考察異補(bǔ)骨脂素的專屬性，經(jīng)過考察，異補(bǔ)骨脂素專屬性良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取樣品，按照[2.3.4]制備項(xiàng)下制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8h進(jìn)樣，測定主峰峰面積分別為：730456、732215、729854、731985、728697，計(jì)算主峰峰面積的RSD為0.2%，供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.7 精密度 精密量取對照品儲備液5ml置50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積分別為：1714586、1720386、1725489、1714872、1723561、1715645，RSD為0.3%，符合精密度要求。

2.3.8 準(zhǔn)確度 制備高、中、低濃度樣品各三份，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，測定結(jié)果如下表：

2.3.9 含量限度的制定

取2016年3月至6月的接骨膠囊共10個(gè)批次樣品，按[2.3.4]項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備，注入色譜儀測定，計(jì)算接骨膠囊樣品中的異補(bǔ)骨脂素的含量，10批次含測數(shù)據(jù)依次為：0.126、0.126、0.129、0.124、0.124、0.124、0.125、0.129、0.130、0.129（單位：mg/粒），平均含量為0.127mg/粒，由于原料藥有產(chǎn)地、采收季節(jié)的差異，測定結(jié)果下浮20%，即0.127*（1-0.2）=0.101mg/粒，根據(jù)上述結(jié)果定為：接骨膠囊每粒含異補(bǔ)骨脂素不得少于0.10 mg。

3 討論

接骨膠囊為生藥全粉末裝膠囊，顯微鑒別具有經(jīng)濟(jì)、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，方中的君藥土鱉蟲，臣藥大黃顯微特征明顯，專屬性強(qiáng);薄層色譜研究中，參照《中國藥典》一部當(dāng)歸、紅花飲片的方法進(jìn)行鑒別，方法專屬性、重現(xiàn)性良好，訂入標(biāo)準(zhǔn)。此外，本次研究中，對土鱉蟲、骨碎補(bǔ)及延胡索也進(jìn)行了薄層鑒別方法研究，此3味藥陰性樣品均有不同程度的干擾，方法專屬性不符合要求，因此不列入質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。含量測定方法研究中，前期參照補(bǔ)骨脂藥材的方法進(jìn)行了研究，經(jīng)過反復(fù)調(diào)整流動(dòng)相的比例和極性，補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素仍有不同程度的陰性干擾，再次參考“腰痛丸”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)整，調(diào)整后的含量測定方法，異補(bǔ)骨脂素專屬性良好，并通過了方法學(xué)驗(yàn)證，因此列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉緒林.活血壯筋膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，中國醫(yī)藥指南 2012，12（36）：70-72

[2] 張彬，李萍. 跌打活血散中的骨碎補(bǔ)薄層色譜鑒定，山西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 1996，1（27）：15-16

[3] 蔡寶昌.《中藥制劑分析》 全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材 2007，12，218-220

[4] 腰痛丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，《中國藥典》2015年版一部第1654頁